奧沙利鉑靜脈輸液處方工藝優(yōu)化及其穩(wěn)定性考察

蘇晨霞，李健和，易利丹，彭六保（1.湖南新化縣孟公鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，湖南 婁底 417605；.中南大學湘雅二醫(yī)院藥學部，長沙 410011）

1 材料

Waters 2010高效液相色譜儀及486紫外檢測器（美國Waters公司）；AE200電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo儀器上海有限公司）；pHS-3C型酸度計（上海雷磁儀器廠）；STY-2滲透壓摩爾濃度檢測儀（北京漢柏科創(chuàng)儀器技術開發(fā)公司）。

奧沙利鉑原料藥及其對照品（長沙華美醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，原料藥批號:20110113，純度:99.7%；對照品批號:20110127，純度:99.9%）；葡萄糖（濰坊盛泰藥業(yè)有限公司，批號:20110112，純度:99.8%）；甘露醇（廣西南寧化學制藥有限責任公司，批號:20110210，純度:99.90%）；活性炭（溧陽竹溪活性炭有限公司，批號:20110915）；奧沙利鉑靜脈輸液（中南大學湘雅二醫(yī)院藥學部，批號:20110315、20110327、20110328、20110329）；甲醇為色譜純，鹽酸、氫氧化鈉、高碘酸鈉、硫酸、硫代硫酸鈉等試劑均為分析純。

2 方法

2.1 處方工藝優(yōu)化

在參考相關文獻和專利[6-7]的基礎上，考慮到靜脈輸液常用的等滲調節(jié)劑為葡萄糖、氯化鈉、甘露醇等，而奧沙利鉑和氯化物包括各種濃度的氯化鈉有配伍禁忌，故不采用氯化鈉。在確定奧沙利鉑靜脈輸液規(guī)格為100 ml∶100 mg的基礎上進行如下處方與工藝的優(yōu)化。

處方1:奧沙利鉑1.0 g，葡萄糖50 g，5%草酸溶液適量分別調節(jié)藥液pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未調整，注射用水加至1000 ml。工藝1:將50 g葡萄糖投入煮沸的約100 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，加入相當于濃溶液0.1%的活性炭即0.1 g，煮沸15 min后，抽濾脫炭。另將奧沙利鉑1.0 g加入40℃約500 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過葡萄糖溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液適量分別調節(jié)藥液pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未調整，再補加注射用水至1000 ml。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封，116℃熱壓滅菌40 min，即可。

處方2:奧沙利鉑1.0 g，以甘露醇51 g代替處方1中的葡萄糖，其余同處方1。工藝2:取甘露醇51 g，加入70～80℃約600 ml的注射用水中，不斷攪拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.3 g，攪拌，靜置15 min后，抽濾脫炭。取奧沙利鉑1.0 g加入40℃約300 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過甘露醇溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液適量分別調節(jié)pH值至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0及未調整，再補加注射用水至1000 ml。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封，116℃熱壓滅菌40 min，即可。

處方3:奧沙利鉑3.0 g，甘露醇153 g，5%草酸溶液適量調節(jié)藥液pH值至4.0，注射用水加至3000 ml。工藝2:取甘露醇153 g，加入70～80℃約1800 ml的注射用水中，不斷攪拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.9 g，攪拌，靜置15 min后，抽濾脫炭。取奧沙利鉑3.0 g加入40℃約1200 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過甘露醇溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至2850 ml，用5%草酸溶液適量調節(jié)pH值至4.0，再補加注射用水至3000 ml。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封，樣品等分成3份，然后分別在116℃熱壓滅菌40 min、121℃熱壓滅菌15 min、121℃熱壓滅菌30 min，即可。

2.2 質量考察

2.2.1 pH值。按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅥH pH值測定法測定。

上述文獻為解決雙邊匹配問題提供了理論基礎和方法支撐，但還存在以下缺陷：①現(xiàn)有文獻缺乏對具有多種形式偏好信息的雙邊匹配問題的研究。由于匹配主體的知識結構、個體偏好和行為習慣等方面的差異，在雙邊匹配中不同的匹配主體會給出不同形式的偏好信息，例如，主體給出的偏好信息是評價得分和語言短語等形式并存的情形；②現(xiàn)有考慮主體期望的雙邊匹配文獻中期望類型單一，缺乏對含有多種類型主體期望的討論。

2.2.2 滲透壓。按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法測定。

2.2.3 有關物質。取本品，作為供試品溶液；精密量取1 ml，置于100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，量取對照溶液20 μl，注入液相色譜儀，調節(jié)檢測器靈敏度，使主成分峰峰高為滿量程的20%～25%；再取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍，供試品溶液如顯雜質峰，量取各雜質峰面積之和，不得大于對照溶液的主峰峰面積（1.0%）。

2.2.4 熱原。取本品，按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅪD檢查，劑量按家兔體質量每1 kg注射10 ml，應符合規(guī)定。

2.2.5 無菌。取本品，按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅪH檢查，應符合規(guī)定。

2.2.6 含量測定。①奧沙利鉑:按2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅤD，采用高效液相色譜法測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱為Polaris C18-A（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（10∶90，V/V），流速為0.8 ml/min；檢測波長為249 nm；進樣量為20μl；柱溫為25℃。理論板數(shù)按奧沙利鉑峰計不低于 2000。測定法:精密量取本品5 ml，置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒質量的奧沙利鉑對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 ml中含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取上述2種溶液各10μl，注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算，即得。②葡萄糖:精密量取本品2.0 ml，置于250 ml碘量瓶中，精密加入碘液（0.1 mol/L）25 ml，緩緩滴加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 ml，搖勻，在暗處放置15 min后加稀硫酸溶液4 ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定，近終點時加淀粉指示液1 ml，繼續(xù)滴定至藍色消失，并同時將滴定的結果用空白試驗校正。每1 ml的硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）相當于9.909 mg的C6H12O6·H2O。③甘露醇:精密量取本品3 ml，置于200 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取10 ml，置碘量瓶中，精密加入高碘酸鈉溶液[取硫酸溶液（1→20）90 ml與高碘酸鈉溶液（2.3→1000）110 ml混合制成]50 ml，置水浴上加熱15 min，放冷，加碘化鉀試液10 ml，密塞，放置5 min，用硫代硫酸鈉滴定液（0.05 mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液1 ml，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1 ml硫代硫酸鈉滴定液（0.05 mol/L）相當于0.9109 mg的C6H14O6。

2.3 穩(wěn)定性考察

2.3.1 影響因素試驗。取批號20110315的奧沙利鉑靜脈輸液置高溫[（40±2）、（60±2）℃]，低溫0～5℃以及光照（4500±500）lx條件下，于第0、5、10天取樣，考察性狀、pH值、溶液顏色、有關物質、可見異物及含量，并與0 d的數(shù)據(jù)進行比較分析。

2.3.2 加速試驗。取模擬上市包裝的奧沙利鉑靜脈輸液3批，在溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下，于第0、1、2、3、6個月取樣，考察性狀、pH值、溶液顏色、有關物質、可見異物及含量，并與0個月的數(shù)據(jù)進行比較分析。

2.3.3 長期試驗。取模擬上市包裝的奧沙利鉑靜脈輸液3批，在溫度（25±2）℃、相對濕度（60±10）%的條件下，于第0、3、6、9、12個月取樣，考察性狀、pH值、溶液顏色、有關物質、可見異物及含量，并與0個月的數(shù)據(jù)進行比較分析。12個月后仍須繼續(xù)考察，以便確定藥品的有效期。

3 結果

3.1 處方工藝優(yōu)化的考察

各處方工藝優(yōu)化的考察結果分別見表1、表2、表3。

表1 以葡萄糖為等滲調節(jié)劑的樣品質量考察結果Tab 1 Results of quality inspection of samples with glucose as the isotonic regulator

表2 以甘露醇為等滲調節(jié)劑的樣品質量考察結果Tab 2 Results of quality inspection of samples with mannitol as the isotonic regulator

由表1可見，以葡萄糖調節(jié)等滲的奧沙利鉑靜脈輸液在同一滅菌條件不同pH值范圍內，藥液滅菌前后性狀、pH值、可見異物、滲透壓等基本上無明顯變化；滅菌前有關物質檢查均符合規(guī)定，但滅菌后所有藥液有關物質含量均在1%以上；滅菌后奧沙利鉑含量較滅菌前有所降低。故以葡萄糖調節(jié)奧沙利鉑靜脈輸液滲透壓的系列處方均不符合規(guī)定，應予淘汰。

由表2可見，以甘露醇調節(jié)等滲的奧沙利鉑靜脈輸液在同一滅菌條件不同pH值范圍內，除pH值未用5%草酸溶液調節(jié)的藥液pH值下降幅度較大，以及pH 2.5條件下滅菌前后有關物質含量超過2%且滅菌后奧沙利鉑含量較滅菌前下降外，其余進行了pH值調節(jié)的藥液在不同pH值范圍內滅菌前后各項檢查均符合規(guī)定。表明以甘露醇調節(jié)等滲的奧沙利鉑靜脈輸液穩(wěn)定性良好，滅菌前后的滲透壓在人體正常的生理范圍（280～310 mOsmol/kg）內。在此基礎上，并參考國外專利[6]的報道結果，確定本研制開發(fā)的奧沙利鉑靜脈輸液以甘露醇為等滲調節(jié)劑，pH值范圍為3.0～4.5，生產(chǎn)中一般控制pH值在4.0左右。

表3 同一pH值不同滅菌條件下的樣品質量考察結果Tab 3 Results of quality inspection of samples with same pH value under different sterilization conditions

由表3可見，在同一pH值不同滅菌條件下奧沙利鉑靜脈輸液滅菌前后各項考察指標均無明顯變化，并且各項檢查均符合規(guī)定?？紤]到國內外輸液制劑中的滅菌條件多采用116℃熱壓滅菌40 min，故確定本研究開發(fā)的奧沙利鉑靜脈輸液的滅菌條件也為116℃熱壓滅菌40 min。

3.2 最佳處方工藝確定

綜上所述，得奧沙利鉑靜脈輸液的最佳處方為:奧沙利鉑1.0 g，甘露醇51 g，5%草酸溶液適量調節(jié)藥液pH值至3.0～4.5（生產(chǎn)中一般控制pH值在4.0左右），注射用水加至1000 ml。最佳工藝為:取甘露醇51 g，加入70～80℃注射用水約600 ml中，不斷攪拌使溶解后，加入0.5%活性炭即0.3 g，攪拌，靜置15 min后，抽濾脫炭；另將奧沙利鉑1.0 g加入40℃約300 ml注射用水中，不斷攪拌使溶解后，將上述溶液過甘露醇溶液的炭層，混勻后，補加注射用水至950 ml，用5%草酸溶液適量調pH值至3.0～4.5（生產(chǎn)中一般控制pH值在4.0左右），補加注射用水至1000 ml，混勻。測pH值和含量，合格后，精濾，灌封于100 ml玻璃瓶中，116℃熱壓滅菌40 min，即得。

3.3 穩(wěn)定性考察

影響因素試驗中除在光照、高溫（60±2）℃條件下pH值略有升高、有關物質有所增加，以及高溫（60±2）℃條件下顏色略有加深外，其他各項考察指標均無明顯變化。pH值、有關物質及含量的測定結果見表4。

加速試驗中除有關物質有呈上升的趨勢，但仍在＜1.0%的合格范圍內外，其他各項考察指標基本無明顯變化；加速試驗6個月無菌和熱原檢查仍合格。pH值、有關物質及含量的測定結果見表5，表明本品在本加速試驗條件下放置6個月較為穩(wěn)定。

表4 影響因素試驗考察結果Tab 4 Results of influencing factor tests

表5 加速試驗和長期試驗考察結果Tab 5 Results of accelerated test and long-term test

長期試驗12個月后，各項考察指標與0個月比較均基本上無變化，且無菌和熱原檢查仍合格。pH值、有關物質及含量的測定結果見表5，表明本品在長期試驗條件下放置12個月較為穩(wěn)定。有效期暫定為12個月，貯存條件為:遮光、密閉保存。

4 討論

國外專利[6]報道規(guī)格為20 ml∶100 mg的奧沙利鉑注射液的研究結果如下:（1）奧沙利鉑注射液的濃度范圍為1～7 mg/ml，較好濃度范圍為1～5 mg/ml，最佳濃度范圍為2～5 mg/ml。（2）奧沙利鉑注射液在一般常用的枸櫞酸、醋酸、甘氨酸和磷酸等緩沖溶液中不穩(wěn)定，pH值調節(jié)劑一般采用草酸、草酸鈉或二者的混合溶液，且以草酸為最佳。在藥液中草酸的濃度范圍一般為5×10－5～ 1×10－2mol/L，較好的濃度范圍為5×10－5～2×10－3mol/L，最佳濃度范圍為2×10－4～ 4×10－4mol/L。（3）奧沙利鉑注射液pH值范圍一般為2～6，較好范圍為2～5，最佳范圍為3.0～4.5。（4）溶解奧沙利鉑的最佳溫度為40 ℃。（5）奧沙利鉑注射液制備過程中，灌封的容器中充或不充惰性氣體如氮氣對其質量無影響。（6）奧沙利鉑注射液在充或不充氮氣的條件下于121℃分別熱壓滅菌15、30、45、120 min對其質量無影響。（7）溶媒一般采用注射用水、糖溶液（如葡萄糖、甘露醇等）。本研究所得結果與上述專利報道的結果有相似之處，進一步證明本處方及工藝合理、可行。

處方中奧沙利鉑為主藥；甘露醇為等滲調節(jié)劑，調節(jié)輸液的滲透壓至人體正常的生理范圍；草酸為pH值調節(jié)劑，調節(jié)輸液的pH值至3.0～4.5，達最佳pH值范圍；注射用水作為溶媒；活性炭起吸附熱原、助濾脫色的作用。

在參考相關文獻[8-11]的基礎上，采用高效液相色譜法測定奧沙利鉑的有關物質及含量。奧沙利鉑為手性藥物，具有旋光性，故質量考察中不能采用旋光法測定葡萄糖的含量，而是采用碘量法測定葡萄糖含量。

奧沙利鉑水溶液放置時間過長，會不同程度地產(chǎn)生3種降解產(chǎn)物，使其制劑的毒副作用增加。故研制開發(fā)一種不產(chǎn)生上述降解產(chǎn)物、穩(wěn)定性良好且方便臨床應用的奧沙利鉑靜脈輸液是十分必要的。

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