母豬葡萄球菌子宮內(nèi)膜炎的診治

岳建偉，王五臣，高學(xué)龍，朱青

（西平縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南西平 463900）

在規(guī)模化養(yǎng)殖場中，母豬的生產(chǎn)力對養(yǎng)豬場的經(jīng)濟效益起著重要的作用，甚至直接影響整個養(yǎng)豬場的經(jīng)濟效益。母豬子宮內(nèi)膜炎是養(yǎng)豬業(yè)以及豬繁殖障礙病中的主要疾病之一，病因復(fù)雜，發(fā)病率有逐步上升的趨勢，已成為困擾現(xiàn)代規(guī)?；B(yǎng)殖戶的一個重要問題。目前許多集約化養(yǎng)豬場均存在本病，繁殖母豬發(fā)病率達20%以上，多發(fā)于配種(或發(fā)情)后14～20 d、妊娠末期2～3周的母豬和生產(chǎn)5 d后的哺乳母豬。該病除引起子宮內(nèi)膜的炎癥和損傷外，還可以影響胎兒的受精及胚胎的生長發(fā)育和著床，甚至引起胎兒發(fā)生流產(chǎn)和死亡。臨床癥狀主要表現(xiàn)為母豬子宮復(fù)舊時間延長，產(chǎn)后發(fā)情時間推遲，屢配不孕或妊娠后流產(chǎn)等，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。細菌感染被認(rèn)為是本病的重要因素之一。據(jù)報道，發(fā)生母豬子宮內(nèi)膜炎的懷孕母豬與正常懷孕母豬相比，產(chǎn)后初配的天數(shù)和產(chǎn)后受孕天數(shù)都有不同程度的增加，分別增加 14.81 d 和 31.67 d，而情期受胎率卻下降了21.36%,平均配種受胎次數(shù)增加0.51次。在防治本病的過程中，雖然許多養(yǎng)豬場投入了大量的人力物力，但是效果卻不甚明顯，發(fā)病率仍然不見減少，這可能是因為在本病的發(fā)病原因未調(diào)查清楚的情況下，采取的治療措施缺乏針對性，以及盲目使用抗菌藥物不能很好地防治本病的發(fā)生。

母豬子宮內(nèi)膜炎是母豬子宮黏膜的粘液性或化膿性炎癥，多發(fā)于母豬產(chǎn)后幾天，甚至?xí)?dǎo)致流產(chǎn)。本實驗選擇河南某豬場的40頭患有子宮內(nèi)膜炎的母豬中隨機抽取3頭，進行病原鑒定、藥敏實驗以及選擇敏感藥物和對照藥物進行治療，觀察其治療效果，并對其治愈母豬進行配種，觀察其受胎率和產(chǎn)仔數(shù)，為本病的治療積累臨床資料。

一、材料與方法

（一）材料

1.病料來源。河南某豬場患有子宮內(nèi)膜炎的分泌物。母豬子宮內(nèi)膜炎在臨床上主要表現(xiàn)為急性子宮內(nèi)膜炎、慢性卡他性子宮內(nèi)膜炎、慢性卡他性化膿性子宮內(nèi)膜炎和慢性化膿性子宮內(nèi)膜炎。下面就主要概括下其不同的臨床癥狀及其診斷要點。急性子宮內(nèi)膜炎：母豬精神不振食欲下降或不食，鼻鏡干燥，體溫升高，拱背，頻頻排尿、努責(zé)，從陰門中不斷地排出白色或灰白色的含有絮狀物的腥臭膿性分泌物，當(dāng)其臥倒時排出較多；慢性卡他性子宮內(nèi)膜炎：較常見，母豬一般無明顯或輕度的全身癥狀發(fā)生，體溫略有升高，食欲下降或不食，產(chǎn)奶量下降，尿少赤黃，有時發(fā)情正常但是母豬屢配不孕，在沖洗子宮的過程中，會從子宮內(nèi)流出液體并且其液體略微渾濁；慢性卡他性化膿性子宮內(nèi)膜炎：母豬的全身反應(yīng)較輕，逐漸消瘦，發(fā)情周期失常，從陰門中不斷地排出灰白色稀薄膿液，其中尾根、陰門等處上常粘有陰道排出物附著，并形成干痂；慢性化膿性子宮內(nèi)膜炎：從陰門中常排出灰色黃褐色、灰白色分泌物，臥下時較多，粘著于陰門周圍皮膚及尾根。

2.試劑及其藥物。藥敏片根據(jù)藥物使用濃度自行制配，主要成分分別為特效米酰、環(huán)丙沙星、氟哌酸、土霉素、青霉素、制霉菌素、氟苯尼考、多粘菌素、氨芐青霉素和鏈霉素。葡萄球菌平板凝集抗原、葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血清。

3.培養(yǎng)基。普通瓊脂平板、血液瓊脂平板、肉湯培養(yǎng)基、五糖發(fā)酵管、葡萄糖蛋白胨水、V-P、M.R.試劑。

4.器械。生化培養(yǎng)箱，冰箱，冰柜，生化反應(yīng)管，顯微鏡，油標(biāo)卡尺，恒溫培養(yǎng)箱，接種環(huán)，平皿，試管，玻璃板、微量加樣器。

（二）方法

1.病料采集。采集3頭母豬子宮分泌物，對母豬外陰部用消毒液清洗，用滅菌輸精管插入子宮腔，注入生理鹽水20 ml，并立即回抽1.0～1.5 ml，然后將所得混合液移入滅菌試管內(nèi)做好標(biāo)記，保存在冰箱（4℃）內(nèi)備用。

2.細菌分離。將采集的各樣品10 000RPM 離 心 1 min，棄 大 部 分上清，留取0.5 ml上清懸起沉淀，混勻后分別接種血瓊脂平板、巧克力平板，37℃培養(yǎng)24～48 h，再挑選出不同形態(tài)的單菌落進行純培養(yǎng)；純培養(yǎng)得到的菌落分別接種于S.S培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基上進行初步鑒定。

3.細菌鑒定。挑選純培養(yǎng)后的單菌落后，用革蘭氏染液對其染色，觀察其菌落的染色特征及形態(tài)。然后初步鑒定其類屬。將分離到的菌株接種到生化反應(yīng)管對病原菌鑒別。

4.小鼠致病性試驗。將分離的純菌株培養(yǎng)液分別通腹腔途徑接種于小鼠，每只接種菌液0.5～1.0 ml，觀察其結(jié)果。

5.凝集試驗。用鉛筆在潔凈的玻板上方劃上方格并注明待檢血清號碼；取0.2 ml吸管按下列量加待檢血清方格內(nèi)：第一格加0.08 ml，第 二 格 加 0.04 ml，第 三 格 加0.02 ml，第 四 格 加 0.01 ml，血 清用前需放室溫，使其溫度達到20℃左右；每格內(nèi)加葡萄球菌平板凝集抗原0.03 ml，滴在血清附近同時又不要與血清接觸，用牙簽自血清量最小的一格起，將血清與抗原混勻，每份血清用一根牙簽同時輕輕搖動玻板使呈旋轉(zhuǎn)運動；混合完畢后靜置3～4 min然后拿起玻板輕輕轉(zhuǎn)動后將玻板置凝集反應(yīng)箱上均勻加溫，使溫度達到30℃左右，3～5 min后記錄結(jié)果。為保持試驗的準(zhǔn)確性，應(yīng)平行測試3次。

6.分離致病菌的藥敏試驗。

（1） 受試藥物制備：特效米酰、環(huán)丙沙星、氟哌酸、土霉素、青霉素、制霉菌素、氟苯尼考、多粘菌素、氨芐青霉素和鏈霉素配成治療用濃度。

表1 病原菌發(fā)酵試驗結(jié)果

表2 3株細菌的藥敏實驗結(jié)果（mm）

表3 治療效果比較

表4 治愈后母豬的生產(chǎn)性能比較

（2）藥敏紙片的制作方法：選用質(zhì)量較好的定性濾紙，用打孔器打成直徑為6 mm的圓片，每100片放入一個瓶中，高壓滅菌30 min，在60℃烘箱中烘干備用；將藥敏紙片放人配制好的抗菌藥物中，均勻吸取藥液，一般浸泡30 min即可，記錄藥物名稱，于37℃溫箱過夜，于冰箱中保存?zhèn)溆?可保持6個月的有效期 )。

（3）受試菌株：為子宮內(nèi)膜炎的病豬分離菌株。

（4）抑菌試驗：按抑菌實驗室操作規(guī)程進行操作，將金黃色葡萄球菌接種于肉湯瓊脂培養(yǎng)基中，貼上藥敏試紙，37℃培養(yǎng)24 h，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑大小。做四次藥敏試驗然后求其平均抑菌值。抑菌圈20 mm以上為極敏感藥物；l5～20mm為高敏；10～14mm為中敏；10mm以下低敏。

7.治療試驗。

（1）試驗?zāi)肛i的選擇與分組。將河南省某豬場40頭子宮內(nèi)膜炎病豬進行分組治療試驗。將40頭母豬隨機分成2組，治療組A為30頭病豬，對照組B為10頭病豬。

（2）子宮內(nèi)膜炎治療方案。

a.治療組A:對受試母豬先用l0～20 g/L的鹽水溶液沖洗子宮，然后分別按劑量3 mg/kg頭孢噻呋鈉注入子宮，每隔24 h用藥1次，連用3次為1個療程。

b.對照組B：對受試母豬先用10～20 g/L的鹽水溶液沖洗子宮，不注射任何藥物，按平常飼養(yǎng)方式正常飼養(yǎng)。

（3）子宮內(nèi)膜炎療效判定。

治愈：全身癥狀消失，精神食欲恢復(fù)正常，分泌物透明清亮，陰道檢查陰道壁顏色呈粉紅色，子宮炎癥消失，外陰部腫脹消失，正常發(fā)情妊娠。

有效：用藥后全身癥狀基本消失，精神食欲好轉(zhuǎn)，外陰部腫脹不明顯，子宮炎癥緩解，子宮分泌物基本接近正常，陰道內(nèi)有少量異物流出。

無效：用藥后全身癥狀未消失或加重，精神食欲無明顯改觀，子宮炎癥無變化或加重，子宮分泌物未見減少，甚至惡化，與用藥前沒有變化。

（4）對治愈后的母豬進行后期觀察。對治愈的母豬和對照組母豬在正常發(fā)情后采用人工授精的方法進行配種，精液密度為0.45億／ml，活力為0.9級，每頭每次輸入45 ml。母豬在第一次輸精后，間隔6～8 h再重復(fù)輸輸精。配種后分別統(tǒng)計各組母豬的受胎率及產(chǎn)仔數(shù)情況。

二、結(jié)果

（一）分離菌的形態(tài)特征顯微鏡下，菌落為革蘭氏陽性的呈單個，成對或排列成葡萄串狀、無芽胞、無鞭毛細菌。

（二）細菌在各培養(yǎng)基上形態(tài)待定在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上表現(xiàn)為菌落呈圓形、濕潤、不透明、邊緣整齊、表面隆起的金黃色光滑菌落；在血液瓊脂平板菌落形成明顯的溶血；在肉湯培養(yǎng)基中菌落顯著渾濁并且形成沉淀，在管壁上形成菌環(huán)。

（三）生化試驗結(jié)果幾種菌落分別在葡萄糖、麥芽糖、甘露糖、山梨醇、棉子糖、木膠糖、蔗糖、乳糖中均為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。其基本符合葡萄球菌的生化試驗結(jié)果（見表1）。

（四）動物試驗結(jié)果小鼠于接種后24～72 h內(nèi)死亡，剖檢、涂片染色、鏡檢，從小鼠體內(nèi)分離到與接種菌株相同的細菌。

（五）凝集試驗結(jié)果被檢血清與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清發(fā)生凝集反應(yīng)，因此可以確定為該病原菌為葡萄球菌。

（六）藥敏試驗結(jié)果從表2中可以看出頭孢噻呋、林可霉素和特效米酰對3種細菌為高度敏感；氟哌酸各對其為高度敏感，慶大霉素、土霉素和青霉素為低敏感，青霉素對革蘭氏陽性菌及其某些革蘭氏陰性菌有很好的抗菌效果，例如葡萄球菌，肺炎球菌的球菌高度敏感，但本次試驗中青霉素對其為低敏感度。分析其原因可能為該豬場長年超量應(yīng)用青霉素用于治療和預(yù)防，導(dǎo)致豬體對青霉素產(chǎn)生耐藥性。因此,希望有條件的豬場應(yīng)根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選擇敏感藥物,且應(yīng)注意交替用藥,按療程投藥,這樣才能收到較好的治療效果。

（七）治療試驗結(jié)果從表3可以看出，A組使用頭孢噻呋治療，其有效頭數(shù)、有效率、治愈頭數(shù)和治愈率分別為29頭、96.7%、27頭和90%；B組為對照組未使用任何藥物治療，有效頭數(shù)、有效率、治愈頭數(shù)和治愈率分別為8頭、80%、2頭和20%；A組的有效率與治愈率和B組的相比差異顯著(P<0.05)。表明用頭孢噻呋的治療效果明顯好于對照組。

（八）治愈后母豬的后續(xù)生產(chǎn)力觀察由表4可以看出，經(jīng)藥物治療后，2個試驗組共有28頭母豬治愈，正常發(fā)情配種后，A組的受胎頭數(shù)、受胎率和產(chǎn)仔率分別為26頭、93%和96.2%；健康對照組( B組)的受胎頭數(shù)、受胎率和產(chǎn)仔率分別為28頭、93.3%和96.4%。經(jīng)兩個樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性檢驗，A組和對照組（B組）兩組之間，母豬受胎率差異不顯著；經(jīng)單因素方差分析進行差異顯著性檢驗，A組和對照組兩組之間，產(chǎn)仔率差異均亦不顯著。

三、討論

從3頭典型的母豬子宮內(nèi)膜炎分泌物中分離出的致病菌株，經(jīng)過一系列的病原分離，生化試驗，血清學(xué)試驗可以確診為葡萄球菌。

（一）母豬子宮內(nèi)膜炎發(fā)生原因母豬子宮內(nèi)膜炎病原微生物比較復(fù)雜，不同地區(qū)不同情況下分離到的細菌種類和比例也有差異。根據(jù)分離到的菌株數(shù)和病原菌的感染情況，可知葡萄球菌菌株數(shù)量多、感染率最高。葡萄球菌是常見的感染細菌，可引起急性和化膿性炎性感染，這兩種細菌通常在母豬抵抗力降低、配種、產(chǎn)后最易感染。細菌可經(jīng)子宮頸進入子宮，引起子宮內(nèi)膜炎，尤其是產(chǎn)后易并發(fā)子宮內(nèi)膜炎。本研究中分離的主要細菌葡萄球菌表現(xiàn)為單獨致病，同時在許多情況下也可繼發(fā)感染與其他細菌共同導(dǎo)致該病的發(fā)生，這種結(jié)果也進一步驗證了母豬子宮內(nèi)膜炎病原感染的復(fù)雜性。

引起該病的原因的種類很多，除上述提到的微生物感染外，還有其他幾種原因，主要為衛(wèi)生環(huán)境不好，豬臥下時身體上沾有污染的糞尿，產(chǎn)房內(nèi)長期不進行清掃，圈舍衛(wèi)生條件差潮濕，產(chǎn)前沒有進行消毒；操作時的不規(guī)范也可導(dǎo)致該病發(fā)生，主要是在人工授精過程不規(guī)范的輸精，使輸精器械對子宮造成損傷，輸精次數(shù)頻繁等。分娩時的各種刺激因素如產(chǎn)后子宮遲緩、難產(chǎn)、陰道脫出、胎衣不下等均可誘發(fā)該病的發(fā)生。

（二）母豬子宮內(nèi)膜炎治療原則在進行治療子宮內(nèi)膜時，藥物選擇非常關(guān)鍵，本次試驗中，篩選的高敏藥物進行治療該病時，效果明顯比不敏感的藥物青鏈霉素效果好；母豬的使用年限一般為4～5年，由于青霉素使用非常頻繁，反復(fù)多次超量使用導(dǎo)致細菌的耐藥性產(chǎn)生，從而影響青霉素的治療療效。這點啟示我們在以后的疾病治療過程中，應(yīng)該強調(diào)科學(xué)用藥，有條件的豬場可以自己進行敏感藥物的篩選，選擇高敏藥物治療；沒有條件的豬場應(yīng)盡量與當(dāng)?shù)氐墨F醫(yī)衛(wèi)生服務(wù)站合作，做好藥物篩選工作。在選擇合適的藥物后還要注意換藥，減少同一或同類藥物使用的頻率，減少或降低細菌耐藥性發(fā)生機率。隨著現(xiàn)代化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，各類疾病的病原在不斷變化，而且豬子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病原因十分復(fù)雜，因此，在治療前有必要做細菌學(xué)檢查，明確其病原菌，然后篩選敏感藥物來提高療效。

母豬子宮內(nèi)膜炎要及時徹底治療，不要延誤有效治療時間，避免轉(zhuǎn)為慢性炎癥。對提高母豬的繁殖能力及養(yǎng)殖效益都非常重要。該病的發(fā)生又分急性子宮內(nèi)膜炎和慢性子宮內(nèi)膜炎，一般急性子宮內(nèi)膜炎易治療，且治愈時間短，效果好。如果治療不及時或者治療不徹底，可轉(zhuǎn)為慢性子宮內(nèi)膜炎。慢性子宮內(nèi)膜炎治愈時間長且易反復(fù)發(fā)作，部分母豬治療效果不好，易造成屢配不孕，給豬場帶來較嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。因此在母豬子宮內(nèi)膜炎的治療過程中，有效治療時間很關(guān)鍵。

（三）母豬子宮內(nèi)膜炎的預(yù)防措施預(yù)防子宮內(nèi)膜炎，必須加強懷孕母豬的飼養(yǎng)管理，豬欄應(yīng)保持清潔衛(wèi)生，特別是母豬上產(chǎn)床前，母豬及產(chǎn)床一定要清洗干凈，徹底消毒。夏季做到防暑降溫，冬季保暖，欄舍清潔、干燥、通風(fēng)；防止一切不良因素的刺激，增強機體的抵抗力；注意營養(yǎng)，防止維生素缺乏，提供全價飼糧，并飼喂一些青飼料，對防止母豬子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生極為重要。配種前，陰戶、臀部用消毒液清洗，盡量做到無菌操作；接產(chǎn)時，嚴(yán)格消毒，避免接產(chǎn)時造成子宮內(nèi)膜的損傷和細菌的感染；產(chǎn)房要進行嚴(yán)格消毒。

四、結(jié)論

通過提取患有典型的子宮內(nèi)膜炎母豬的子宮分泌物后進行細菌的分離鑒定、生化試驗、凝集試驗后確定引起該病發(fā)生的主要感染菌為葡萄球菌。通過藥敏試驗之后，用高敏藥物頭孢噻呋對其治療后治愈率達到90%，對治愈后的母豬進行后期生產(chǎn)性能與正常母豬進行比較，受胎率、產(chǎn)仔數(shù)沒有明顯差異。