不同產(chǎn)地苦茶槭嫩芽清除自由基活性比較研究

李繼武　鄭秀文

摘 要：苦茶槭嫩芽是安徽傳統(tǒng)皋茶生產(chǎn)的主要原料，含有很強(qiáng)的具清除自由基作用的活性物質(zhì)。為了研究比較安徽省內(nèi)不同產(chǎn)地的苦茶槭嫩芽清除自由基的活性，分別在黃山、萬佛山、瑯琊山、霍山和大蜀山各選擇5株具代表性的苦茶槭樹進(jìn)行采樣分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5個(gè)采樣點(diǎn)的苦茶槭嫩芽對(duì)DPPH自由基的清除作用活性差異不顯著，表明在安徽省內(nèi)，原料產(chǎn)地不是影響皋茶清除自由基活性的主要因素。研究還發(fā)現(xiàn)不同供試單株的自由基清除率有較大差異，在25株采樣單株中，其活性最強(qiáng)的單株鮮樣清除自由基活性比最弱者強(qiáng)9.7%，表明高活性單株選擇具有較大潛力。

關(guān)鍵詞：苦茶槭；皋茶；清除自由基活性；產(chǎn)地；安徽省

中圖分類號(hào) S571.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2013）08-08-03

苦茶槭（Acer ginnala Maxim. subsp. theiferum （Fang） Fang）是茶條槭（Acer ginnala Maxim）的亞種[1-2]，與原種的主要區(qū)別僅在于苦茶槭的葉較?。楸〖堎|(zhì)）不分裂或不明顯3～5裂，而原種茶條槭葉片較厚（紙質(zhì)）常較深的3～5裂。苦茶槭主要分布于黃河以南地區(qū)，茶條槭主要分布于黃河以北地區(qū)[1-2]。雖然早在2 000多年前，安徽皖南山區(qū)的百姓就將野生的苦茶槭嫩芽葉加工成茶飲用，并至今仍作為保健茶在市場(chǎng)少量銷售，被稱作“皋茶（高茶）”，有降壓和清肝明目等作用，同時(shí)具有消除夏天黃汗的作用，并曾長(zhǎng)期在江浙一帶作為繅絲工人夏季的特殊飲料[2-5]，但一直沒有正式申報(bào)相關(guān)產(chǎn)品，而其原種茶條槭早在2 000年就申報(bào)批準(zhǔn)為保健茶（衛(wèi)食健字（2000）批號(hào)0589）?，F(xiàn)代大量研究表明苦茶槭和茶條槭的嫩芽主要含有多酚類，包括沒食子槭糖酯和黃酮類等成分，藥理活性主要為清除自由基、抗氧化、抗腫瘤、降糖和抗菌等作用[6-14]。由于安徽是苦茶槭的主要分布區(qū)，又是皋茶的起源地，為了進(jìn)一步摸清安徽皋茶優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源，打造安徽苦茶品牌，筆者對(duì)安徽省不同產(chǎn)地的苦茶槭嫩芽的清除自由基活性進(jìn)行比較研究，為皋茶生產(chǎn)及相關(guān)產(chǎn)品申報(bào)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品 苦茶槭樣品分別采自黃山湯口（林緣，海拔430～580m）、瑯琊山（林緣，海拔170～230m）、萬佛山（林緣，海拔400～510m）、霍山大花坪（林緣，海拔300～390m）和合肥大蜀山（林緣，海拔120～160m）。每個(gè)采樣點(diǎn)選擇5株生長(zhǎng)良好的苦茶槭樹進(jìn)行采樣，采樣日期為4月中旬。樣品為樹冠外層當(dāng)年生嫩芽（包括一個(gè)芽尖和兩片稍張開的新葉）。采樣后立即放入自封袋中，并在3h內(nèi)帶回，放入4℃冰箱內(nèi)暫存。

1.1.2 儀器和藥品 主要儀器：感量為0.1mg的電子天平（上海分析儀器廠）；HIQ-F160恒溫震蕩培養(yǎng)箱（哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司）；Spectra Max M2酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Device公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（南京實(shí)驗(yàn)儀器廠）。主要化學(xué)藥品：二苯基苦基苯肼自由基（1，1-diphenyl-2- picryhydrazyl radical）從Sigma公司購(gòu)得，甲醇等試劑都為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 采集的樣品帶回實(shí)驗(yàn)室后快速磨碎，迅速用電子天平稱取30mg～60mg于1.5mL Eppendorff管中，并立即按20μg/mL加入80%的甲醇，于25℃振蕩提取24h，取上清液用80%甲醇分別稀釋到1.00、0.80、0.60、0.40和0.2mg樣品/mL備用。同時(shí)精確稱取每種樣品3份于恒重的Eppendorff管中，于105℃烘至恒重進(jìn)行含水率的測(cè)定。

1.2.2 自由基清除劑的測(cè)定 加不同濃度的樣品溶液100mL和1mM DPPH試液100μL于96孔酶標(biāo)板中（樣品實(shí)際反應(yīng)質(zhì)量濃度分別為0.500、0.400、0.300、0.200、0.100mg/mL）。樣品加入后震蕩10s，在37℃保溫10min后于517nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值（Ap），同時(shí)測(cè)定不加DPPH的樣品空白吸收值（Ac）和加DPPH但不加樣品（以100μL80%甲醇代替樣品）的吸收值（Amax）。最后按下列公式計(jì)算自由基清除率，并計(jì)算回歸方程和半數(shù)清除濃度（EC50）。

自由基清除率（%）=[1-（Ap-Ac）/Amax]×100

2 結(jié)果與分析

按照自由基清除率的測(cè)試方法，對(duì)5個(gè)產(chǎn)地25株苦茶槭嫩芽的80%甲醇提取物的自由基清除率進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。

從表1可看出不同產(chǎn)地的苦茶槭嫩芽都具有較強(qiáng)的清除自由基活性。絕大部分供試樣品鮮葉對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除濃度都在0.3mg/mL以下，換算成干樣的半數(shù)清除濃度都在0.1以下。但是不同苦茶槭的清除自由基活性并不完全相同，如Dku-3的鮮樣在濃度為0.278mg/mL時(shí)，其80%甲醇提取物就可清除50%DPPH自由基，而HKu-2需要0.305mg/mL鮮葉才能清除同樣量的自由基，前者的清除自由基活性比后者強(qiáng)9.7%。從不同產(chǎn)地苦茶槭清除自由基活性的平均值來看，不同產(chǎn)地苦茶槭清除自由基活性有一定差異，其中鮮樣清除自由基活性最弱的是瑯琊山苦茶槭（0.294mg/mL），最強(qiáng)的是霍山苦茶槭（0.289mg/mL）。換算成單位干重樣品的半數(shù)清除濃度后，霍山苦茶槭對(duì)DPPH自由基的清除濃度仍最低（0.084mg/mL），瑯琊山和大蜀山的苦茶槭對(duì)DPPH自由基的清除濃度都較高（0.088mg/mL）。

為檢驗(yàn)不同產(chǎn)地苦茶槭樣品清除自由基活性差異是否達(dá)到顯著差異水平，本研究首先對(duì)表1測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了方差齊性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示鮮樣清除自由基活性測(cè)定結(jié)果的方差齊性檢驗(yàn)的P值為0.848 2大于0.05；干樣測(cè)定結(jié)果的方差齊性檢驗(yàn)的P值為0.833 6，也大于0.05，表明表1的測(cè)定結(jié)果隨機(jī)誤差較小，可以進(jìn)行進(jìn)一步的方差分析。方差分析結(jié)果見表2。

從表2的方差分析結(jié)果可看出，不同產(chǎn)地苦茶槭樣品的清除自由基活性差異沒有達(dá)到顯著性水平，表明安徽省不同產(chǎn)地苦茶槭的清除自由基活性差異不顯著。

結(jié)合表1和表2可看出，雖然不同產(chǎn)地苦茶槭樹芽清除自由基活性差異不顯著，但大部分產(chǎn)地都有一些優(yōu)良單株，如黃山地區(qū)的HKu-4植株，其鮮芽對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除濃度為0.279mg/mL，換算成單位干重樣品的半數(shù)清除濃度為0.080mg/mL，其清除自由基活性比5個(gè)采樣點(diǎn)的平均值分別高出4.66%和7.50%。在萬佛山和霍山也有一些優(yōu)良單株，其中霍山大花坪的一株苦茶槭樹（Dku-3）的鮮芽對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除濃度為0.278mg/mL時(shí)，換算成單位干重樣品的半數(shù)清除濃度為0.080mg/mL，其清除自由基活性比5個(gè)采樣點(diǎn)的平均值分別高出5.04%和7.50%。可見，雖然不同產(chǎn)地苦茶槭樹芽清除自由基活性總體上差異不顯著，人們難以通過產(chǎn)地來源選擇高生物活性皋茶加工原料，但人們?nèi)钥梢酝ㄟ^優(yōu)良單株選擇和良種造林培育優(yōu)質(zhì)皋茶原料基地，提供優(yōu)質(zhì)皋茶加工原料。

3 結(jié)論

通過對(duì)5個(gè)產(chǎn)地25株苦茶槭芽的80%甲醇提取物的自由基清除率比較，發(fā)現(xiàn)安徽不同產(chǎn)地苦茶槭的清除自由基活性總體上差異不顯著，可見，在安徽省范圍內(nèi)，皋茶生產(chǎn)的原料產(chǎn)地不是影響皋茶清除自由基和抗氧化活性的主要因素。但試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)不同供試單株的自由基清除率有較大差異，在25株采樣單株中，其活性最強(qiáng)單株鮮樣清除自由基活性比最弱者強(qiáng)9.7%，表明高活性單株選擇具有較大潛力，值得擴(kuò)大范圍進(jìn)行高活性單株優(yōu)選研究，提高皋茶原料質(zhì)量。

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