淺談生化全自動(dòng)分析儀項(xiàng)目間試劑交叉污染及其解決方法

李金英　張慧蓉

【摘 要】目前生化試劑種類繁多，如何正確合理的使用，充分提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以便更好地為臨床診斷服務(wù)。

【關(guān)鍵詞】全自動(dòng)生化分析儀；試劑；防止污染

在生化試劑的應(yīng)用過程中我們往往會(huì)碰到交叉污染的問題，從而導(dǎo)致結(jié)果的偏離，影響臨床結(jié)果的報(bào)告和臨床病情的診斷。所以正確認(rèn)識(shí)交叉污染問題及有效排除顯得尤為重要。

交叉污染簡單分析是生化儀使用過程中永恒的話題，從儀器角度分析交叉污染的來源主要包括樣本針攜帶污染 ，試劑針攜帶污染 ，攪拌棒攜帶污染， 清洗系統(tǒng)攜帶污染 ，比色杯污染。主要原因 1. 樣品針，試劑針彎曲，特富龍涂層剝落，針堵塞，沖洗水沖洗不充分 。2，攪拌棒特富龍涂層剝落，攪拌棒表面有頑固性污漬，沖洗水沖洗不完全。3.比色杯劃痕較多，沖洗水沖洗不完全。4.干燥棒攜帶污染。

那如何鑒別交叉污染的類型從而及時(shí)排除？

1. 樣品針攜帶污染：同一血清分為五份，分別測定蛋白項(xiàng)目，重復(fù)性差。

2. 試劑針攜帶污染：① 部分試劑極易變質(zhì)，可通過肉眼觀察發(fā)現(xiàn) ② 以蒸餾水為樣本， 重復(fù)測定以下項(xiàng)目組合 10 次以上：AST 、 ALT （前）+ LDH （后）； TCHO（前）+TBA（后），后者測定結(jié)果偏高但重復(fù)性較好。

3. 攪拌棒攜帶污染：對(duì)同一份血清標(biāo)本重復(fù)測定GGT 或 ALT或AST 20次以上，結(jié)果重復(fù)性較差且有走高趨勢。

4. 清洗系統(tǒng)攜帶污染：①在樣本測定過程中，加做室內(nèi)質(zhì)控，部分項(xiàng)目測定異常或者失控 ②在樣本測定過程中以蒸餾水為樣本，多次測 定LDH、P、Mg、TBA，結(jié)果重復(fù)性不好。

5. 比色杯污染：在每日早晨剛開機(jī)時(shí)對(duì)所有項(xiàng)目做試劑空白測定，試劑空白吸光度或者試劑空白吸光度變化率結(jié)果變高，TBA（循環(huán)酶速率法）經(jīng)常出現(xiàn)負(fù)值，蛋白項(xiàng)目、血脂項(xiàng)目結(jié)果偏高，膽紅素（釩酸鹽法）易出現(xiàn)異常值。

解決辦法：

①定期進(jìn)行儀器的維護(hù)保養(yǎng)。②按要求及時(shí)更換零部件。③定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。④全自動(dòng)生化分析標(biāo)本和試劑用量少，殘存少量即會(huì)影響測試結(jié)果，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。⑤可使用生化分析儀的試劑針、比色杯清洗程序，對(duì)試劑針、比色杯進(jìn)行2次或多次清洗。用堿性清洗液或酸性清洗液沖洗試劑針可以有效地避免攜帶污染。⑥合理設(shè)置實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的排列順序，避免試劑交叉污染。ALT 、AST、 TBIL、 DBIL 、TBA、ALP、GGT 、CHE 、TP、 Alb、Urea、 UA 、Cr、 CK 、CK-MB、α–HBDH 、LD、 TG 、TC、 HDL-C、 LDL-C、APOAI、APOB、 Amy 、CO2 、Glu、P 、 Fe、Ca、 Mg。 （僅供參考）⑦每個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目所需的樣本量、試劑量不要隨意同比例降低，以保證反應(yīng)液保持較大的緩沖能力。

從試劑角度分析交叉污染的原因主要以下幾種：

1.試劑成分的直接污染：上一個(gè)測定試劑中含有下一個(gè)測試所要測定的物質(zhì)，直接干擾下一測試的測定結(jié)果。如：淀粉酶（AMY）試劑中含有較高濃度的鈣（Ca2+）；堿性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2）（PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等試劑中含有鎂（Mg2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、總蛋白（TP）與酸性磷酸酶（ACP）試劑中含有較高濃度的鉀（K+）； 膽堿酯酶（ChE）、總膽固醇（CHOL）、GLU （GOD法）、尿酸（UA）（尿酸酶法）、乳酸脫氫酶（LD）（IFCC法）、羥丁酸脫氫酶（HBDH）（DGKC法）等試劑中可能含有磷酸緩沖液；CHOL、TG試劑及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑中可能含有膽酸鈉；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）（IFCC法）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）（IFCC法）試劑中含有高活性的LD；以上試劑的交叉污染就分別會(huì)對(duì)Ca2+、Mg2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、總膽汁酸（TBA）及LD的測定結(jié)果造成干擾。

2.試劑成分參與反應(yīng)：上一個(gè)試劑中含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果。如：（1）Mg2+測定試劑的絡(luò)合劑亦能與鐵（Fe）結(jié)合，影響鐵與鐵絡(luò)合劑的結(jié)合；（2）直接膽紅素（DBil）（重氮法）試劑含有EDTA，Mg2+試劑中含有EGTA，均能與Ca結(jié)合，從而影響Ca的測定；（3）以甘油作為酶保護(hù)劑的試劑，會(huì)對(duì)TG的測定帶來干擾；（4）鈣（MTB法）試劑對(duì)K+有負(fù)干擾；（5）CHOL試劑中含有膽固醇酯酶，可水解膽固醇酯形成游離膽固醇，而引起對(duì)游離膽固醇測定的干擾。

3.反應(yīng)進(jìn)程相同：上一個(gè)試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來間接的干擾，下一項(xiàng)目所測定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。如：（1）當(dāng)上一反應(yīng)產(chǎn)物為H2O2時(shí)，則對(duì)以Trinder反應(yīng)產(chǎn)生顏色的測定結(jié)果引起干擾。如UA對(duì)CHOL結(jié)果的影響；CHOL對(duì)肌酐（CREA）（酶法）測定結(jié)果的影響；GLU（氧化酶法）對(duì)CREA（酶法）測定結(jié)果的影響。（2）CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）試劑中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反應(yīng)過程，因此可能對(duì)GLU的測定帶來干擾，尤其對(duì)GLU的HK法測定可能帶來嚴(yán)重干擾。

4.影響反應(yīng)條件：影響下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)條件如pH等，從而改變反應(yīng)速率。如：（1）DBil（釩酸鹽氧化法）試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會(huì)影響ALT活性，對(duì)測定結(jié)果有負(fù)干擾。（2）CREA（苦味酸速率法）反應(yīng)條件為堿性，果糖胺（動(dòng)力學(xué)法）反應(yīng)條件為酸性，受到污染后反應(yīng)速率會(huì)減慢。（3）CREA（酶法）試劑中含有抗壞血酸氧化酶，影響了氧化還原反應(yīng)的進(jìn)程，會(huì)對(duì)TBA（酶循環(huán)法）測定結(jié)果有影響。

解決方案：1.要求檢驗(yàn)人員對(duì)儀器工作流程、試劑組成、測定原理要了如指掌，對(duì)試劑交叉污染的各種可能性加以考慮，合理設(shè)計(jì)程序。更換試劑時(shí)，應(yīng)仔細(xì)研究說明書，發(fā)現(xiàn)和避免可能存在的試劑交叉污染.

2.合理安排檢測項(xiàng)目的順序，在有交叉污染的檢測項(xiàng)目中間插入一個(gè)或兩個(gè)非污染項(xiàng)目，最徹底的做法則是將被干擾項(xiàng)目置于干擾項(xiàng)目之前，以消除干擾發(fā)生的可能。

3..每個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目所需的樣本量，試劑量不要隨意同比例降低，以保證反應(yīng)液有較大的緩沖能力；

4.項(xiàng)目編排順序要與試劑瓶防止順序相一致，試劑應(yīng)盡量選用大容量瓶裝載。

結(jié)語：除了一些高檔的全自動(dòng)生化儀為防止污染，采用洗滌加脫氣裝置或加超聲洗滌裝置外，一般隨機(jī)組合式全自動(dòng)生化儀可以通過增加洗滌的次數(shù)或改變吸取試劑的方式來消除這類污染。所以，由廠家提供給客戶使用的儀器參數(shù)，項(xiàng)目的位置已經(jīng)過反復(fù)論證，是最佳狀態(tài)，建議不要隨意改動(dòng)。否則很容易造成測定結(jié)果不可靠。在實(shí)驗(yàn)工作中還發(fā)現(xiàn)，堿性條件下反應(yīng)項(xiàng)目如肌酐苦味酸速率法、果糖胺動(dòng)力法，受酸性試劑的影響反應(yīng)速度減慢。同樣觀察到尿酸試劑受到強(qiáng)酸性試劑影響，結(jié)果明顯偏低現(xiàn)象。說明這類污染還有多種表現(xiàn)，受影響的項(xiàng)目不少。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，只要合理安排項(xiàng)目位置，就可有效避免這種現(xiàn)象。原則是將具有相同反應(yīng)原理的放在一起；相同酸堿度反應(yīng)的放在一起；試劑內(nèi)含相同被測成分的和該項(xiàng)目相隔兩個(gè)項(xiàng)目位置以上的放在一起；易污染項(xiàng)目測定前吸樣針設(shè)置清洗2次以上的放在一起等。因此，要想獲得正確、可靠結(jié)果，不但需要熟練掌握儀器操作，更需要了解反應(yīng)原理、試劑組成等方面知識(shí)。

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