應(yīng)用改良巴氏染色對男性不育中精子形態(tài)缺陷類型研究報(bào)告

孫鵬等

【摘 要】目的：通過對精液常規(guī)與巴氏染色結(jié)果的分析，探討少、弱精子癥與精子形態(tài)之間的關(guān)系，為不育癥的診斷及所需采取的輔助生殖技術(shù)提供依據(jù)。方法：應(yīng)用北京中科彩色精子質(zhì)量檢測分析系統(tǒng)及改良巴氏染色法對在我院進(jìn)行診治的354例少、弱精子癥患者進(jìn)行檢查，實(shí)驗(yàn)資料采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：弱精子癥為精液異常的第一位原因，弱精子癥組正常形態(tài)精子百分率顯著低于正?；盍M，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），少精子癥組合并弱精子癥組與少精子癥合并正?；盍M比較，正常形態(tài)精子百分率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），各組間頭部缺陷和頸尾部缺陷間的比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：精液改良巴氏染色檢查可以發(fā)現(xiàn)精液常規(guī)檢查正常而單純?yōu)榛尉影Y的患者，由于受精率與精子的活力、形態(tài)均有關(guān)系，因此正?；盍Χ螒B(tài)異常的精子仍可發(fā)生不受精，這類患者須行單精子卵胞漿內(nèi)注射（ICSI）助孕。

【關(guān)鍵詞】改良巴氏染色；男性不育；精子形態(tài)缺陷

在與男性生育能力相關(guān)的精液指標(biāo)中，精子密度、活動力、形態(tài)非常重要，是決定男性生育力的主要因素。精子形態(tài)影響精子的受精能力，形態(tài)缺陷的精子受精率低下。為探討少、弱精子癥中精子形態(tài)缺陷的情況，本研究用精液常規(guī)和改良巴氏染色法對在我院進(jìn)行診治的354例少、弱精子癥患者進(jìn)行檢查；精液改良巴氏染色檢查是WHO推薦的精子形態(tài)分析的經(jīng)典方法[1]，可以詳細(xì)觀察精子的核染色質(zhì)性狀以及頂體的情況；依照2010年WHO修訂精子形態(tài)學(xué)檢查的標(biāo)準(zhǔn)，對精液常規(guī)和改良巴氏染色檢查的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析研究，為不育癥的診斷及所需采取的輔助生殖技術(shù)提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1對象 2009.1～2012.12在生殖醫(yī)學(xué)中心就診的354例患者，其中少精子癥患者70例，正常密度患者284例（弱精子癥患者177例，正常活力患者107例）?；尉影Y患者193例。平均年齡30歲。

1.2 方法

1.2.1精液常規(guī)檢查： 應(yīng)用北京中科彩色精子質(zhì)量檢測分析系統(tǒng)，按要求禁欲3～7d，在我中心取精，精液在37℃水浴箱中靜置液化，液化時間超過1h按相關(guān)操作處理[ 2]。

1.2. 2精液改良巴氏染色檢查： 采用世界衛(wèi)生組織（WHO）2010年《人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊》第4版推薦的方法進(jìn)行染色、形態(tài)分析和計(jì)數(shù)。精子形態(tài)缺陷的類型包括： 頭部缺陷、頸部和中段的缺陷、尾部缺陷、大于正常精子頭部50%的胞漿小滴等。所有形態(tài)學(xué)處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。在頭頸尾均有異常時計(jì)為頭部畸形。偶見特異結(jié)構(gòu)缺陷的精子，如頂體發(fā)育失敗導(dǎo)致“小圓頭缺陷”或“球形精子癥”，計(jì)為異常。卷尾的精子可能與精子活力低有關(guān)，或提示精子已經(jīng)暴露于低滲透壓，不計(jì)為尾部缺陷。圓形精子細(xì)胞階段的未成熟精子細(xì)胞；精子頭部脫落或無精子頭精子；尖頭無尾者，均不作為精子計(jì)數(shù)。

1.3 相關(guān)檢查判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1弱精子癥： 連續(xù)3次以上的精液常規(guī)分析提示前向運(yùn)動精子（A級+B級）小于50%或快速直線前向運(yùn)動的精子小于25%，精液密度≥20×106/ml，其他參數(shù)正常或基本正常。

1.3.2少精子癥： 指精子密度≤20×106/ml。

1.3.3畸形精子癥： 經(jīng)改良巴氏染色后正常形態(tài)精子百分率≤15%，精液密度≥20×106/ml。本研究中弱精子癥組和畸形精子癥組均為精液密度≥20×106/ml

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 結(jié)果以中位數(shù)表示，各組正常形態(tài)精子數(shù)之間的比較采用兩個獨(dú)立樣本的WILCOXON秩和檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)資料采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。

2結(jié)果

2.1 精液常規(guī)檢查 弱精子癥為精液異常的第一位原因。見表1。

2.2 不同組間在精子畸形上的差別 弱精子癥組正常形態(tài)精子百分率顯著低于正常活力組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05）.少精子癥組合并弱精子癥組與少精子癥合并正常活力組比較，正常形態(tài)精子百分率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），各組間頭部缺陷和頸尾部缺陷間的比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）.見表2。

3 結(jié)論

研究認(rèn)為，精液常規(guī)檢查指標(biāo)越趨正常，其人工授精（IUI）的成功率越高[3]。精子形態(tài)對于男性生育力有很好的預(yù)測價值，與受精率顯著相關(guān)，正常形態(tài)的精子比例越高，受精率越高。

我們對精子形態(tài)與活力關(guān)系的分析顯示，弱精子癥組正常形態(tài)精子百分率的中位數(shù)為6. 67，正常活力組則為10.89，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但弱精子癥組和正?；盍M在正常形態(tài)精子百分率分別為<4%、4%～15%及>15%時，兩組正常形態(tài)精子百分率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。究其原因，可能為樣本數(shù)量較少，需要大樣本資料的研究來證實(shí)。統(tǒng)計(jì)分析顯示，正常密度和正?；盍φ咂湔Ｐ螒B(tài)精子百分率在4%以下的發(fā)生率分別為29.72%和21.15%；正常密度和正?；盍φ咂湔Ｐ螒B(tài)精子百分率在4%至15%之間的發(fā)生率分別為41.04%和40.38%，表明精液密度和活力正常的患者仍有可能發(fā)生畸形精子癥。精液改良巴氏染色檢查可以發(fā)現(xiàn)精液常規(guī)檢查正常而單純?yōu)榛尉影Y的患者。由于受精率與精子的活力、形態(tài)均有關(guān)系，因此正?；盍Χ螒B(tài)異常的精子仍可發(fā)生不受精。Bak-er發(fā)現(xiàn)精子的正常形態(tài)率≤5%時，體外受精-胚胎移植（IVF）受精率平均低于30%，這類患者須行單精子卵胞漿內(nèi)注射（ICSI）助孕。此外，在臨床常用的促、超排卵加IUI 技術(shù)中，精液常規(guī)正常而畸形精子比例過高的精子除易導(dǎo)致助孕失敗外，多次大量的促性腺激素的刺激會致卵巢大量優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞凋亡，有可能降低以后促超排卵過程中卵母細(xì)胞的獲得率，甚至發(fā)生卵巢低反應(yīng)。

我們在分析精子形態(tài)與密度的關(guān)系時發(fā)現(xiàn)，正常密度組的正常形態(tài)精子百分率中位數(shù)為8.59，少精子癥組則為2.97；少精子癥組與正常密度組在精子畸形上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示少精子癥者畸形精子比例增加，需要采取ICSI助孕的患者也相應(yīng)增加。發(fā)生少精子癥的原因有多種，染色體核型異常和Y染色體微缺失是精子發(fā)生障礙的常見原因之一。有資料顯示，61例無精子癥患者中有22例染色體核型異常，異常率為36.10%；36例嚴(yán)重少精子癥患者中有1例染色體異常，異常率為2.78%[4]。近來發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)重原發(fā)性少精子癥患者Y染色體微缺失的發(fā)生率為7%～10%。對45例精子密度低于5×106/ ml的患者進(jìn)行Y染色體微缺失檢查，有14例發(fā)生微缺失，發(fā)生率為31%；且Y染色體微缺失可以通過ICSI助孕方式垂直傳播給子代。因此，對嚴(yán)重少精子癥除應(yīng)行形態(tài)學(xué)分析外，還需進(jìn)行染色體核型和基因異常的篩查。

精液改良巴氏染色檢查所定義的精子形態(tài)缺陷有：頭部缺陷、頸部和中段的缺陷、尾部缺陷、大于正常精子頭部50%的胞漿小滴等。統(tǒng)計(jì)分析顯示，少精子患者伴有畸形精子的比例增加，但分別比較少精子癥組和正常密度組的精子頭部缺陷和頸尾部缺陷時，則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比較弱精子癥組和正?；盍M精子頭部缺陷和頸尾部缺陷時，亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。精子的形態(tài)影響精子和卵細(xì)胞的受精，但有關(guān)精子不同類型的形態(tài)異常與受精的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。精液改良巴氏染色檢查可以發(fā)現(xiàn)精液常規(guī)檢查正常而單純?yōu)榛尉影Y的患者，對不育癥者進(jìn)行精液常規(guī)分析時聯(lián)合改良巴氏染色檢查，可發(fā)現(xiàn)因形態(tài)學(xué)改變導(dǎo)致不育的患者，有助于選擇合適的輔助生殖技術(shù)助孕及對遺傳性疾病進(jìn)行阻斷。本結(jié)果有待擴(kuò)大樣本數(shù)量深入探討。

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