HPLC法測定菊明降壓片中蒙花苷的含量

陳雨 郭磊 李俊廣

【摘 要】 目的：建立菊明降壓片中蒙花苷的含量測定方法。方法：色譜柱：Hypersil ODS2（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：乙腈-0.5%磷酸溶液（30：70）；檢測波長：334nm；流速：0.6ml/min；進(jìn)樣20μl。結(jié)果：蒙花苷在3-30μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系（r=0.9994），平均回收率為93.61%，RSD為1.15%（n=4）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于測定菊明降壓片中蒙花苷的含量。

【關(guān)鍵詞】 菊明降壓片；蒙花苷；HPLC

【中圖分類號】 R286 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 B

Determination the Content of Buddleoside in Juming Jiangya

Tablet by HPLC

Chen Yu Guo Lei Li Junguang

（Pharmaceutical Co.， Ltd. Shandong Luoxin，Linyi，Shandong， 276017）

【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for analysis the content of buddleoside in Juming Jiangya Tablet by HPLC . Method The separation was performed on C18 Column （250mm×4.6mm） with the mobile phase consisted of acetonitrile-0.5% Phosphoric acid （30：70，V/V）.The flow rate was 0.6ml/min，the injection volume was 20μl， and the detection wave length was 334nm and the column temperature was room temperature. Result Linearity of buddleoside was good at 3-30μg/ml（r=0.9994）.The average recovery of buddleoside was 93.61% with RSD=1.15%（n=4）.Conclusion The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination the content of buddleoside in Juming Jiangya tablet.

【Keywords】 Juming Jiangya Tablet； buddleoside； HPLC

菊明降壓片，是野菊花和決明子以4：1的比例經(jīng)提取制得的復(fù)方制劑。性狀為棕褐色，味苦、澀。菊明降壓片對原發(fā)性高血壓，慢性腎炎性高血壓等的治療有很好的療效。

野菊花為菊科多年生草本植物野菊等的頭狀花序，全國各地均產(chǎn)[1]。野菊花，味苦、辛，性涼，清熱解毒，疏風(fēng)平肝，用于疔瘡、癰腫、丹毒，風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛、高血壓眩暈、頭痛等病癥。野菊花含有揮發(fā)油、黃酮、綠原酸等多種有效化學(xué)成分，其中蒙花苷是野菊花中重要的黃酮類化合物，具有明顯的抗菌活性等多種作用[2，3]。蒙花苷（Buddleoside ，別名Linarin）是從菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的頭狀花序中提取的化合物，為白色粉末，分子式為C28H32O14，分子量為592.5468，屬黃酮類藥物，具有抗衰老、抗缺氧、抗不良刺激、抗疲勞、抑制血糖升高和對機(jī)體雙向調(diào)節(jié)作用，對學(xué)習(xí)記憶也有影響，一般將其作為野菊花的指標(biāo)成分。

菊明降壓片收載在《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測定項[4]，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制，因此，建立測定菊明降壓片含量的方法，對控制該品種質(zhì)量有重要意義。本實驗擬以蒙花苷為指標(biāo)成分[5-7]，建立HPLC法測定菊明降壓片中的蒙花苷的含量的方法，以實現(xiàn)該品種的含量控制，方法未見報道。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀（UV Detector 2500紫外檢測器、Manager 5000混合器、Pump 1000泵）：德國KNAUER公司；色譜柱（250mm×4.6mm Hypersil-ODS2 5μm）：大連依利特公司；微量注射器：50μl；流動相過濾器（AL-01，XINZHOU）：天津特納公司；電子天平（JA5003）：上海恒平科學(xué)儀器有限公司；紫外分光光度計（TU-1810）：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；HH-S型數(shù)顯恒溫水浴箱：金壇市醫(yī)療儀器廠；SHB-B95型循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；

1.1.2 試藥 菊明降壓片：河南省宛西制藥股份有限公司；蒙花苷對照品：純度≥98%，中國藥品生物制品檢定所；三氯甲烷、無水乙醇、乙酸乙酯、鹽酸、磷酸為分析純；甲醇為色譜純；水為蒸餾水。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS2色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；檢測波長：334nm；流速：0.6ml/min；進(jìn)樣20μl[8，9]；流動相：乙腈-0.5%磷酸溶液[10]（30：70）。柱溫為室溫[11，12]。0.5%磷酸溶液用分析純的磷酸溶液配制，用流動相過濾器過濾。

1.2.2 對照品溶液的制備 稱取蒙花苷對照品10mg，置于100mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，得0.1mg/mL對照品儲備液[13].取12.0mL儲備液稀釋至50mL，得24.0μg/mL的對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.42g，置圓底燒瓶中，加入100ml甲醇，加熱回流30分鐘，稱重，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過[14]。續(xù)濾液微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液得供試品溶液。

1.2.4 測定法 分別取對照品、供試品溶液20ul供試品溶液，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定，記錄數(shù)據(jù)，圖譜。外標(biāo)法[15]計算含量。

2 結(jié)果及討論

2.1 樣品測定的結(jié)果 樣品測定結(jié)果及圖譜如圖1：

樣品與對照品的圖譜比較可知樣品圖譜中峰1為蒙花苷的峰。根據(jù)外標(biāo)法計算，按每片藥片中所含蒙花苷的毫克數(shù)記錄結(jié)果：2.9518mg/片。

2.2 討論

2.2.1 溶劑的選擇 蒙花苷在甲醇中有良好的溶解度，所以選用甲醇為溶劑配制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.2 檢測波長的選擇 24μg/ml的溶液，在紫外可見分光光度計上自400nm～200nm掃描，得到光譜掃描曲線。

由紫外吸收光譜的得知，樣品溶液在波長為334nm處有較大光吸收度，故選擇334nm為蒙花苷的測定波長。

2.2.3 線性關(guān)系考察 分別取儲備液4.0ml、8.0ml、12.0 ml、16.0ml、20.0 ml、25.0 ml置于50 ml容量瓶中定容至刻度，得8.0μg/ml、16.0μg/ml、24.0μg/ml、32.0μg/ml、40.0μg/ml、50.0μg/ml 六種濃度的對照品溶液，分別用微孔濾膜過濾，得系列對照品溶液。分別取六種對照品溶液各進(jìn)樣20μl，按1.2.1的色譜條件進(jìn)行測定。對照品溶液濃度與峰面積的數(shù)據(jù)記錄如表3所示。

由以上數(shù)據(jù)計算得出回歸方程：A=0.3677c+0.3680，r=0.9994。

結(jié)果表明，蒙花苷濃度在8.00～50.00μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.4 回收率試驗 回收率試驗取已知含量的樣品10片，研細(xì)，各取粉末0.085g，共4份，分別精密稱定，各置10ml容量瓶中，分別精密加入蒙花苷對照品儲備液5 ml，加甲醇5ml按供試品溶液制備法制備，依法測定?；厥章?（測得蒙花苷量-菊明降壓片中蒙花苷量）/加入對照品量[16]。測得蒙花苷的回收率結(jié)果如表4。

結(jié)果蒙花苷的平均加樣回收率為93.61%（n=4），RSD為1.15%。

2.2.5 重復(fù)性試驗 取樣品溶液，平行試驗6次，按1.2.1項下條件測定峰面積，測得蒙花苷的平均含量為5.8934mg/g，RSD=1.14%。測定結(jié)果表明精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液分別于0，6，12，18，24h進(jìn)行測定，即得。結(jié)果供試品中蒙花苷含量的RSD為0.41%，表明供試品溶液在24h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.2.7 蒙花苷限度的規(guī)定 取不同廠家不同批次的藥品6批，照“1.2.3”項下方法制備供試品溶液，吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定，以1片藥中所含的蒙花苷微克數(shù)計，結(jié)果見表5。

6批藥品中蒙花苷最低含量為2.5412mg/片，最高含量為3.2361mg/片。

2.2.8 需要進(jìn)一步研究的問題 由于時間限制和儀器的問題，樣品中蒙花苷峰與其他成分的峰分離效果不是十分理想，需要進(jìn)一步優(yōu)化分離條件。

3 結(jié)論

經(jīng)方法學(xué)考察，采用HPLC法測定菊明降壓片中蒙花苷的含量，其線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、樣品穩(wěn)定性，均符合含量測定的要求，可作為測定菊明降壓片中含量的方法控制產(chǎn)品質(zhì)量。

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