枸櫞酸預處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷與抑制細胞凋亡的關系

郭建麗等

摘要目的：觀察枸櫞酸預處理減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷與抑制細胞凋亡的作用及其機制。方法：建立大鼠在體缺血再灌注模型健康成年雄性D大鼠只采用隨機數(shù)字表法分為組假手術組（只穿線不結扎；ham）、缺血再灌注組（缺血分鐘再灌注1分鐘；I/R）組以及枸櫞酸預處理組（P組）。于再灌注1分鐘末采用Evans藍和，，5一氯化三苯基四氮唑（TT）雙重染色法進行測定心肌缺血、梗死面積；提取心肌組織蛋白采用aspase-活性分光光度法檢測試劑盒檢測其活性。結果：ham組缺血面積/左心室面積；P組7.6±58明顯低于I/R組±79（P<5）；ham組梗死面積/左心室面積P組591±197顯著低于I/R組186±65（P<.5）；與ham組相比I/R組aspase-活性增加5（P<.5）；和I/R組相比P組減低（P<.5）。結論：枸櫞酸預處理可減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷其機制與下調aspase-基因表達從而抑制細胞調亡有關。

關鍵詞心肌缺血再灌注枸櫞酸細胞凋亡

心肌缺血再灌注損傷常見的臨床改變包括心肌頓抑、微血管功能失調和心肌細胞的凋亡等。細胞凋亡可能是心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機制的重要環(huán)節(jié)之一aspases家族蛋白酶是細胞凋亡途徑的核心成分；aspase-作為凋亡效應蛋白是條途徑：線粒體途徑、內質網信號途徑、死亡受體途徑的共同下游通路在凋亡信號傳導通路中占有舉足輕重的地位。枸櫞酸又名檸檬酸枸椽酸根離子可與血中鈣離子生成難解離的可溶性絡合物枸椽酸鈣降低血清鈣離子濃度；文獻表明缺血、缺氧時引起細胞內酸中毒再灌注時通過H+-Na+交換和Na+-a+交換使細胞內鈣增加進而激活磷脂酶使膜磷脂成分受損而分解。

資料與方法

心肌缺血大鼠模型制備：采用健康成年雄性prague-Dawley（D）大鼠體重5～g。用5烏拉坦（1.g/kg）對健康成年雄性D大鼠行腹腔注射麻醉連接心電圖（Ⅱ導聯(lián)）尾靜脈置入G套管留置針以便給藥。行氣管切開置管接動物呼吸機控制呼吸呼吸頻率7次/分潮氣量8ml/kg吸呼比1∶。穩(wěn)定1分鐘后于胸骨左緣第、肋間開胸暴露心臟用6-無損傷縫線在左心耳右緣與肺動脈圓錐左緣之間冠狀動脈左前降支起點下mm環(huán)繞冠脈將結扎線從1根聚乙烯小管中穿出拉緊形成閉環(huán)造成缺血放松即發(fā)生再灌注。再灌注前1分鐘按照不同分組分別經尾靜脈給予生理鹽水、枸櫞酸（.5mol/）容量1ml。

討論

197年err首次提出了凋亡的概念經過歷年研究發(fā)現(xiàn)心肌細胞凋亡參與了冠心痛、心律失常等心血管疾病的形成和發(fā)展過程缺血再灌注損傷時心肌細胞凋亡也明顯加重。在眾多aspase成員中caspase。被認為是各種凋亡刺激因子激活的aspase家族中的關鍵蛋白酶與DNA斷裂、染色體凝聚和凋亡小體形成有關是直接介導凋亡的效應分子。心肌梗死面積擴大是心肌缺血再灌注損傷的一個重要特征而梗死面積的多少決定著缺血再灌對心肌損傷的嚴重程度。

本研究結果表明與I/R組比較P組心肌梗死面積明顯縮小提示枸櫞酸通過螯合血清中鈣離子減少進入心肌細胞內鈣離子量進而減輕心肌缺血再灌注損傷；I/R組caspase-活性上調提示再灌注損傷和心肌梗死均能誘導心肌細胞凋亡同時枸櫞酸通過抑制caspase-的激活來抑制心肌缺血再灌注誘導的細胞凋亡其基本機制可能是鈣離子濃度減少使a+Mg+依賴的核酸內切酶活化受阻從而阻斷了細胞凋亡的發(fā)生。

參考文獻

1馬桂蘭.細胞凋亡與冠心病[J].醫(yī)學綜述，，6（11）：91-9.

raser A，Evan G.A license to kill.ell，1996，85（6）：781-78.

胡章樂，馬禮坤.aspase-與心肌缺腳再灌注損傷.國際病理科學與臨床雜志，7，7（）：8-1.

[Z][HT][HJ]