動(dòng)物性食品中萊克多巴胺檢測(cè)方法研究進(jìn)展

石晶 王毅謙等

摘 要：萊克多巴胺作為激素類添加劑，對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生副作用，同時(shí)影響消費(fèi)者的健康。近年我國(guó)進(jìn)出境口岸屢次在進(jìn)口動(dòng)物性食品中檢出萊克多巴胺。本文對(duì)近幾年來動(dòng)物性食品中萊克多巴胺的檢測(cè)方法新進(jìn)展和新興技術(shù)做了大量調(diào)查和整理，旨在為出入境口岸動(dòng)物性食品中萊克多巴胺的檢測(cè)提供一定的參考，為進(jìn)出口動(dòng)物性食品的安全控制提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：動(dòng)物性食品；萊克多巴胺；檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-8123（2013）04-0044-04

萊克多巴胺（ractopamine，RAC）是人工合成的β-腎上腺受體激動(dòng)劑，屬于“瘦肉精”的一種，可以同時(shí)提高動(dòng)物的日增質(zhì)量，提高飼料利用率，提高動(dòng)物的蛋白質(zhì)含量。目前只有美國(guó)、加拿大、巴西等24個(gè)美洲和亞太地區(qū)允許將萊克多巴胺用于食用性動(dòng)物（主要用于豬和牛）的促生長(zhǎng)和提高瘦肉率。萊克多巴胺屬于激素類添加劑，而激素類飼料添加劑用于動(dòng)物后，具有激素殘留的問題，對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生副作用，同時(shí)也會(huì)影響消費(fèi)者的健康[1-2]。歐盟早已明確禁止在食用性動(dòng)物中使用包括萊克多巴胺在內(nèi)的所有β-腎上腺素興奮劑類藥物（歐盟96/22/EC法令），我國(guó)也已經(jīng)于2002年明確將其列入《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》。中華人民共和國(guó)工業(yè)和信息化部、農(nóng)業(yè)部、商務(wù)部、衛(wèi)生部、國(guó)家工商行政管理總局、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告，自2011年12月5日起在我國(guó)境內(nèi)禁止生產(chǎn)和銷售萊克多巴胺[3]。

近年來，我國(guó)出入境口岸也屢次在進(jìn)口動(dòng)物性食品中檢出萊克多巴胺。根據(jù)國(guó)家質(zhì)檢總局公布的信息，截至2007年8月底，廣東檢驗(yàn)檢疫局轄區(qū)各口岸已從10批美國(guó)豬產(chǎn)品和一批加拿大豬產(chǎn)品中檢出萊克多巴胺殘留；2008年遼寧大窯灣口岸進(jìn)出境動(dòng)物產(chǎn)品中有4批次97.473噸來自美國(guó)的凍豬產(chǎn)品被檢出萊克多巴胺；2011年12月由美國(guó)進(jìn)口的近23.5噸凍豬鼻在廣東入境時(shí)被檢出了萊克多巴胺；這些產(chǎn)品均依法全部退運(yùn)出境。因此，出入境口岸對(duì)進(jìn)出口動(dòng)物性食品中萊克多巴胺的檢測(cè)具有十分重要的意義。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于動(dòng)物性食品中萊克多巴胺的檢測(cè)方法主要有免疫分析法、色譜分析技術(shù)、傳感器技術(shù)等，本文對(duì)這幾種常用檢測(cè)方法的應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述，同時(shí)介紹了近年來興起的一些如分子印跡技術(shù)、光譜技術(shù)、化學(xué)發(fā)光法等新技術(shù)在萊克多巴胺檢測(cè)中的應(yīng)用，旨在為出入境口岸動(dòng)物性食品中萊克多巴胺的檢測(cè)提供一定的參考，為進(jìn)出口動(dòng)物性食品的安全控制提供理論依據(jù)。

1 免疫分析方法

免疫分析方法是利用抗原與抗體特異性反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)，主要包括酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析法、熒光微球免疫層析技術(shù)和時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)等。

1.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是基于競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)反應(yīng)原理，把抗原-抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來的一種檢測(cè)技術(shù)，目前廣泛應(yīng)用于萊克多巴胺殘留的檢測(cè)[4-7]。ELISA法檢測(cè)動(dòng)物性食品中的萊克多巴胺，最低檢測(cè)限可達(dá)0.1ng/mL[7]，平均回收率在70%～90%之間[6]。

ELISA 法具有快速、靈敏和高通量等特點(diǎn)，且無需昂貴的儀器，是目前基層檢測(cè)部門應(yīng)用的主要方法，一般用來進(jìn)行大批量樣品的初步篩選，但該方法穩(wěn)定性差，出現(xiàn)的假陽(yáng)性較多，需用氣相質(zhì)譜或液相質(zhì)譜進(jìn)行確證。

1.2 膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)（gold immunochromatography assay，GICA）是近年來興起的一種快速檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)是一種將膠體金顆粒與包括抗原、抗體在內(nèi)的許多蛋白質(zhì)標(biāo)記形成免疫金復(fù)合物的技術(shù)[8-10]?；谀z體金免疫層析法研制出的試紙條，可在8～10min內(nèi)完成萊克多巴胺測(cè)試，檢測(cè)限為5ng/mL，肉眼即可判斷[10]。

膠體金免疫層析技術(shù)具有簡(jiǎn)單、快速、特異、靈敏的特點(diǎn)，不需要借助相關(guān)儀器，檢測(cè)效率能得到很大提高，適合大規(guī)模樣品的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

1.3 熒光微球免疫層析技術(shù)

熒光微球免疫層析方法比膠體金免疫層析方法具有更高的靈敏度。劉道峰等[11]以熒光微球?yàn)樾滦蜆?biāo)記物，采用EDC法進(jìn)行偶聯(lián)，制備了萊克多巴胺抗體熒光微球復(fù)合物，并以之為探針對(duì)萊克多巴胺進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限為2.5ng/mL，且特異性強(qiáng)、檢測(cè)范圍寬。崔浩等[12]建立了萊克多巴胺的熒光膠乳顆粒免疫層析快速檢測(cè)技術(shù)，對(duì)豬肉組織中萊克多巴胺的最低檢出限為0.5μg/L，方法操作便捷、穩(wěn)定可靠、靈敏度高，可用于豬肉組織中萊克多巴胺殘留的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和監(jiān)控。

1.4 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)

時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（time-resolved fluoroim-munoassay，TRFIA）是一種非同位素免疫分析技術(shù)，它用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點(diǎn)，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨，可有效地排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。TRFIA作為一項(xiàng)新興的超微量標(biāo)記免疫技術(shù)，其靈敏度比ELISA法更高、穩(wěn)定性更好，目前已有其應(yīng)用于萊克多巴胺檢測(cè)的報(bào)道[13-14]。

2 色譜分析技術(shù)

色譜分析技術(shù)是萊克多巴胺檢測(cè)中常用的定量和確證方法，主要包括高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜法（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）和液相色譜-質(zhì)譜法（liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS）等。

2.1 高效液相色譜法

萊克多巴胺的HPLC法檢測(cè)主要是采用SPE固相萃取小柱凈化，二極管陣列檢測(cè)器（diode array detector，DAD）[15-16]或熒光檢測(cè)器（fluorescence detector，F(xiàn)LD）[17-19]檢測(cè)。由于萊克多巴胺的紫外最大吸收波長(zhǎng)在224nm左右，采用HPLC-DAD對(duì)萊克多巴胺進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在此波長(zhǎng)附近干擾較大，通常不采用DAD檢測(cè)器檢測(cè)。萊克多巴胺含酚羥基，具有熒光性，可采用FLD檢測(cè)器測(cè)定，激發(fā)波長(zhǎng)約為226nm，發(fā)射波長(zhǎng)約為305nm，該方法靈敏，檢出限可達(dá)0.3μg/L[17]，同時(shí)可排除雜質(zhì)干擾。

臧李納等[19]將DAD和FLD兩種檢測(cè)器串聯(lián)，對(duì)萊克多巴胺、沙丁胺醇和克倫特羅進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可以很好的分離3種物質(zhì)，方法相關(guān)系數(shù)達(dá)0.999，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.75%～2.01%，回收率在90%～110%之間。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜法

萊克多巴胺化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有不易氣化的羥基和氨基，屬于高沸點(diǎn)、難揮發(fā)的化合物，衍生后才能測(cè)定。常用的衍生劑有BSTFA（雙三甲基硅烷基三氟乙酰胺）和BSTFA+1%TMCS（三甲基氯硅烷），衍生溫度為80℃左右，衍生時(shí)間為1h[20-25]。采用GC-MS對(duì)豬肝臟中萊克多巴胺檢測(cè)的檢出限和定量限分別為0.5ng/g和2.0ng/g[26]，對(duì)豬尿的檢出限和定量限分別為0.3μg/L和1.0μg/L[27]。

GC-MS是萊克多巴胺檢測(cè)最常用的定量和確證方法，但是它需要衍生，衍生效率對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很大，因此加標(biāo)回收率不高，同時(shí)衍生劑和甲苯有極強(qiáng)的毒性。

2.3 液相色譜-質(zhì)譜法

液相色譜-質(zhì)譜法不需要衍生，采用內(nèi)標(biāo)法定量，在提高效率的同時(shí)提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度[28-30]，采用UPLC-ESI-MS-MS對(duì)牛肉中的萊克多巴胺的檢出限和定量限分別為0.07μg/kg和0.22μg/kg[30]。液相質(zhì)譜法靈敏度高，重現(xiàn)性強(qiáng)，適用于萊克多巴胺的確證檢測(cè)，但是其分析成本昂貴，難以普及。

3 傳感器技術(shù)

3.1 生物傳感器技術(shù)

近年來，表面等離子體共振（surface plasmon resonance，SPR）生物傳感器受到人們的關(guān)注，原理為將能夠與待測(cè)物結(jié)合的物質(zhì)固定在傳感器芯片上，當(dāng)待測(cè)物流過芯片表面時(shí)與芯片表面的物質(zhì)結(jié)合，引起芯片表面光學(xué)參數(shù)變化，并以電信號(hào)的形式表現(xiàn)出來。該技術(shù)可在15min內(nèi)完成單個(gè)樣品的萊克多巴胺檢測(cè)[31]，檢出限達(dá)0.6μg/kg[32]。

該技術(shù)無需對(duì)分子進(jìn)行標(biāo)記，方法的建立和樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，所需樣品量少，可利用動(dòng)力學(xué)特性繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)時(shí)間短，可分析弱相互作用或瞬間相互作用，可實(shí)時(shí)檢測(cè)[31]。

3.2 電化學(xué)傳感器技術(shù)

張洪才等[33]采用Nafion-Au-Nafion修飾玻碳電極，建立了萊克多巴胺的循環(huán)伏安電化學(xué)傳感方法，在pH2.0、B-R為支持液、富積時(shí)間120s、掃描速度50mV/s、電位1.1V條件下，檢測(cè)限可達(dá)2μg/L，檢測(cè)時(shí)間不超過5min。陳昌云等[34]建立了一種基于碳納米管和離子液體復(fù)合物修飾電極的免疫傳感器技術(shù)檢測(cè)萊克多巴胺，檢測(cè)限可低至0.3ng/mL。該方法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、檢測(cè)迅速、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，適合大批量樣品的檢測(cè)。

4 分子印跡技術(shù)

分子印跡技術(shù)的原理是：當(dāng)模板分子（印跡分子）與聚合物單體接觸時(shí)會(huì)形成多重作用點(diǎn)，通過聚合過程這種作用就會(huì)被記憶下來，當(dāng)模板分子除去后，聚合物中就形成了與模板分子空間構(gòu)型相匹配的具有多重作用點(diǎn)的空穴，這樣的空穴將對(duì)模板分子及其類似物具有選擇識(shí)別特性。分子印跡技術(shù)具有預(yù)定性、識(shí)別性和實(shí)用性等特點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于色譜技術(shù)（固相萃取前處理）[35-37]、酶聯(lián)免疫技術(shù)[38]、電化學(xué)傳感器技術(shù)[39-40]中，對(duì)動(dòng)物性食品中的萊克多巴胺進(jìn)行檢測(cè)。

5 光譜技術(shù)

近年來，光譜技術(shù)用于鹽酸萊克多巴胺的檢測(cè)也有了新的進(jìn)展，主要是表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)和太赫茲時(shí)域光譜。

Zhai Fuli等[41]將表面增強(qiáng)拉曼散射光譜（surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS）用于豬尿中萊克多巴胺的檢測(cè)，樣品中的萊克多巴胺采用液液萃?。╨iquid-liquid extraction，LLE）和液液萃取-固相萃?。╨iquid-liquid extraction-solid phase extraction，LLE-SPE）兩種方式提取后分別進(jìn)行SERS檢測(cè)，檢測(cè)限分別為0.8μg/mL和0.4μg/mL。SERS技術(shù)測(cè)量樣品的制備方法簡(jiǎn)單，具有很大的潛力，可用于快速分析的豬尿中萊克多巴胺。

陳錫愛等[42]通過研究證明了將太赫茲時(shí)域光譜技術(shù)（terahertz time domain spectroscopy，THz-TDS）用于鹽酸萊克多巴胺檢測(cè)和識(shí)別的可行性，為其殘留檢測(cè)的應(yīng)用提供了新的實(shí)驗(yàn)方法。THz-TDS測(cè)量樣品的制作過程簡(jiǎn)單，采用粉末壓片的方法即可獲得；樣品的THz時(shí)域光譜在幾十秒內(nèi)就可獲得，因而有望成為一種有效的物質(zhì)快速檢測(cè)技術(shù)。

6 化學(xué)發(fā)光法

馮婷等[43]根據(jù)堿性介質(zhì)中萊克多巴胺對(duì)魯米諾-鐵氰化鉀體系化學(xué)發(fā)光的增敏作用，建立了新的流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光快速測(cè)定萊克多巴胺的方法，相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度與萊克多巴胺質(zhì)量濃度在0.004～0.8μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢出限為2.5μg/kg，對(duì)于豬肉和尿樣中萊克多巴胺的加標(biāo)回收率為69.3%～101.3%。

7 展 望

綜上所述，免疫分析方法具有設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單、快速、特異性等優(yōu)點(diǎn)，可以作為大量樣品的初篩方法；色譜分析技術(shù)靈敏度和準(zhǔn)確性都較高，可作為萊克多巴胺的定量和確證方法；傳感器技術(shù)設(shè)備簡(jiǎn)單、檢測(cè)迅速、靈敏、樣品前處理簡(jiǎn)單，有望成為大批量樣品和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)萊克多巴胺的快速篩選方法；分子印跡技術(shù)具有很強(qiáng)的識(shí)別性和實(shí)用性，和其他技術(shù)結(jié)合后將廣泛應(yīng)用于萊克多巴胺的檢測(cè)；時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)和表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)在萊克多巴胺的檢測(cè)中的應(yīng)用也將有廣闊的前景。

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