舒心通脈方對(duì)心肌重構(gòu)小鼠T 淋巴細(xì)胞亞群的影響

陳 穎 陳衛(wèi)平

（上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，上海200082）

舒心通脈方對(duì)心肌重構(gòu)小鼠T 淋巴細(xì)胞亞群的影響

陳 穎 陳衛(wèi)平

（上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，上海200082）

目的 觀察舒心通脈方對(duì)心肌重構(gòu)小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響。方法將51只Balb／c小鼠隨機(jī)分為6組（正常組、正常加中藥中劑量組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組），采用腹主動(dòng)脈結(jié)扎法建立心肌重構(gòu)小鼠模型。予舒心通脈方灌胃干預(yù)30d，檢測血清與心肌CD4＋和CD8＋含量。結(jié)果模型組小鼠血清與心肌的CD4＋含量以及CD4＋／CD8＋值較正常組顯著降低（P＜0.05），中藥中、高劑量組血清與心肌的CD4＋含量以及CD4＋／CD8＋值較模型組顯著上升（P＜0.05）。結(jié)論舒心通脈方可調(diào)節(jié)心肌重構(gòu)小鼠的CD4＋／CD8＋失衡，可能有一定的改善心肌重構(gòu)作用。

舒心通脈；心肌重構(gòu)；T淋巴細(xì)胞亞群

慢性心力衰竭（Chronic heart failure，CHF）是一種由多種心臟疾病導(dǎo)致心功能不全的復(fù)雜臨床綜合征，是各種心血管疾病終末階段的臨床表現(xiàn)［1］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，心衰的治療目標(biāo)不僅僅是改善癥狀、提高生活質(zhì)量，更重要的是針對(duì)心肌重構(gòu)的機(jī)制，防止和延緩心肌重構(gòu)的發(fā)展，從而降低心衰的死亡率和住院率［2］。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)于心衰的治療，尤其是針對(duì)心肌重構(gòu)的干預(yù)雖然已經(jīng)取得較大進(jìn)展，但因相關(guān)的藥物不良反應(yīng)明顯，且藥物費(fèi)用居高不下，臨床應(yīng)用受到很大限制。所以，臨床工作者的任務(wù)仍然很艱巨，進(jìn)一步挖掘既能改善癥狀又能阻止病情進(jìn)展的有效措施，是防治心衰的關(guān)鍵。與西醫(yī)的治療手段相比，傳統(tǒng)中藥具有標(biāo)本兼治、雙向調(diào)節(jié)且毒副作用小的優(yōu)勢，為心衰的治療帶來了新的思路與方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物與分組Balb／c小鼠62只，雄性，體重（25±4）g，購于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。將小鼠隨機(jī)分為6組（正常組、正常加中藥中劑量組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組）。

1.1.2 受試藥物舒心通脈方組成：炮附子9g，干姜9g，細(xì)辛9g，白術(shù)6g，黃芪6g，生蒲黃6g。根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》［4］計(jì)算出中藥低、中、高劑量組的人鼠等效劑量分別為0.21、0.43、0.85g／kg，即分別為人體臨床給藥劑量的0.5、1.0、2.0倍。按傳統(tǒng)工藝制備成水煎劑，減壓濃縮至0.02、0.04及0.08g／ml備用。

1.1.3 儀器與試劑FA2014型電子天平，上海精密科學(xué)儀器公司。Thermo Forma-86℃低溫冰箱，美國Eppendorf公司。DK-S32電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；P20、P200、P1000吉森移液器，法國Gilson公司；Centrifuge 5417R型低溫高速離心機(jī)，德國Eppendorf公司。高壓滅菌鍋，美國Yamato公司。Facs型流式細(xì)胞儀，美國BecDick公司。

1.2 方法

1.2.1 心肌重構(gòu)小鼠模型的制作用復(fù)合麻醉劑行腹腔注射麻醉，固定于手術(shù)臺(tái)上，劍突下腹正中切口，分層打開腹腔，在腎動(dòng)脈分支以上鈍性游離腹主動(dòng)脈，將7號(hào)注射器針頭平行置于腹主動(dòng)脈上，用4號(hào)手術(shù)絲線將腹主動(dòng)脈和注射器一同結(jié)扎，然后緩慢將注射器撤出，關(guān)腹，分層縫合。

1.2.2 給藥干預(yù)與取材造模完成后第二天開始，正常組與模型組給予飲用水，中藥給藥組給予不同濃度的舒心通脈方，連續(xù)給藥20d，在末次給藥后處理動(dòng)物。予3%戊巴比妥溶液麻醉小鼠，腹主動(dòng)脈取血，處死小鼠后取出左心室肌組織。

1.2.3 指標(biāo)測定動(dòng)脈血經(jīng)6000r／min離心15min，分離出上層血清；稱取心肌組織，按100mg組織配伍1ml生理鹽水的比例，加入生理鹽水，制備組織勻漿，經(jīng)6000r／min離心15min，取上清液檢測；采用流式細(xì)胞儀檢測血清與心肌組織中CD4＋和CD8＋含量。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)以±S）表示，采用多組間單因素方差分析，組間兩兩比較用q檢驗(yàn)，使用SPAA13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠血清T淋巴細(xì)胞亞群含量及CD4＋／CD8＋值比較如表1所示，正常加中藥中劑量組小鼠CD4＋和CD8＋含量以及CD4＋／CD8＋值較正常組無明顯改變（P＞0.05），模型組大鼠CD4＋含量以及CD4＋／CD8＋值較正常組顯著降低（P＜0.05），中藥中、高劑量組的CD4＋含量以及CD4＋／CD8＋值較模型組顯著上升（P＜0.05）。

表1 各組小鼠血清T淋巴細(xì)胞亞群比較含量及CD4＋／CD8＋值（χ±S）

2.2 各組小鼠心肌組織T淋巴細(xì)胞亞群含量及CD4＋／CD8＋值比較如表2所示，正常加中藥中劑量組小鼠CD4＋和CD8＋含量以及CD4＋／CD8＋值較正常組無明顯改變（P＞0.05），模型組大鼠CD4＋、CD8＋含量以及CD4＋／CD8＋值較正常組顯著降低（P＜0.05），中藥低劑量組的CD4＋／CD8＋值較模型組顯著上升（P＜0.05）。中藥低、中、高劑量組的CD4＋含量以及CD4＋／CD8＋值較模型組顯著上升（P＜0.05）。

表2 各組小鼠心肌組織T淋巴細(xì)胞亞群比較含量及CD4＋／CD8＋值（χ±S）

3 討論

目前已明確，導(dǎo)致心衰發(fā)生發(fā)展的基本機(jī)制是心肌重構(gòu)。心肌重構(gòu)是由于一系列復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制造成心肌結(jié)構(gòu)、功能和表型的變化［1］。其特征為：①伴有胚胎基因再表達(dá)的病理性心肌細(xì)胞肥大，導(dǎo)致心肌細(xì)胞收縮力降低，壽命縮短；②心肌細(xì)胞凋亡，這是心衰從代償走向失代償?shù)霓D(zhuǎn)折點(diǎn)；③心肌細(xì)胞外基質(zhì)過度纖維化或降解增加。臨床上可見心肌肌重和心室容量的增加，以及心室形狀的改變，橫徑增加呈球狀。

T淋巴細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞，在胸腺中發(fā)育成熟后進(jìn)入外周血中。CD為細(xì)胞分化抗原，是細(xì)胞表面的一種標(biāo)記。根據(jù)T細(xì)胞不同的表面標(biāo)記和功能可分為CD3、CD4＋和CD8亞群。炎性細(xì)胞因子和T淋巴細(xì)胞亞群在心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展中共同起著重要作用已為人們所認(rèn)識(shí)。CD4、CD8水平降低提示細(xì)胞免疫功能低下，CD4／CD8比值下降提示輔助性T淋巴細(xì)胞損害［3］。研究發(fā)現(xiàn)CHF患者體內(nèi)存在針對(duì)心肌自身的免疫應(yīng)答，心肌損傷后自身抗原的暴露啟動(dòng)了免疫應(yīng)答過程，最終參與了心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展［4］。國外研究表明，T淋巴細(xì)胞數(shù)量改變誘發(fā)和促進(jìn)了心衰［5］。Eriksson等［6］在心肌炎鼠模型中發(fā)現(xiàn)，CD4T細(xì)胞和白細(xì)胞介素-1受體1共同參與了擴(kuò)張型心肌病心力衰竭的發(fā)展過程。Fuertmayor等［7］報(bào)道，不同心功能分級(jí)的外周血CD3即總的淋巴細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組沒有差異，但CD4水平隨心功能減退而明顯下降，主要表現(xiàn)在心功能Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)組，CD4／CD8也明顯降低，說明輔助性T淋巴細(xì)胞參與了心力衰竭的發(fā)展過程，此時(shí)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能是下降的。CD8隨心功能減退而升高，主要表現(xiàn)在心功能Ⅳ級(jí)組，說明CD8作為細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞或是直接參與了心衰的發(fā)展，或是因?yàn)镃D4水平下降而出現(xiàn)相對(duì)升高，因?yàn)镃D4水平下降和CD4／CD8出現(xiàn)在心功能Ⅲ級(jí)組，而CD8升高發(fā)生在心功能Ⅳ級(jí)。國外研究認(rèn)為，在心衰慢性期，CD4T細(xì)胞比例下降與左心室容量負(fù)荷增加、心肌細(xì)胞死亡代以纖維化、收縮功能失調(diào)及惡化有關(guān)［8］。國內(nèi)研究表明，炎性細(xì)胞因子的過度表達(dá)和T淋巴細(xì)胞數(shù)量的改變誘發(fā)和促進(jìn)了心力衰竭［9］。在心力衰竭的慢性期，CD4細(xì)胞比例下降，與左心室容量負(fù)荷增加、心肌細(xì)胞死亡代之以纖維化、心肌收縮功能失調(diào)和惡化有關(guān)［10］。據(jù)報(bào)道，T淋巴細(xì)胞亞群的異?？赡軈⑴c了心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展，也可用于心力衰竭程度的判斷，也可能是CHF患者易于并發(fā)感染的原因之一，但是CHF患者T淋巴細(xì)胞亞群減少的機(jī)制尚待探討［11］。

中醫(yī)學(xué)明確地闡述了心氣虛是心衰病機(jī)中不可或缺的因素。心氣虛進(jìn)一步發(fā)展則形成陽虛，心陽不足時(shí)，陽虛則寒，寒則血凝而不能流，形成心血瘀阻。針對(duì)心衰的病因病機(jī)，多數(shù)醫(yī)家均以溫陽、益氣、活血、利腎肺等為基本治療原則［12］。舒心通脈方來源于《湯液本草》與《內(nèi)外傷辨惑論》，主要為炮附子、干姜、細(xì)辛、白術(shù)、黃芪、生蒲黃。方中取附子辛熱之性，溫補(bǔ)心腎之陽，通行血脈；輔以干姜、細(xì)辛，以溫通全身陽氣；益以白術(shù)、黃芪、生蒲黃，化瘀而不傷正。諸藥相伍，通補(bǔ)兼施，溫而不燥、補(bǔ)而不滯，以達(dá)舒心通脈、益氣活血之效，以達(dá)標(biāo)本同治。

中藥研究方面，國內(nèi)研究通過觀察益氣養(yǎng)陰、活血化瘀法對(duì)病毒性心肌疾病小鼠的T細(xì)胞亞群的影響，與空白對(duì)照組相比，各組小鼠CD8＋T細(xì)胞含量明顯升高，CD4＋／CD8＋明顯降低（P＜0.05）；與模型對(duì)照組相比，中藥高、低劑量組能夠明顯降低CD8＋T細(xì)胞含量，升高CD4＋／CD8＋比值（P＜0.05）；中藥高劑量組與中藥低劑量組相比無顯著差異。各組間CD4＋T細(xì)胞含量無顯著差異（P＞0.05）［13］。有臨床研究觀察晚期惡性腫瘤患者服用中藥益氣消積膏后對(duì)癥狀以及T細(xì)胞亞群的影響，T細(xì)胞亞群中的Th細(xì)胞檢測數(shù)值治療前與治療后相比較，治療后明顯優(yōu)于治療前（P＜0.05）［14］。

本研究顯示，舒心通脈方可調(diào)節(jié)心室重構(gòu)小鼠的CD4＋／CD8＋失衡，可能有一定的改善心室重構(gòu)作用。目前暫無中藥方劑對(duì)心室重構(gòu)患者CD4＋／CD8＋的作用的臨床報(bào)道，尤其對(duì)于按照心氣虛證中醫(yī)辨證分型進(jìn)行中藥干預(yù)T淋巴細(xì)胞亞群的臨床研究暫缺。本研究可作為進(jìn)一步臨床研究的基礎(chǔ)，為心氣虛證的中西醫(yī)結(jié)合治療提供參考。

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Ef f e c t of Su xin t o n gmai-Re cip o n T Cell Su b se t o f Ca r dia c Ven t ricle Re c o ns tit u tio n Rat s

Chen Ying Chen Weiping(Department of pharmacy,Shanghai TCM-Intergrated Hospital,Shanghai,200082,China)

ObjectiveTo observe effect of Suxintongmai-Recip on T cell subset of myocardium reconstitution rats．Methods51 Balb／c rats were randomly divided into six groups（Normal group，Normal＋traditional Chinese medicine in dose of middle group，traditional Chinese medicine in dose of low，middle，high group），The rat model of myocardium reconstitution was established by using the method of abdominal aorta ligation．Except Normal group，the rats was given Suxintongmai-Recip by means of intragastric administration for 30 days，and the content of CD4＋and CD8＋in blood serum and cardiac muscle tissue were detected．ResultsIn the model group the content of CD4＋and CD4＋／CD8＋in blood serum and cardiac muscle tissue decreased significantly compared with those in the normal group（P＜0.05）．In the traditional Chinese medicine dose of middle，high group the content of CD4＋and CD4＋／CD8＋in blood serum and cardiac muscle tissue rised significantly compared with those in the model group（P＜0.05）．ConclusionSuxintongmai-Recip could correct the CD4＋／CD8＋imbalance of myocardium reconstitution rats，perhaps had partial effect on improving cardiac ventricle reconstitution．

Suxintongmai；Myocardium reconstitution；T cell subset

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.20.104

1672-2779（2013）-20-0151-03

楊 杰

2013-08-21）