汗?jié)撝讣yDNA等位基因分型研究

龍 兵,羅 楊,皮建華，張德明,文 雯

（1.四川警察學(xué)院 四川瀘州 646000；2.四川大學(xué) 四川成都 610041；3.瀘州市公安局 四川瀘州 646000）

汗?jié)撝讣y是指含有手指脊線分泌的脊線汗或粘有臉部皮膚皮脂汗的手指末端與客體接觸后，留下肉眼不能直接看見的指紋印跡[1]。汗?jié)撝讣y是犯罪現(xiàn)場(chǎng)十分常見的痕跡物證，是傳統(tǒng)痕跡檢驗(yàn)的重要研究和檢測(cè)對(duì)象。汗?jié)撝讣y中含有微量脫落細(xì)胞[2,3]。隨著DNA檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，實(shí)現(xiàn)了DNA檢測(cè)的微量化，使得汗?jié)撝讣y的DNA分析成為可能[4]。本次研究主要探討了汗?jié)撝讣yDNA基因座等位基因分型的表現(xiàn)及其原因。

一、材料與方法

（一）樣本及DNA提取。

5名志愿者分別在玻璃板上遺留5枚拇指汗?jié)撝讣y，共25份汗?jié)撝讣y檢材。提取每位志愿者的口腔拭子，共5份樣本，用于驗(yàn)證汗?jié)撝讣yDNA檢測(cè)結(jié)果，每份口腔拭子樣本均做三個(gè)平行樣本檢測(cè)。采用手電側(cè)光照射，棉簽擦拭轉(zhuǎn)移汗?jié)撝讣y。Chelex-100法提取檢材DNA。

（二）PCR擴(kuò)增。

采用AB公司ID試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為10ul。AB公司9700 PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性11min，94℃變性1min，59℃退火1min，72℃延伸1min， 共進(jìn)行32個(gè)循環(huán)后， 60℃保溫60min。

（三）電泳檢測(cè)及分析。

擴(kuò)增產(chǎn)物采用AB公司3130基因自動(dòng)分析儀電泳，Genemapper3.2軟件進(jìn)行分析。電泳體系為：1ulPCR擴(kuò)增產(chǎn)物，10ul去離子甲酰胺,1.25ul GS500LIZ內(nèi)標(biāo)。

二、 結(jié) 果

25份汗?jié)撝讣y檢材中8份檢材獲得較好STR分型。17份檢材STR分型效果較差,其中5份檢材未出現(xiàn)STR分型，4份檢材出現(xiàn)部分分型峰較低的STR分型，8份檢材出現(xiàn)分型錯(cuò)誤。出現(xiàn)的錯(cuò)誤分型結(jié)果中有的等位基因表現(xiàn)為混合樣本分型結(jié)果，比如D21S11基因座口腔拭子基因分型為29-31.2，而汗?jié)撝讣y檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)為27-28.2-29-31.2-36（如圖1）。有的汗?jié)撝讣yDNA基因座出現(xiàn)等位基因丟失現(xiàn)象，比如D16S539基因座口腔拭子基因分型為11-13，汗?jié)撝讣y分型結(jié)果為11-11，丟失了等位基因13（如圖2）；TPOX基因座等位基因分型為8-9，汗?jié)撝讣y分型結(jié)果為9-9，丟失了等位基因8（如圖3）。有的汗?jié)撝讣y表現(xiàn)為等位基因錯(cuò)誤分型，比如D16S539基因座口腔拭子基因分型為11-11，汗?jié)撝讣y分型結(jié)果12-12（如圖4），分型錯(cuò)誤。

三、 討 論

手指上的脫落細(xì)胞一部分來源于手指皮膚本身的脫落細(xì)胞，一部分來源于手指經(jīng)常觸摸人體皮膚而粘附的脫落細(xì)胞兩者組成。在正常的新陳代謝下，人體皮膚表皮的復(fù)層上皮細(xì)胞不斷衰老角化或損傷脫落，由復(fù)層扁平上皮細(xì)胞層的基底層細(xì)胞不斷分裂增生補(bǔ)充。

汗?jié)撝讣y屬于微量DNA檢材容易受到外源性DNA的污染[5]，污染可能來自于檢材的提取環(huán)節(jié)，可能來自實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的環(huán)節(jié)[6]。在提取志愿者指紋前，志愿者的手可能與他人有接觸（如，握手）使得他人的脫落細(xì)胞粘附在該志愿者手指上,因此在汗?jié)撝讣y上提取的DNA可能就不只是本人一個(gè)個(gè)體的DNA。在檢測(cè)中表現(xiàn)為一個(gè)基因座出現(xiàn)2個(gè)以上等位基因這種混合樣本的表現(xiàn)（如圖1）。由于汗?jié)撝讣y屬于微量DNA檢材，容易導(dǎo)致部分等位基因擴(kuò)增失敗，出現(xiàn)等位基因丟失現(xiàn)象（如圖2，3）。汗?jié)撝讣y基因座出現(xiàn)錯(cuò)誤分型（如圖4）的原因可能是由于等位基因丟失和DNA污染的雙重原因?qū)е拢▊€(gè)體自身的DNA等位基因丟失，但檢測(cè)出污染DNA等位基因）。汗?jié)撝讣y的DNA檢測(cè)為汗?jié)撝讣y在公安工作中的應(yīng)用展開了新的方向，具有很好的研究和應(yīng)用前景。在汗?jié)撝讣y檢測(cè)結(jié)果的應(yīng)用和解讀上我們應(yīng)該進(jìn)行認(rèn)真的研判，要考慮其作為微量檢材可能受到外界各種因素的影響出現(xiàn)錯(cuò)誤分型，值得高度重視。本次研究無論是提取還是轉(zhuǎn)移汗?jié)撝讣y都是在比較理想的條件下進(jìn)行，不同于實(shí)際檢案。在實(shí)際案件中，汗?jié)撝讣y的提取、保存、轉(zhuǎn)移都會(huì)受到很多客觀因素的影響，比如溫度，時(shí)間，保存條件。我們將在以后的研究中增加相關(guān)影響因素的研究。

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