HPLC法測定牡丹皮配方顆粒丹皮酚和芍藥苷含量

戴淑娟，許玉芳，謝曉梅

(1.安徽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，安徽 合肥 230061；2.安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230038)

牡丹皮有清熱涼血、活血化瘀等功效[1]，其主要成分有丹皮酚(Paeonol)、丹皮酚原苷(Paeonocide)、芍藥苷(Paeoniflorin)等。牡丹皮配方顆粒是以飲片為原料制備而成。本文在前期研究[2]和文獻(xiàn)研究[3-5]基礎(chǔ)上,建立了一種同時測定牡丹皮配方顆粒中丹皮酚和芍藥苷含量的HPLC方法，該方法可有效控制牡丹皮配方顆粒質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10AB高效液相色譜儀(日本島津)，LC-Solution工作站；CP225D電子天平(德國Sartorious公司)；KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);石英亞沸高純水提取器(江蘇金城教學(xué)儀器廠)。

1.2 試藥 丹皮酚對照品(批號110708-200505，中國藥品生物制品檢定所)；芍藥苷對照品(批號110736-200525，中國藥品生物制品檢定所)；牡丹皮飲片購自亳州藥材市場，牡丹配方顆粒(自制)；乙腈為色譜純，水為亞沸高純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-水，梯度洗脫程序?yàn)? min(15%A)→10 min(20%A)→15 min(30%A)→25 min(55%A)；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：230 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取丹皮酚和芍藥苷對照品適量，置25 mL量瓶中，以15%乙腈溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，制得濃度為246 μg/mL丹皮酚和90 μg/mL芍藥苷的2種混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取牡丹皮配方顆粒，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于0.5 g飲片)，置具塞錐形瓶中，加入15%乙腈20 mL，稱重，冷浸2 h，超聲30 min，放冷，以15%乙腈補(bǔ)重、搖勻后濾過。取續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取2種混合對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于5 mL量瓶中，加15%乙腈定容至刻度，搖勻，得5個濃度系列的混合對照品溶液。按2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，以峰面積(A)對分析物濃度(C)作線性回歸，得丹皮酚回歸方程為:A=116 335C+797 063，r=0.999 3，線性范圍：4.1～246 μg/mL；芍藥苷回歸方程為：A=52 001C+75 854，r=0.999 7，線性范圍：1.35～90.0 μg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同1分供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄所測各組分面積，測得丹皮酚峰面積RSD為1.42%，芍藥苷峰面積RSD為0.83%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同1分供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣，丹皮酚峰面積RSD為3.89%，芍藥苷峰面積RSD為1.86%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批牡丹皮配方顆粒粉末5分,制成供試品溶液，測得丹皮酚峰面積的RSD為1.33%，芍藥苷峰面積的RSD為1.08%。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已測知含量的牡丹皮配方顆粒適量，共5分，精密稱重,按1∶1比例分別準(zhǔn)確加入丹皮酚和芍藥苷對照品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定并計(jì)算回收率。丹皮酚回收率為97.3%(RSD=1.04%)，芍藥苷為98.1%(RSD=1.02%)。

2.9 樣品含量測定 精密稱取牡丹皮配方顆粒粉末,按照“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液,按上述色譜條件測定峰面積，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算丹皮酚和芍藥苷百分含量,結(jié)果見表1。

表1 丹皮酚和芍藥苷含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

結(jié)果表明，取適當(dāng)濃度丹皮酚和芍藥苷對照品溶液，在200 nm～400 nm范圍內(nèi)做吸收光譜掃描，結(jié)果丹皮酚在314、274、228、213 nm波長處有最大吸收,芍藥苷在230 nm波長處有最大吸收。經(jīng)比對，2種成分在230 nm波長處吸收較好，故選擇230 nm為測定波長。

在色譜條件篩選實(shí)驗(yàn)中，對樣品提取方法、提取時間、流動相比例等多方面進(jìn)行考察，表明15%乙腈超聲提取樣品30 min,乙腈-水為流動相進(jìn)行梯度洗脫，得到的色譜峰峰型、各峰分離度均較理想。

本實(shí)驗(yàn)旨在建立牡丹皮配方顆粒中丹皮酚和芍藥苷的定量分析方法。該方法操作簡便、精密度高、重現(xiàn)性好，不僅可用于牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量分析，而且也適用于牡丹皮藥材和飲片，為有效控制藥品內(nèi)在質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]國家藥典委員會,中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:160.

[2]謝曉梅,戴淑娟,夏紅梅,等.高效液相色譜法測定牡丹皮配方顆粒和飲片中丹皮酚含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2006,12(12):28-29.

[3]解飛,封宇飛,胡欣,等.HPLC法測定消銀片中丹皮酚和芍藥苷的含量[J].藥物分析雜志,2006,26(4):460-462.

[4]劉劍,趙菁,鄭晶瑩,等.除草劑阿特拉津體內(nèi)生物學(xué)毒性的研究進(jìn)展[J].吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2012,38(6):1236-1238.

[5]楊健,邵璨,劉美娜.解肌退熱顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,28(3):539-540.