白介素-27rs153109多態(tài)性與免疫性血小板減少癥患者發(fā)病相關(guān)性研究

徐建芬 方治 趙海豐 吳寧寧 錢素英

白介素-27rs153109多態(tài)性與免疫性血小板減少癥患者發(fā)病相關(guān)性研究

徐建芬 方治 趙海豐 吳寧寧 錢素英

目的 探討白介素-27（IL-27）rs153109單核苷酸多態(tài)性與免疫性血小板減少癥（ITP）發(fā)病的相關(guān)性。 方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)對100例患者和100例健康對照者進(jìn)行IL-27 rs153109基因定型。 結(jié)果 整體分析提示ITP患者的IL-27 rs153109基因多態(tài)性與發(fā)病無相關(guān)性。根據(jù)年齡將患者分為兒童ITP和成人ITP時(shí)，兩組與對照組比較，該基因的基因型和等位基因頻率均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0．05）。再根據(jù)病程，將ITP患者分為急性兒童ITP、慢性兒童ITP、急性成人ITP和慢性成人ITP時(shí)，4組分別與對照組比較，該基因的基因型和等位基因頻率也均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0．05）。 結(jié)論 IL-27 rs153109基因多態(tài)性在ITP患者和健康對照者中有相似的分布，表明該基因多態(tài)性可能與ITP的發(fā)病無關(guān)。

免疫性血小板減少癥 多態(tài)性 IL-27

免疫性血小板減少癥（immune thrombocytopenic purpura，ITP）是一種獲得性器官特異性自身免疫性疾病，患者體內(nèi)產(chǎn)生了針對血小板膜糖蛋白的自身抗體，介導(dǎo)了網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對血小板的破壞[1-3]。ITP的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但有研究表明，輔助性T細(xì)胞Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞Tc的異常在ITP的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[4]。IL-27是IL-12家族的新型異二聚體細(xì)胞因子[4-5]，其基因多態(tài)性廣泛存在于人類遺傳突變中，與多種疾病的個(gè)體易感性相關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道[6-8]，IL-27 rs153109基因多態(tài)性與哮喘、慢性阻塞性肺病和炎性腸病的易感性明顯相關(guān)。本研究試圖探討該基因多態(tài)性與ITP發(fā)病間的關(guān)系，為進(jìn)一步研究ITP的發(fā)病機(jī)制提供方向。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇寧波市第二醫(yī)院血液科2008-01—2012-06收治的ITP患者100例。其中男42例，女58例，年齡7～72歲，中位年齡36歲。同時(shí)在本院體檢中心選擇年齡、性別相匹配的健康體檢者100例為對照組，其中男40例，女60例，年齡9～70歲，中位年齡35歲。ITP的診斷基于《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[9]，血小板＜100×109/L定義為血小板減少。其中，在6個(gè)月內(nèi)恢復(fù)定義為急性ITP；持續(xù)超過6個(gè)月為慢性ITP；第1次發(fā)病在0～14歲定義為兒童ITP；第1次發(fā)病年齡＞14歲定義為成人ITP。其中兒童急性ITP 6例，兒童慢性ITP 30例，成人急性ITP 12例，成人慢性ITP 52例。

1.2 IL-27 rs153109等位基因多態(tài)性的檢測 收集受試者肝素鈉抗凝外周血2ml，根據(jù)DNA純化試劑盒（Tiangen Biotech，北京）說明書提取基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)（PCRRFLP）的方法分析IL-27 rs153109等位基因多態(tài)性。20μl反應(yīng)混合物包含1×反應(yīng)緩沖液，50～150ng基因組DNA和10μl×PCR混合物。引物序列：正義鏈5′-CTGATCCTGACCTCACT CAACGC-3′；反義鏈 5′-CTGACTGG GACTGGGACTCAGC-3′。反應(yīng)條件：94℃5min，94℃30s，64℃30s，72℃30s 36個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。用Bstu I（New England Biolabs,美國）酶切A-G連接點(diǎn)，得到GG、GA、AA 3種基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，基因型分布和等位基因頻率分析采用χ2檢驗(yàn)。當(dāng)一個(gè)或更多個(gè)變量＜5時(shí)使用精確概率法。

2 結(jié)果

ITP患者IL-27 rs153109的3種基因型GG、GA、AA和等位基因G、A頻率分別是10.0%、50.0%、40.0%、35.0%和65.0%，對照組3種基因型和等位基因頻率分別是8.0%、52.0%、40.0%、34.0%和66.0%，比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。根據(jù)發(fā)病時(shí)年齡，將患者分為兒童組和成人組，兩組分別與對照組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），見表1。進(jìn)一步按照病程將患者分為急性兒童組、慢性兒童組、急性成人組和慢性成人組，3種基因型和等位基因分布頻率與正常對照比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05），見表2。

3 討論

ITP是由抗體介導(dǎo)的血小板破壞增加和血小板生成減少所致，具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[1-3]。目前普遍認(rèn)為自身免疫性疾病具有復(fù)雜的遺傳背景，其發(fā)生、發(fā)展是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。ITP是一種Th1細(xì)胞極化的自身免疫性疾病[3]，研究報(bào)道IL-27可以促進(jìn)Th1和Tc1細(xì)胞的極化，同時(shí)促進(jìn)TNF-α，IFN-γ和顆粒酶B的表達(dá)[5，10]。已有報(bào)道[11-13]IL-27參與了多種自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化癥的疾病過程，而Liu等[4]報(bào)道IL-27在活動(dòng)性ITP患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中明顯低表達(dá)，Li等[5]研究發(fā)現(xiàn)IL-27在初診活動(dòng)性ITP患者血漿中高表達(dá)，表明IL-27可能參與了ITP的發(fā)病。

表1 不同年齡的ITP患者和對照組IL-27 rs153109基因型和等位基因頻率分布[例（%）]

表2 急慢性ITP患者和對照組中IL-27 rs153109基因型和等位基因頻率分布[例（%）]

文獻(xiàn)報(bào)道[6-8]，IL-27 rs153109基因多態(tài)性與多種疾病如哮喘，慢性阻塞性肺病和炎性腸病的易感性明顯相關(guān)。本研究主要探討IL-27 rs153109基因多態(tài)性是否與ITP的發(fā)病相關(guān)，結(jié)果顯示：在所有ITP患者與對照組之間比較IL-27 rs153109的基因型頻率和等位基因頻率，以及根據(jù)年齡和病程將ITP患者分為急、慢性兒童ITP和急、慢性成人ITP，各組分別與對照組比較時(shí)，該基因位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

綜上所述，IL-27 rs153109基因多態(tài)性在ITP患者和健康對照有相似的分布，表明該基因多態(tài)性可能與ITP的發(fā)病無關(guān)。但本研究樣本量仍不夠大，尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究以證實(shí)。

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Interleukin-27 rs153109 polymorphism and risk for immune thrombocytopenic purpura

ITP Polymorphism IL-27

2013-01-07）

（本文編輯：胥昀）

寧波市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2012A610232）

315010 寧波市第二醫(yī)院血液腫瘤科 (徐建芬、方治、吳寧寧、錢素英)；天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院血液科(趙海豐）

徐建芬，E-mail:cjfjf2008@sina.com

【 Abstract】Objective To investigate the association of single nucleotide polymorphisms (SNP)of interleukin-27(IL-27) genes with the risk for immune thrombocytopenic purpura(ITP)．Methods The genotype of IL-27 rs153109 polymorphism was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)in 100 patients with ITP and 100 healthy individuals．Results In ITP patients,the frequencies of GG,GA and AA genotypes,and G and A alleles were 10．0%，50．0%，40．0%and 35．0%,65．0%,respectively．There was no significant difference in genotype and alleles distribution between ITP patients and healthy controls(P=0．88 and 0．83,respectively)．Similar results were found between the two groups when stratified by the age and disease course to subgroups acute adult,chronic adult,acute childhood and chronic childhood．Conclusion IL-27 polymorphism may not be involved in susceptibility to ITP．