美蘭染色法診斷糠秕孢子菌性毛囊炎的室內(nèi)質(zhì)量控制

吳紹男，李軼春，吳緒星（.廣西壯族自治區(qū)合浦縣皮膚性病防治院檢驗(yàn)科 5600；.廣西壯族自治區(qū)北海市中醫(yī)院檢驗(yàn)科 56000；.廣西壯族自治區(qū)合浦縣紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科 5600）

快速診斷糠秕孢子菌性毛囊炎的實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)檢查方法是滴加10%氫氧化鉀處理標(biāo)本，然后通過(guò)顯微鏡查找糠秕孢子菌；其他方法還有復(fù)方剛果紅染色法、派克墨水染色法、龍膽紫染色法［1］、美蘭染色法［2－3］等，經(jīng)過(guò)染色后，使用顯微鏡查找糠秕孢子菌。美蘭染色法是快速診斷糠秕孢子菌性毛囊炎的理想方法。其檢驗(yàn)的質(zhì)量保證對(duì)于持續(xù)提高實(shí)驗(yàn)室糠秕孢子菌檢驗(yàn)的工作效率和可信度非常重要。本研究采用美蘭染色法與培養(yǎng)法對(duì)256例疑似糠秕孢子菌性毛囊炎患者進(jìn)行檢測(cè)，分析影響美蘭染色法診斷糠秕孢子菌性毛囊炎的因素。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源采集自2011年1月至2012年3月來(lái)本院就診的疑似糠秕孢子菌性毛囊炎患者256例。需檢查的部位在檢查前1周不使用任何抗真菌藥物。

1.2 試劑0.6%堿性美蘭溶液；培養(yǎng)基按廖萬(wàn)清等主編《真菌病》的橄欖油培養(yǎng)基配方配制。

1.3 方法每例患者用75%乙醇消毒皮膚表面，用取材刀刮擠丘疹毛囊內(nèi)容物。納入試驗(yàn)的每例患者取2個(gè)標(biāo)本。將每例患者的其中一個(gè)標(biāo)本接種于培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)1周后鑒定結(jié)果；另一個(gè)標(biāo)本涂于一張玻片上，待涂膜干燥后，用火焰固定，滴加0.6%堿性美蘭液1滴，染色1min，然后沖水，涼干后用油鏡觀察，記錄結(jié)果。

2 結(jié)果

256例疑似糠秕孢子菌性毛囊炎患者中，培養(yǎng)陽(yáng)性210例，經(jīng)臨床診斷及治療跟蹤確診為糠秕孢子菌性毛囊炎患者為210例。美蘭染色法陽(yáng)性為201例，其中5例陽(yáng)性結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不符，為假陽(yáng)性，是污染所致，污染率為1.2%（5／256）；有14例陰性結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不符，為假陰性，漏檢率為5.55%（14／256）。

3 討論

經(jīng)回顧性分析，導(dǎo)致2例假陽(yáng)性原因是滴加香柏油時(shí)，加油棒曾接觸過(guò)陽(yáng)性標(biāo)本的涂膜，造成污染；另外導(dǎo)致3例假陽(yáng)性的原因是鏡頭接觸陽(yáng)性的涂片鏡檢完畢后，未用擦鏡紙仔細(xì)擦拭油鏡頭，除去鏡頭上可能黏附的孢子菌，將孢子菌傳遞給下一張涂片，造成假陽(yáng)性。造成假陰性的因素比較多，主要有標(biāo)本質(zhì)量、人員素質(zhì)等因素。根據(jù)ISO15189的內(nèi)涵，通常將過(guò)程控制分為分析前質(zhì)量管理、分析中質(zhì)量管理、分析后質(zhì)量管理［3－4］。下面從分析前、中、后談?wù)剬?duì)美蘭染色法診斷糠秕孢子菌性毛囊炎的室內(nèi)質(zhì)量控制的注意要點(diǎn)。

分析前質(zhì)量控制受到多種因素影響，也是最難控制的環(huán)節(jié)。分析前質(zhì)量控制已經(jīng)成為保證準(zhǔn)確檢驗(yàn)結(jié)果的重要核心部分［5］。目前基層醫(yī)院檢驗(yàn)科工作人員學(xué)歷低，缺乏檢驗(yàn)專業(yè)理論知識(shí)，存在人才缺乏和業(yè)務(wù)素質(zhì)普遍偏低的現(xiàn)象，特別是細(xì)胞學(xué)、形態(tài)學(xué)、微生物學(xué)等方面的知識(shí)缺乏比較突出［6］。重視檢驗(yàn)人員的科學(xué)技術(shù)素質(zhì)；加強(qiáng)專業(yè)學(xué)習(xí)，不斷更新專業(yè)理論知識(shí)，同時(shí)重點(diǎn)進(jìn)行糠秕孢子菌檢查操作技術(shù)的基礎(chǔ)教育及實(shí)際操作訓(xùn)練有利于提高檢查結(jié)果的質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)室必須建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）文件，操作要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。實(shí)驗(yàn)室每次制備一批新的染色液時(shí)以及每周需使用未經(jīng)染色的已知陽(yáng)性和陰性的涂片進(jìn)行染色鏡檢，并記錄結(jié)果，以保證染色液的質(zhì)量。載玻片不清潔、含有油脂，或載玻片有劃痕等在檢查時(shí)都會(huì)有誤差，所以一般要求用新的載玻片。新的載玻片應(yīng)先用熱肥皂水洗刷，再用1%～2%濃度的鹽酸浸泡24h，再用自來(lái)水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗3次，干燥備用。用前再用干凈紗布將載玻片擦拭幾次，用鉛筆在磨砂面載玻片的磨砂面上注明試驗(yàn)的序號(hào)及標(biāo)本的序號(hào)，若使用無(wú)磨砂面的載玻片，則使用玻璃刻刀在載玻片一端的1／3處進(jìn)行標(biāo)注，不能用記號(hào)筆或膠布，確保載玻片清潔無(wú)油脂、無(wú)劃痕。

患者需檢查的部位在檢查前1周不使用任何抗真菌藥物，否則可能出現(xiàn)假陰性。選取典型皮疹取材，嚴(yán)格編號(hào)或標(biāo)識(shí)。將采集到的丘疹毛囊內(nèi)容物，在載玻片正面右側(cè)2／3的中央處均勻涂抹面積為5mm×7mm 的卵圓形涂膜。把涂膜已干燥的載玻片放置在報(bào)紙上，如果透過(guò)涂膜不能分辨報(bào)紙上的5號(hào)字，則表明該玻片涂抹過(guò)厚，會(huì)影響鏡檢結(jié)果。固定溫度不宜過(guò)高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能造成細(xì)菌碳化，導(dǎo)致假性。涂片制好后應(yīng)及時(shí)染色，滴加美蘭染液蓋滿整張涂膜，染色期間始終保持涂膜被染色液完全覆蓋，染色太久會(huì)導(dǎo)致藍(lán)色背景太深，容易遮蓋細(xì)菌。

檢驗(yàn)人員要保證顯微鏡經(jīng)常處于良好的工作狀態(tài)。要使用光學(xué)性能好及機(jī)械部分靈活的顯微鏡，使用分辨率高尤其是油系物鏡的分辨率高的顯微鏡，并且要有良好的光源。嚴(yán)禁油鏡頭直接接觸涂片上的涂膜。按照結(jié)果報(bào)告的標(biāo)準(zhǔn)仔細(xì)觀察足夠的視野數(shù)。登記前反復(fù)核對(duì)檢驗(yàn)單、涂片上的標(biāo)注。檢驗(yàn)報(bào)告單是標(biāo)本檢測(cè)的最終結(jié)果，也是提供給臨床診斷的依據(jù)。也是分析后質(zhì)量控制工作的必備環(huán)節(jié)［7］。檢驗(yàn)后的每一張涂片結(jié)果應(yīng)按規(guī)定準(zhǔn)確記錄在實(shí)驗(yàn)室登記本上。審核結(jié)果、簽名，及時(shí)發(fā)出報(bào)告，以便盡早為臨床提供診斷依據(jù)。

糠秕孢子菌性毛囊炎是由圓形或卵圓形糠秕孢子菌引起的皮膚真菌病，好發(fā)于中青年，其外觀酷似尋常型痤瘡、細(xì)菌性毛囊炎，毛囊蟲樣毛囊炎、脂溢性皮炎等皮膚病，臨床上極易造成誤診。加深對(duì)糠秕孢子菌性毛囊炎發(fā)病原因、臨床特點(diǎn)、皮疹特征的認(rèn)識(shí)，加上相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室檢查，是防止糠秕孢子菌性毛囊炎誤診誤治的必要條件［8］。所有質(zhì)量控制的最終目的是實(shí)驗(yàn)室發(fā)出的檢驗(yàn)報(bào)告準(zhǔn)確、可靠，對(duì)臨床診斷、治療有參考價(jià)值［9］。只有做好室內(nèi)質(zhì)量控制，防止污染和漏檢，保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，才能防止糠秕孢子菌性毛囊炎誤診誤治，體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室存在的價(jià)值。

［1］徐明，張弘，鄧勁松，等.馬拉色菌顯微鏡檢查的方法學(xué)比較［J］.福建醫(yī)藥雜志，2011，33（1）：70－72.

［2］鐘白玉，刁慶春，黃秀英.方法介紹：美蘭染色法在馬拉色菌毛囊炎診斷中的應(yīng)用［J］.嶺南皮膚性病科雜志，2002，9（2）：154，160.

［3］熊琳，代亞玲.美蘭染色法在馬拉色菌檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.四川大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2004，35（2）：277－279.

［4］叢玉隆.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)高級(jí)教程［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2010：1012－1017.

［5］董大光.淺談醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)分析前質(zhì)量控制［J］.中華全科醫(yī)學(xué)，2012，10（7）：1143－1144.

［6］曾再祥.質(zhì)量控制與醫(yī)院檢驗(yàn)科管理［J］.中外醫(yī)療，2012，31（11）：145.

［7］吳靜一.做好血液流變學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制的探討［J］.中國(guó)社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2012，14（17）：275.

［8］王潔，胡利發(fā)，杜華，等.糠秕孢子菌毛囊炎37例誤診分析［J］.西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（3）：226－227.

［9］趙惠，劉勛.臨床微生物學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制的管理［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（6）：757－758.