大劑量何首烏醇提物致大鼠多臟器損傷研究

李奇 趙奎君 趙艷玲 王伽伯 方芳 呂旸 馬致潔 蔣冰倩 浦仕彪 鄒正升 滕光菊 宮嫚 肖小河

何首烏始載于《開寶本草》，為蓼科植物何首烏PolygonummultiflorumThunb .的干燥塊根。味苦、甘、澀，微溫，歸肝、心、腎經(jīng)，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便等功效；制何首烏為何首烏的炮制加工品，二者歸經(jīng)性味相同，具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨、化濁降脂等功效[1]。何首烏與人參、靈芝、冬蟲夏草歷來并稱為中國“四大仙草”，古今皆為醫(yī)家、飲食家所推崇，成為滋補(bǔ)延年之佳品。臨床中常用于治療肝、腎精血虧虛所致的頭昏目眩、須發(fā)早白、腰膝酸軟及遺精等，近年來用于高血壓、高血脂、冠心病、斑禿、脫發(fā)等證的治療，療效滿意。但是近年來國內(nèi)外關(guān)于何首烏肝毒性的報(bào)道屢見不鮮[2-9]：如英國、澳大利亞、荷蘭、意大利、哥倫比亞、韓國和中國香港等相繼出現(xiàn)何首烏肝損害的病例報(bào)道，癥狀分別表現(xiàn)為輕重度黃疸、急慢性肝炎、肝功能異常等，因而引發(fā)了國內(nèi)外學(xué)者對(duì)何首烏用藥安全性問題的高度關(guān)注[10]。

然而，有關(guān)何首烏毒性的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果各不相同且多有矛盾[11-20]，何首烏肝毒性的客觀真實(shí)性仍未闡明，難以正確評(píng)價(jià)何首烏臨床用藥的安全性。本文通過兩部分實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)何首烏生品和炮制品的不同提取物的毒性作用：首先是比較不同提取物，找到毒性較大的提取物；然后，針對(duì)毒性較大的提取物，以CCl4作為陽性對(duì)照，進(jìn)一步評(píng)價(jià)何首烏對(duì)大鼠主要臟器的損傷情況，并考察其組織病理損傷與血生化指標(biāo)的相關(guān)性。為了盡可能暴露出何首烏潛在的毒性，本文在較大劑量下考察了何首烏損傷肝臟等臟器的可能性。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

生何首烏(批號(hào)：10050904)購于北京綠野藥業(yè)有限公司，經(jīng)解放軍第三〇二醫(yī)院肖小河研究員鑒定為蓼科植物何首烏(PolygonummultiflorumThunb.)的干燥塊根。制何首烏(批號(hào)：10122402)由上述同一批生何首烏炮制而成，炮制方法參照《中華人民共和國藥典(2010年版)》及《北京市中藥材炮制規(guī)范》，由北京綠野藥業(yè)有限公司協(xié)助完成。

SD大鼠，SPF級(jí)，體重160 g左右，雄性，共132只，購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(合格證號(hào)SCXK-軍2007-004)。動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障動(dòng)物房，室溫(20±2)℃,相對(duì)濕度60%～70%,通風(fēng)良好、環(huán)境安靜,室內(nèi)保持12小時(shí)照明,12小時(shí)黑暗,并定期消毒。

2500型超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國Heidolph公司),邁瑞B(yǎng)S-300全自動(dòng)生化分析儀(上海富眾生物科學(xué)有限公司)。

1.2藥品制備

本實(shí)驗(yàn)醇提物所采取的提取方法為：將生何首烏和制何首烏分別粉碎得粗粉，加6倍量的75%乙醇冷浸提取，共提取5次，每次48小時(shí)，合并醇浸提取液，濃縮并減壓干燥，制得干粉備用。水提物所采取的提取方法為：將生何首烏和制何首烏分別粉碎得粗粉，加10倍量的蒸餾水煎煮1.5小時(shí)，回流提取2次，合并提取液，濃縮并減壓干燥，制得干粉備用。藥材粉碎通過200目篩即得藥材全粉。每次給藥前按生藥量配制藥液，水浴加熱至37 ℃時(shí)使用。

1.3何首烏不同提取物的毒性比較試驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠隨機(jī)分為7組，生何首烏醇提物、制何首烏醇提物、生何首烏水提物、制何首烏水提物、生何首烏全粉、制何首烏全粉和正常對(duì)照組，每組12只，均為雄性。各給藥組劑量均為20 g/kg。按4 ml/200 g體重灌胃給藥，正常對(duì)照組給相同量蒸餾水,連續(xù)給藥28小時(shí)。給藥期間動(dòng)物自由飲食。每日觀察給藥前后各組每只動(dòng)物的外觀體征,行為活動(dòng),毛發(fā)變化、大小便形狀、顏色及有無異常分泌物等。每7天大鼠眼眶取血,分離血清,檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)等生化指標(biāo)的變化，動(dòng)物股動(dòng)脈取血后處死,進(jìn)行全面系統(tǒng)尸檢,對(duì)、肝、肺、腎、脾等臟器進(jìn)行肉眼觀察,記錄有異常的臟器。

1.4何首烏醇浸提物的亞急性毒性試驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠隨機(jī)分為4組,分別為正常對(duì)照組(Control),陽性對(duì)照組(CCl4)，生何首烏組(Crude Polygonum multiflorum，CP)、制何首烏組 (Prepared Polynonum multiflorum, PP),每組12只,均為雄性。各給藥組劑量均為40 g/kg。按4 ml/200 g體重灌胃給藥, 對(duì)照組給相同量蒸餾水, 陽性對(duì)照組按1.25 ml/kg CCl4腹腔注射(每周3次)，連續(xù)給藥28天(4周)。給藥期間動(dòng)物自由飲食。每日觀察給藥前后各劑量組每只動(dòng)物的外觀體征,行為活動(dòng),毛發(fā)變化、大小便形狀、顏色及有無異常分泌物等。分別在給藥0、7、14、28天稱動(dòng)物體重,計(jì)算體重增長率。給藥期間每7天大鼠眼眶取血,分離血清,全自動(dòng)生化儀檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素(UREA)、谷氨?；D(zhuǎn)移酶(γ-GT)、肌酐(CREA)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、結(jié)合膽紅素(DBIL)、磷酸肌酸激酶(CK)指標(biāo)變化。動(dòng)物股動(dòng)脈取血后處死, 進(jìn)行全面系統(tǒng)尸檢,對(duì)肝、肺、腎、脾、性腺、甲狀腺、胸腺、回腸等進(jìn)行肉眼觀察,記錄有異常的臟器,稱重并計(jì)算臟器系數(shù)。尸檢后取肝、腎、肺組織進(jìn)行組織病理檢測。

1.5組織病理檢測

用10%中性甲醛溶液固定,經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片(厚4～5 μm)、HE染色。在光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理變化。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1何首烏不同提取物的毒性差異

初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：生何首烏和制何首烏的醇提物均可使大鼠行為活動(dòng)減少，毛色發(fā)黃并出現(xiàn)便溏現(xiàn)象。尸檢后肉眼觀察：生何首烏醇提物組(6/12)、制何首烏醇提物組(4/12)均出現(xiàn)肝臟腫大、變色、纖維化等病變特征，但ALT和AST無顯著性變化。生何首烏水提物組(3/12)和制何首烏水提物組(1/12)也出現(xiàn)行為活動(dòng)減少、毛色發(fā)黃等現(xiàn)象，但是發(fā)現(xiàn)肝臟僅輕微腫大，無其他明顯病變特征。生何首烏全粉組和制何首烏全粉組無明顯異?，F(xiàn)象。

2.2何首烏醇提物對(duì)大鼠的臟器毒性

2.2.1 對(duì)大鼠體重和臟器指數(shù)的影響 各給藥組動(dòng)物均出現(xiàn)活動(dòng)減少、皮膚毛色變黃、便溏且呈灰白色等現(xiàn)象。根據(jù)圖1可知：各給藥組大鼠體重增長均受到不同程度的抑制作用，生何首烏組大鼠增長趨勢明顯緩慢(P>0.05)且受到抑制，但在實(shí)驗(yàn)第4周時(shí)顯示出抑制作用減弱的態(tài)勢，大鼠體重顯著性增長(P<0.05)；制何首烏和CCl4陽性藥對(duì)大鼠體重增長也存在明顯的抑制作用，但較生何首烏為輕。結(jié)果表明，何首烏可抑制大鼠體重增長，其中生何首烏比制何首烏嚴(yán)重。

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組；

PP：制何首烏組。與正常對(duì)照組相比，aP<0.05;bP<0.01

圖1 各組大鼠的體重增長動(dòng)態(tài)變化

臟器指數(shù)可一定程度反映實(shí)驗(yàn)大鼠與正常大鼠臟器之間的差異，對(duì)于臟器損害程度監(jiān)測具有一定的指導(dǎo)意義。根據(jù)圖2可知：生何首烏和CCl4陽性藥可使大鼠肝臟和腎臟一定程度腫大，肝臟指數(shù)和腎臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；而且生何首烏還可使大鼠肺臟一定程度腫大，肺臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果提示：生何首烏可導(dǎo)致大鼠肝臟、腎臟和肺臟腫大及病變。

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組；

2.2.2 對(duì)大鼠肝腎功能指標(biāo)的影響 課題組對(duì)各項(xiàng)生化指標(biāo)實(shí)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：結(jié)合DBIL、ALB、CREA、ALP和CK這5項(xiàng)指標(biāo)給藥后7天、14天、21天均沒有顯著性變化，而在給藥28天后發(fā)生顯著性改變；ALT和AST這兩項(xiàng)指標(biāo)給藥后7天、14天、21天、28天后均無顯著性差異，但是于給藥第3天后ALT和AST曾經(jīng)出現(xiàn)一過性顯著升高。根據(jù)圖3可知，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期中，生何首烏組大鼠的ALT和AST除第3天出現(xiàn)顯著升高(P<0.05)之外，其他各檢測時(shí)間點(diǎn)均無顯著性差異,制何首烏組也無顯著性改變。根據(jù)圖4可知，生何首烏組大鼠的DBIL和ALP顯著升高，CREA和ALB顯著降低；制何首烏組大鼠ALB、CREA和CK顯著降低。從具有顯著性差異的生化指標(biāo)來看，生何首烏比制何首烏差異程度大，可一定程度反映生何首烏的毒性作用大于制何首烏。

2.2.3 對(duì)大鼠肝組織的影響 生何首烏組有2例(2/12)死亡，1例(1/12)肝組織中度損傷，4例(4/12)肝組織輕度損傷；制何首烏組有1例(1/12)死亡，7例(7/12)肝組織輕度損傷。四氯化碳模型組有3例(3/12)死亡，2例(2/12)肝組織中度損傷，3例(3/12)肝組織輕度損傷；正常對(duì)照組無損傷及死亡現(xiàn)象。根據(jù)圖5可以看出，與正常對(duì)照大鼠比較，生何首烏組大鼠肝臟組織可見灶性肝細(xì)胞壞死，肝細(xì)胞索排列紊亂，灶性肝細(xì)胞嗜酸性變，水腫顆粒樣變性，及肝細(xì)胞胞漿中可見部分脂滴等病變現(xiàn)象。制何首烏組可見肝細(xì)胞濁腫，肝細(xì)胞索排列較紊亂，肝血竇較狹窄及局部肝細(xì)胞嗜酸性變等病變現(xiàn)象。CCl4陽性對(duì)照組可見肝小葉周圍肝細(xì)胞廣泛脂肪變性，肝細(xì)胞呈星點(diǎn)狀腫大及胞漿透明且有大脂滴等病變特征。

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組；

圖3 各組大鼠的ALT和AST動(dòng)態(tài)水平變化

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組；

2.2.4 對(duì)大鼠腎組織的影響 生何首烏組出現(xiàn)5例(5/12)腎組織輕度損傷；制何首烏出現(xiàn)1例(1/12)腎組織中度損傷，5例(5/12)腎組織輕度損傷。根據(jù)圖6可以看出，與正常對(duì)照大鼠比較，生何首烏組大鼠可見腎小管上皮細(xì)胞水腫顆粒樣變性，腎小球體積增大且毛細(xì)血管腔內(nèi)紅細(xì)胞淤積，包曼氏囊腔狹窄并伴系膜細(xì)胞及基質(zhì)增生，伴有毛細(xì)血管腔開放欠佳等病變特征。制何首烏組可見腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫顆粒樣變性，腎小球體積增大且系膜區(qū)輕至中度增寬伴系膜細(xì)胞及基質(zhì)增生，局部毛細(xì)血管開放欠佳等病變特征。CCl4陽性對(duì)照組可見腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫顆粒樣變性，局部腎小球系膜基質(zhì)節(jié)段性輕度增多，腎小球毛細(xì)血管腔內(nèi)紅細(xì)胞輕度淤積等病變特征。

2.2.5 對(duì)大鼠肺組織的影響 生何首烏組出現(xiàn)3例(3/12)肺組織中度損傷，4例(4/12)肺組織輕度損傷；制何首烏組出現(xiàn)2例(2/12)肺組織中度損傷，5例(5/12)肺組織輕度損傷。根據(jù)圖7可以看出， 與正常對(duì)照大鼠比較， 生何首烏組大鼠可見局部肺泡壁間隔重度增寬伴單個(gè)核炎細(xì)胞浸潤及纖維組織增生等病變特征。制何首烏組可見肺泡壁較廣泛增寬伴單個(gè)核炎細(xì)胞浸潤及纖維組織增生等病變特征。CCl4陽性對(duì)照組可見肺泡壁間隔明顯增寬，間隔內(nèi)較多單個(gè)核炎細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管腔內(nèi)紅細(xì)胞淤積等病變特征。

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組； PP：制何首烏組

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組； PP：制何首烏組

注：Control：正常對(duì)照組；CCl4：肝損傷陽性對(duì)照組；CP：生何首烏組； PP：制何首烏組

3 討論

何首烏(生品和制品)不同提取物的毒性比較實(shí)驗(yàn)表明，醇提物的毒性比水提物和藥材全粉的毒性大，提示何首烏的肝毒性物質(zhì)可能集中在醇提物中。根據(jù)相似相溶的原理，醇提物比水提物含有較多的極性較弱蒽醌類成分，魯彥等[21]也認(rèn)為蒽醌主要存在于醇提物中。白研等[22]認(rèn)為何首烏中蒽醌類成分主要含有大黃素和大黃酚。美國國家衛(wèi)生研究院的研究表明，大黃素可引起F344/N大鼠和B6C3F1小鼠腎小管損傷及肝細(xì)胞病變[23]。孫向紅等[24]研究發(fā)現(xiàn)大黃素和大黃酸是何首烏引發(fā)肝毒性的主要成分，高濃度長時(shí)間下具有細(xì)胞毒作用。張瑞晨等[27]研究發(fā)現(xiàn)，何首烏95%乙醇洗脫物是其引起肝損傷的主要物質(zhì)，而大黃素是導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的成分之一。綜合來看，何首烏所含蒽醌類成分可能是其重要的肝毒性成分之一，同時(shí)也提示服用何首烏藥酒應(yīng)該保持一定的警惕性。

進(jìn)一步對(duì)何首烏醇提物的亞急性毒性實(shí)驗(yàn)表明，大劑量何首烏醇提物的毒性作用體現(xiàn)在多個(gè)方面，包括對(duì)體重增長的抑制作用、臟器指數(shù)異常、DBIL、ALB、CREA、ALP和CK等多項(xiàng)肝腎功能生化指標(biāo)的顯著改變，以及引起多個(gè)臟器(肝臟、腎臟和肺臟)的病理改變。特別值得一提的是，何首烏對(duì)大鼠臟器的損傷作用不只限于肝臟，對(duì)肺臟和腎臟同樣有損害，其中何首烏的肺損傷作用為首次報(bào)道。何首烏與大黃屬于同科植物，二者均含蒽醌類成分，文獻(xiàn)報(bào)道大黃蒽醌成分可引起腎損傷[25]，推測何首烏引發(fā)腎臟損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)可能也是蒽醌類成分。何首烏對(duì)肺臟有損傷作用，而大黃未發(fā)現(xiàn)有肺損傷報(bào)道，提示何首烏損傷肺臟的物質(zhì)可能與其所含特異性成分有關(guān)。

何首烏引發(fā)肝損傷的過程中，ALT和AST這兩項(xiàng)臨床常用的藥物肝損害檢測指標(biāo)，除在第3天(生首烏組)曾經(jīng)出現(xiàn)一過性顯著升高外，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)均無顯著性變化，而從動(dòng)物的一般表現(xiàn)和病理改變來看，何首烏(生品和制品)確實(shí)有肝臟損傷的作用。CCl4陽性對(duì)照組給藥第一周即引起ALT、AST顯著升高，其機(jī)制是·CCl3自由基導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，從而使肝細(xì)胞膜受到破壞、通透性發(fā)生改變，致使肝臟細(xì)胞中ALT和AST等酶漏出[26]，因而ALT和AST對(duì)CCl4引起肝臟損傷較為敏感。由于何首烏與CCl4對(duì)ALT和AST的影響規(guī)律不同，推測何首烏的肝損傷機(jī)制與CCl4不同。張瑞晨等[27]認(rèn)為何首烏醇提物對(duì)人正常肝細(xì)胞L02周期阻滯從而引起凋亡。在肝細(xì)胞凋亡的早期，不一定會(huì)引起血ALT和AST顯著升高。王濤等[28]報(bào)道了何首烏水提物也未引起血ALT和AST顯著升高。綜合來看，血清酶(ALT和AST)對(duì)何首烏早期肝損傷不敏感，難以早期有效預(yù)警中藥何首烏對(duì)肝臟損傷的發(fā)生。

從生何首烏和制何首烏對(duì)比考察結(jié)果來看，制何首烏的毒性作用顯著低于生何首烏，與傳統(tǒng)及文獻(xiàn)報(bào)道炮制減毒的認(rèn)識(shí)相同[29]。從文獻(xiàn)報(bào)道[30]及筆者相關(guān)研究來看，何首烏炮制品的質(zhì)量參差不齊，相當(dāng)數(shù)量的炮制品可能未達(dá)到足夠的炮制時(shí)間或簡化了炮制方法[31]，難以達(dá)到炮制減毒的目的，可能是導(dǎo)致臨床毒副反應(yīng)發(fā)生的重要因素之一[32]。而目前藥典檢測含量控制指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)難以反映炮制程度。因此，筆者認(rèn)為亟待增加反映炮制減毒程度的控制指標(biāo)，加強(qiáng)制何首烏減毒的控制，保障臨床用藥安全。此外，目前生何首烏和制何首烏均為收錄入可用于保健食品的物品名單，考慮到保健食品不限制服用劑量、時(shí)間和適應(yīng)癥，而何首烏(尤其是生何首烏)在大劑量下確可引起肝腎等臟器損害，是否將生何首烏列入可用于保健食品目錄有待系統(tǒng)評(píng)價(jià)。綜上，建議加強(qiáng)對(duì)何首烏毒副反應(yīng)監(jiān)測，臨床用藥嚴(yán)格按照藥典規(guī)定的劑量(生何首烏<6 g/日，制何首烏<12 g/日)，生何首烏長時(shí)間用藥應(yīng)注意監(jiān)測肝腎損害，加強(qiáng)制何首烏炮制減毒控制標(biāo)準(zhǔn)研究。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:164-165.

[2] Hinshaw LB.Sepsis/ septic shock:Participation of the microcirculation:An abbreviated review[J].Crit Care Med,1996,249(6):1072-1078.

[3] 國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)價(jià)中心.英國MHRA警告何首烏的肝損害不良反應(yīng)[J].中國藥物警戒,2006,3(5):313-314.

[4] Park GJH, Mann SP, Ngu MC.Acute hepatitis inducedby Shou Wu Pian, a herbal product derived from Polygonum multiforum [J]. J Gastroenterol Hepatol, 2001,16(1):115-117.

[5] Panis B,Wong DR, Hooymans PM, et al. Recurrent toxic hepatitis in a Cau casian girl related to the use of Shou Wu Pian,a Chinese herb alpreparat ion [J].J Pediatr Gastroenterol Nutr, 2005,41(2):256-258.

[6] Battinelli L,Daniele C,Mazzanti G.New case of acute hepatitis following the consumption of Shou Wu Pian, a Chinese herbal product derived from Polygonum mu lt iflorum [J]. Ann Intern Med,2004,140(7):588-589.

[7] Cárdenas A, Rest repo J, Sierra F. Acute hepaitis due to Shen Min: a herbal product derived from Polygonum multiflorum [J]. J Clin Gas roenterol, 2006,40(7):629-632.

[8] Min HJ, Jung KA, Kim HJ, et al. Twelve cases of toxic hepatitis related to the root of Polygonum multiflorum Thunb [J].J Hepatol,2008,47:S356.

[9] But PP. Tomlinson B, Lee KL .Hepatitis related to the Chinese medicine Shou wu pian manufactured from Polygonum multiflorum [J]. Vet Hum Toxicol,1996,38(4):280-282.

[10] Ng KG, Cheng CL, Xu HX,et al. Safety issues of Chinese medicine: a review of Intoxication cases in Hong Kong [J]. Chin Herb Med，2010,1(1):29-39.

[11] 胡錫琴，耿增巖，李巧蘭，等.制何首烏不同劑量與大鼠肝損傷程度的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2007,28(10):1420.

[12] 耿增巖，陳金銘，于德紅，等. 制何首烏對(duì)大鼠肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2010,21(4):1006.

[13] 劉煜德，黃小洵，吳麗莎，等.何首烏肝毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2007,(4):71-72.

[14] 黃偉，張亞囡，孫蓉，等.何首烏不同組分單次給藥對(duì)小鼠肝毒性“量-時(shí)-毒”關(guān)系研究[J].中國藥物警戒，2011,8(4):193-196.

[15] 黃偉，張亞囡，孫蓉，等.何首烏不同組分對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)比較研究[J].中國藥物警戒,2010,7(12):705-707.

[16] 鄢良春，趙軍寧，邱雄，等.何首烏安全性問題研究進(jìn)展[J].中藥藥理與臨床，2009,25(3):77-80.

[17] 李玥，徐立，劉若囡，等.炮制對(duì)何首烏小鼠急性毒性的影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011,13(5):248-249.

[18] 夏蕾，王麗霞，牟稷征，等.制何首烏單用或配伍用白蒺藜對(duì)小鼠肝臟毒性的比較研究[J].中國藥房，2011，22(23):2122-2124.

[19] 胡錫琴，楊紅蓮，張曉琴，等.制何首烏對(duì)大鼠肝臟毒理的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2006,29(3):40-41.

[20] 胡錫琴，楊曉青，刑玉瑞，等.制何首烏致肝損害的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2006,27(5):625-626.

[21] 魯彥，郭建宇，朱賢，等.分光光度法測定大黃中總蒽醌[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2011,47(3):297-299.

[22] 白研，黃麗玫，毋福海，等.德慶首烏中蒽醌類成分的含量測定[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，17(1):40-41.

[23] National Toxicology Program (2001) Technical report on the toxicology andcarcinogenesis studies of emodin in F344/N rats and B6C3F1 mice. Series No.493. NIH Publication No. 01-3952. U.S. Department of Health and HumanServices, Public Health Service, National Institutes of Health, Research TrianglePark, NC.

[24] 孫向紅，孫玉維，李紅，等.何首烏主要成分大黃素、大黃酸和二苯乙烯苷對(duì)肝細(xì)胞、肝癌細(xì)胞的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011,19(11):1315-1318.

[25] 王伽伯，馬永剛，張萍，等.炮制對(duì)大黃化學(xué)成分和肝腎毒性的影響及其典型相關(guān)分析[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009,44(8):885-890.

[26] Crocenzi FA,Sisti A,Pellgehino JM, et al. Role of bile salts in colchicine-induced hepatotoxicity. Implications for hepatocellular integrity and function [J]. Toxicology, 1997,121(2):127-142.

[27] 張瑞晨，劉斌，孫震曉，等.何首烏提取物對(duì)人正常肝細(xì)胞L02周期阻滯及凋亡的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2010，8(6):554-560.

[28] 王濤，王佳穎，江振洲，等.何首烏水提物大鼠連續(xù)灌胃給藥28d肝毒性研究—膽汁淤積相關(guān)性分析[J].中國中藥雜志，2012，37(10):1445-1449.

[29] Wu XQ,Chen XZ,Huang QC,et al. Toxicity of raw and processed roots of Polygonum multiflorum[J]. Fitoterapia, 2012, 83(3):469-475.

[30] 陳艷.何首烏炮制程度與內(nèi)在質(zhì)量相關(guān)性的研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué)，2004.

[31] 李衛(wèi)先，張琦，王國仁，等.不同炮制方法炮制的何首烏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)探討[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9(9):41-42.

[32] 張力，楊曉暉，孫震曉，等.何首烏臨床不良事件回顧性研究及風(fēng)險(xiǎn)控制措施探討[J].中國中藥雜志，2009,34(13):1724-1729.