液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜快速測定牛奶中氟甲喹殘留量

黃衛(wèi)紅　孫棣

【摘 要】建立快速簡便的牛奶中氟甲喹的測定方法；以乙腈為提取劑，正己烷除脂后LC-MS/MS測定；氟甲喹線性范圍為0.2～50ng/mL，檢出限為0.2μg/kg，加標平均回收率為84.3～101.0%，RSD小于10%。該方法定量準確可靠，可用于牛奶中氟甲喹的測定。

【關(guān)鍵詞】牛奶；氟甲喹；LC-MS/MS

氟甲喹（flumequine）為第二代氟喹諾酮類抗菌藥，其抗菌譜廣，殺菌力強，對治療革蘭氏陰性菌感染，特別是對大腸桿菌、支原體、嗜水氣單胞菌引起的畜、禽及水生動物疾病有較好療效[1-2]。由于其具有高安全性和滲透性，在無公害養(yǎng)殖、出口畜產(chǎn)品和水產(chǎn)品中得到廣泛應用，但其產(chǎn)生的毒副作用仍會對人體產(chǎn)生直接的危害，在食品中才殘留問題已經(jīng)引起人們的關(guān)注。有關(guān)生物樣品中氟甲喹的測定已有報道，主要是高效液相色譜法[3-4]，前處理過程也較為復雜繁瑣，本文建立了牛奶中氟甲喹的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定法，選擇乙腈提取樣品后正己烷除脂，結(jié)果表明，該法簡單快速，靈敏度高，適用于牛奶中氟甲喹的快速測定。

1.實驗部分

1.1儀器設備

TSQ Quantum Ultra三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，ThermoFisher公司；氮氣發(fā)生器，PEAK公司；Mnltireax振蕩混勻器，Heielolph公司；milli-QAcademic超純水系統(tǒng)，密理博中國有限公司；TufboVap自動氮吹儀，BIOTAGE公司。

1.2標準品及試劑

氟甲喹購自于Dr.Ehrensforfer GmbH Germany。甲酸、乙酸、乙腈、正己烷：色譜純，Merck公司；超純水。

1.3標準溶液的配制

儲備溶液（1mg/mL）準確稱取10mg氟甲喹標準品，分別用乙腈定容至10mL，配制成1mg/mL的標準儲備液-20℃冰箱保存；中間溶液（10μg/mL）分別準確量取標準儲備液1.00mL置于100mL容量瓶中，用乙腈定容后-20℃冰箱保存；標準工作使用液配制，將中間溶液用初始流動相逐級稀釋配制成氟甲喹分別為0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL，-20℃冰箱保存。

1.4樣品處理

取樣品2g，加入1%乙酸乙腈6mL振蕩提取后4000轉(zhuǎn)離心，取上清液于離心管中，重復提取一次，合并上清液，加入6mL正己烷渦旋提取后離心取下層于離心管中。45℃下氮氣流吹干，2mL初始流動相復溶后加入2mL正己烷渦旋離心后取下層過膜進樣。

1.5液相色譜及質(zhì)譜條件

液相色譜條件：色譜柱為Thermo-Hypersil GOLD柱（3μm×2.1mm×100mm）；柱溫40℃；流速0.5mL/min；進樣量10μL；梯度條件見表1。

質(zhì)譜條件：離子源ESI（+）參數(shù)：噴霧電壓3000V；鞘氣40arb、輔助氣5arb、離子傳輸毛細管溫度為350℃。MRM優(yōu)化參數(shù)見表2。

2.結(jié)果及討論

2.1標準曲線和檢出限

配制氟甲喹標準工作液為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mL，線性方程見表3。

2.2加標回收率和精密度

以三組陰性樣品為測試樣品，氟甲喹，高、中、低分別為0.5、2.0、10.0ng，每一水平在相同實驗條件下做6個平行樣，計算回收率及相對標準偏差，結(jié)果見表4。

表4 加標回收率及精密度（n=6）

2.3 LC-MS/MS分析

通過對流動相梯度洗脫和離子源參數(shù)的優(yōu)化，使氟甲喹在色譜柱上有合適的保留并獲得較好的檢測靈敏度，通過對準分子離子二級質(zhì)譜掃描，發(fā)現(xiàn)主要碎片離子為262.0/244.0、262.0/202.0、，三組子離子中262.0/244.0的豐度最強，但其信噪比卻最低，可能是因為該子離子的產(chǎn)生是由于母離子脫水形成，基線噪音比較高，故最終確定定量離子為262.0/202.0、定性離子為262.0/126.0，三個離子對的相對豐度圖和色譜圖見圖1。

本文在參照現(xiàn)行的國內(nèi)氟甲喹檢測方法的基礎上對樣品前處理和檢測方法進行改進，方法簡單易行，有利于批量樣品的測定。

3.結(jié)論

采用1%乙酸乙腈作為提取劑，正己烷脫脂后，用LC-MS/MS方法測定牛奶中氟甲喹的含量，結(jié)果表明方法前處理簡單快速，回收率好，檢出限低，滿足牛奶中進出口的檢測要求，目前將該方法擴展到動物組織中氟甲喹的檢測中也獲得滿意的方法學。

【參考文獻】

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