開口箭抗炎鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)研究

譚 剛，楊業(yè)玉，李建軍

（1.湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000；2.湖北省鶴峰走馬人民醫(yī)院，湖北 鶴峰 445801；3.湖北省恩施自治州中心醫(yī)院，湖北 恩施 445000）

論 著

開口箭抗炎鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)研究

譚 剛1，楊業(yè)玉2，李建軍3

（1.湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000；2.湖北省鶴峰走馬人民醫(yī)院，湖北 鶴峰 445801；3.湖北省恩施自治州中心醫(yī)院，湖北 恩施 445000）

目的：探討開口箭的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：抗炎實(shí)驗(yàn)用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹和大鼠棉球肉芽腫炎癥模型,鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)用熱板法和醋酸扭體法。結(jié)果：開口箭水煎液灌胃100mL/（kg·d）能明顯的抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹（P＜0.05）。醇提液腹腔注射2mL/kg在1h、2h、3h時(shí)對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹有非常明顯的抑制作用（P＜0.01）。水煎液腹腔注射2mL/kg對(duì)棉球埋藏引起的慢性肉芽腫有明顯的抑制作用（P＜0.01）。 水煎液腹腔注射2mL/kg在60min時(shí)對(duì)熱板致小鼠痛閾有明顯提高（P＜0.01）。水煎液皮下注射2mL/kg、0.5mL/kg對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用（P＜0.01）。結(jié)論：開口箭有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

開口箭；抗炎；鎮(zhèn)痛

開口箭系百合科植物開口箭（Tupistra chinensis Bak）的干燥根狀莖，其味甘、微苦，性涼，具有清熱解毒、散瘀止痛等功效，主治腰腿痛、跌打損傷、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、毒蛇咬傷等［1］。生長(zhǎng)在湖北恩施富硒深山叢林中，資源極為豐富，在湖北恩施民間習(xí)用［2］。筆者對(duì)開口箭進(jìn)行了抗炎鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)研究，總結(jié)如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠70只，體質(zhì)量（130.4±21.2）g，昆明種小鼠120只，體質(zhì)量（20.3±2.1）g，雌雄兼用，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院提供。

開口箭提取液制備：開口箭購(gòu)于恩施藥材公司。開口箭用水煎煮3次，過(guò)濾后，濃縮成1kg/L的溶液。另用開口箭粗粉乙醇回流提取3次，除去乙醇以后制成1kg/L的醇提取液。

主要試劑：角叉菜膠（Carraseenan）為Sigma產(chǎn)品，二甲苯為北京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，氫化可的松為江西國(guó)藥廠生產(chǎn)，阿司匹林為南京第二制藥廠生產(chǎn)。

儀器：TG328A型電子分析天平由上海上平儀器公司生產(chǎn)，GJ-8402型熱板測(cè)痛儀由浙江海寧白石電子醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn)，RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器由上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)［3］

昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為4組，給藥組分別灌胃水煎液30mL/kg和60mL/kg，陽(yáng)性藥組灌胃阿司匹林0.2g/ kg，對(duì)照組灌胃60mL/kg生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥3天，在末次給藥1h后以50uL二甲苯涂于小鼠右耳廓兩面致炎，左耳廓作為對(duì)照，4h后剪下兩耳，用直徑6mm打孔器取耳片，稱重，以兩耳質(zhì)量差表示炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度，計(jì)算抑制率［抑制率（%）=（1－給藥組兩耳片重量差/空白組兩耳片重量差）×100%］。

2.2 角叉菜膠致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)［4］

將SD大鼠30只隨機(jī)分成3組，用足容積測(cè)量器測(cè)量大鼠右后肢踝關(guān)節(jié)以下容積。給藥組分別腹腔注射醇提液0.5mL/kg和2mL/kg，對(duì)照組腹腔注射2mL/kg生理鹽水，一次性給藥后30min，將1%角叉菜膠溶液0.1mL注入右后肢腳掌皮下，記錄致炎前后不同時(shí)間右后肢踝關(guān)節(jié)以下容積。腫脹率（%）=（致炎后足跖容積-致炎前足跖容積）/致炎前的足跖容積×100%。抑制率（%）=（空白組平均腫脹率-給藥組平均腫脹率）/空白組平均腫脹率）×100%。

2.3 大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)［4，5］

SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組，在硫賁鈉（40mg/ kg）麻醉下，將稱重?zé)o菌棉球分別埋藏于大鼠雙側(cè)背部皮下，左右各1個(gè)，手術(shù)次日給藥組分別腹腔注射水煎液2mL/kg及醇提液2mL/kg，陽(yáng)性藥組腹腔注射氫化可的松2.5mg/kg，對(duì)照組腹腔注射2mL/kg生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥5天。在末次給藥后次日將大鼠處死，取出無(wú)菌棉球和肉芽組織，于60℃烤箱內(nèi)干燥后稱重，計(jì)算肉芽組織質(zhì)量及抑制率［抑制率（%）=（1－給藥組肉芽組織干質(zhì)量/空白組肉芽組織干質(zhì)量）×100%］。

2.4 小鼠熱板法致痛實(shí)驗(yàn)［5，6］

雄性健康小鼠，放入550.5℃熱板測(cè)痛儀上，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在192℃。觀察小鼠出現(xiàn)舔足的潛伏期，作為痛閾指標(biāo)，選擇痛閾在5～20s的小鼠40只，隨機(jī)分為4組，給藥組分別腹腔注射水煎液0.5mL/kg和2mL/ kg，陽(yáng)性藥組腹腔注射阿司匹林0.06g/kg，對(duì)照組腹腔注射2mL/kg生理鹽水，分別記錄給藥前和1次性給藥后30min、60min、90min出現(xiàn)舔足的潛伏期。

2.5 小鼠醋酸致痛扭體法實(shí)驗(yàn)［5，6］

取健康小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分成4組，給藥組分別皮下注射水煎液0.5mL/kg和2mL/kg，陽(yáng)性藥組皮下注射阿司匹林0.06g/kg，對(duì)照組皮下注射2mL/kg生理鹽水，一次性給藥30min后，各組均腹腔注射0.7%醋酸溶液0.2mL/10g，觀察10min內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，求得扭體反應(yīng)抑制率。抑制率（%）=（1-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)/空白組扭體反應(yīng)次數(shù)）×100%。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS10.0for Windows統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)［7］。

3 結(jié) 果

3.1 開口箭對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

開口箭水煎液各組與生理鹽水組比較兩耳質(zhì)量差有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），阿司匹林組與生理鹽水組比較兩耳質(zhì)量差有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明開口箭對(duì)二甲苯引起的耳腫脹有明顯的抑制作用，但沒(méi)有在實(shí)驗(yàn)劑量下的阿司匹林顯著。

表1 開口箭對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（）

表1 開口箭對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別動(dòng)物數(shù)（只）耳片質(zhì)量（mg）兩耳質(zhì)量差（mg）抑制率（%）左耳右耳生理鹽水106.64±0.468.95±1.352.31±0.86---水煎液（30mL）106.58±0.258.57±1.281.99±0.95*13.8水煎液（60mL）106.52±0.418.29±0.481.77±1.21*23.5阿司匹林106.49±0.437.24±0.780.75±0.39**67.6

3.2 開口箭對(duì)大鼠角叉菜膠引起足腫脹的影響

開口箭醇提液組（0.5mL/kg）與生理鹽水組比較致炎后不同時(shí)間的容積（除致炎后4h外）均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），醇提液組（2mL/kg）與生理鹽水組比較致炎后不同時(shí)間的容積有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；致炎前各組的容積與生理鹽水組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明開口箭醇提液有非常明顯的抑制角叉菜膠引起的腫脹作用。給藥劑量為0.5mL/kg，1～3h的抑制率分別為30.8%、31.7%、19.6%、14.6%；劑量為2mL/kg時(shí)，抑制率為63.5%、42.8%、26.5%、30.2%。

表2 開口箭對(duì)大鼠角叉菜膠引起足腫脹的影響（）

表2 開口箭對(duì)大鼠角叉菜膠引起足腫脹的影響（）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05、**P＜0.01。

致炎前容積（mL）組別動(dòng)物（只）致 炎 后 容 積 （mL）1h2h3h4h生理鹽水101.13±0.162.09±0.272.30±0.323.12±0.413.54±0.46醇提液（0.5mL）101.11±0.141.76±0.22*1.89±0.23*2.68±0.31*3.13±0.38醇提液（2mL）101.07±0.161.40±0.18**1.70±0.25**2.45±0.32**2.72±0.33**

3.3 開口箭對(duì)大鼠肉芽組織增生的影響

植入無(wú)菌棉球后，第2天各組大鼠傷口愈合良好，第6天處死動(dòng)物后，可見其雙側(cè)背部皮下均有球狀突起的肉芽組織。開口箭醇提液組（2mL/kg）、氫化可的松組（0.0025/kg）與生理鹽水組比較肉芽組織干質(zhì)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），水煎液組（2mL/kg）與生理鹽水組比較肉芽組織干質(zhì)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明開口箭水煎液和醇提液對(duì)大鼠無(wú)菌棉球植入法誘發(fā)肉芽腫都有明顯的抑制作用，水煎液的抑制作用強(qiáng)于醇提液。

表3 開口箭對(duì)大鼠肉芽組織增生的抑制作用（）

表3 開口箭對(duì)大鼠肉芽組織增生的抑制作用（）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05、**P＜0.01。

抑制率（%）生理鹽水107.06±1.67---水煎液104.75±0.59**32.6醇提液105.79±1.48*17.9氫化可的松105.74±1.38*18.7組別動(dòng)物數(shù)（只）肉芽組織干質(zhì)量（mg）

3.4 開口箭對(duì)熱板致小鼠痛閾的影響

開口箭水煎液各組在給藥60min時(shí)、阿司匹林組與生理鹽水組比較不同時(shí)間出現(xiàn)舔足的潛伏期均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），開口箭水煎液各組、阿司匹林組在給藥前和給藥后30min與生理鹽水組比較出現(xiàn)舔足的潛伏期均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明開口箭水煎液各劑量對(duì)熱板致小鼠痛閾值提高均有明顯作用，鎮(zhèn)痛作用隨劑量增加效果越明顯，呈現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。

表4 開口箭對(duì)熱板致小鼠痛閾的影響（）

表4 開口箭對(duì)熱板致小鼠痛閾的影響（）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05、**P＜0.01。

組別動(dòng)物數(shù)（只）給藥前（s）給藥后（s）30min60min90min生理鹽水1011.3±2.810.7±2.911.2±3.110.8±3.3水煎液（0.5mL）1011.6±2.911.6±3.413.5±3.9*12.2±4.2水煎液（2mL）1011.8±3.512.6±5.220.4±6.2**15.7±5.9*阿司匹林1010.7±3.212.5±3.415.2±4.0*16.5±4.3**

3.5 開口箭對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

開口箭水煎液各組、阿司匹林組與生理鹽水組比較扭體次數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明開口箭水煎液各劑量組能明顯減少小鼠扭體次數(shù)，劑量較大時(shí)抑制作用明顯。

表5 開口箭對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（）

表5 開口箭對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05、**P＜0.01。

組別動(dòng)物數(shù)（只）扭體數(shù)（次）抑制率（%）生理鹽水1054.5±3.8---水煎液（0.5mL）1044.6±6.4*18.2水煎液（2mL）1034.4±5.7**36.8阿司匹林1030.7±4.3**43.6

4 討 論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，開口箭能明顯抑制二甲苯致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致大鼠足跖腫脹炎癥反應(yīng)，其抑制作用隨劑量的增加而增強(qiáng)。在以肉芽組織增生為指標(biāo)的慢性炎癥模型實(shí)驗(yàn)中，開口箭能夠顯著抑制異物所致大鼠炎癥的肉芽增生，說(shuō)明開口箭對(duì)異物所致大鼠炎癥肉芽增生具有抑制作用。

鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)表明該提取液對(duì)化學(xué)致痛和熱板致痛有一定的鎮(zhèn)痛效果。開口箭能明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，而且隨劑量的增加扭體反應(yīng)次數(shù)明顯減少，又能明顯延長(zhǎng)熱刺激小鼠痛閾值，說(shuō)明開口箭有鎮(zhèn)痛作用。開口箭對(duì)不同刺激引起的疼痛均有良好的鎮(zhèn)痛效果，可緩解臨床炎癥反應(yīng)引起的疼痛。

綜上所述，開口箭具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，初步分析其抗炎鎮(zhèn)痛作用可能涉及中樞及外周系統(tǒng)，而對(duì)其有效成分及作用機(jī)制的探討，則有待于進(jìn)一步的深入研究。

［1］謝宗萬(wàn).全國(guó)中草藥匯編（上冊(cè)）［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：163-163.

［2］楊付明.恩施地區(qū)腦病治療用藥特色［J］.實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2003，19（11）：605-606.

［3］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：356.

［4］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：714，723.

［5］H.Gerhard Vogel.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南—新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學(xué)評(píng)價(jià)［M］.杜冠華，譯.北京：科學(xué)出版社，2001：491，511，536.

［6］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，1991：304-353.

［7］劉潤(rùn)幸.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)方法與應(yīng)用［M］.上冊(cè).廣東：廣東人民出版社，2001：128-130.

Objective：To study the anti-inflammatory and analgesic effects of Tupistra chinensis.Methods：A few conventional models，such as the mouse pinna swelling induced by xylene；the ratshind paw swelling elicited by carrageenan，the rats proliferation of granuloma led by implanting cotton pellet；Analyesia experiments adopted hot-plate procedure and torsion body method.Results：The water extract （i.g.100mL/kg·d） of Tupistra chinensis obviously inhibited the swelling of mouse pinna induced by xylene （P＜0.05），the grain alcohol extract （i.p.2mL/kg） suppressed the edema of rat hind paw swelling elicited by 1% carrageenan after 1h，2h，3h，（P＜0.01）.the water extract （i.p.2mL/kg） significantly depressed the increase of prdiferation of granuloma led by implanting cotton pellet （P＜0.01）.the water extract （i.p.2mL/kg） had an abatement effect effect of algesin induced by heat with tail flick method after 60min （P＜0.01）.the water extract （s.c.2mL/kg，0.5mL/kg） obviously inhibited the torsion body of mous induced by acetum （P＜0.01）.Condusion：Tupistra chinensis is an effective medicine on anti-inflammation and analgesia.

Tupistra chinensis；Anti-inflammation；Analyesia

R289.9

B

1004-2814(2013)07-513-03

2013-04-19