萊克多巴胺檢測方法最新研究進展

宋洋

（動植物抗性天津市重點實驗室，天津師范大學，天津 300387）

萊克多巴胺檢測方法最新研究進展

宋洋

（動植物抗性天津市重點實驗室，天津師范大學，天津 300387）

摘 要：萊克多巴胺是一種是苯乙醇胺類β2-興奮劑，有營養(yǎng)再分配的作用，常作為“瘦肉精”克倫特羅的替代品非法應用在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中。因此，加強食品中萊克多巴胺殘留的監(jiān)測極為重要。本文綜述了萊克多巴胺殘留檢測方法的最新進展，為食品中萊克多巴胺殘留的監(jiān)測提供了技術保證。

關鍵詞：萊克多巴胺；檢測方法；毛細管電泳；免疫檢測法

萊克多巴胺（1-（4-羥基苯基）-2[1-甲基-3-（4-羥基苯基）-丙氨基]-乙醇胺）是一種醫(yī)藥原料，可用來治療心力衰竭和肌肉萎縮，并對胎兒和新生兒生長有益。美國FDA在2000年批準可以將此藥物用作動物營養(yǎng)重新分配劑，用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)中。但是，萊克多巴胺易在動物臟器和肌肉組織中殘留，可通過食物鏈在人體中富集，對人體造成危害，主要表現(xiàn)為心動過速、心律失常、肌肉疼痛、惡心及眩暈等[1-2]。目前，歐盟和日本已禁止在畜禽生產(chǎn)中使用。我國也在2003年12月農(nóng)牧便函 [2003]330號函中明確規(guī)定禁止使用萊克多巴胺[3]。所以，準確檢測畜產(chǎn)品中萊克多巴胺殘留對保證食品安全具有重要的意義。

1 毛細管電泳法

毛細管電泳是近幾年來發(fā)展起來的一種高效、快速分析技術，它是離子或荷電離子以電場為驅(qū)動力，在毛細管中按其淌度或分配系數(shù)不同進行分離的一種電泳技術，是經(jīng)典電泳技術和現(xiàn)代微柱分離技術相結合的產(chǎn)物[4-5]。高楊菲[6]等用毛細管電泳法（Capillary electrophoresis，CE）同步分離檢測了肉制品萊克多巴胺等4種β2腎上腺素受體興奮劑。實驗條件包括：電泳緩沖液為檸檬酸鹽（90 mmol/L；pH=5.6），分離電壓為8 kV，檢測波長為200 nm，溫度為25℃，該條件下克倫特羅、沙丁胺醇、特布他林和RAC的分離度分別為 1.90、2.73和 2.17，回收率為 92.4%～102.0%（RSD＜3.2%）。

2 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術

20世紀70年代人們開始研究將色譜的高效分離效能和質(zhì)譜的高靈敏度及較強的結構解析能力結合在一起的聯(lián)用技術，90年代以后，隨著大氣壓電離技術的出現(xiàn)和成功應用及質(zhì)譜本身的發(fā)展，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術得到了快速發(fā)展[7]。

翟淑平等[8]利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLCMS）技術測定了豬肉組織中RAC含量。實驗采用多反應監(jiān)測模式（MRM），正電噴霧離子源（ESI+）條件，樣品經(jīng)0.1%高氯酸提取凈化后，檢出限為0.1μg/kg，線性范圍為 0.1μg/L～20μg/L（R2＞0.99），日內(nèi)變異系數(shù)5.5%～12.3%，日間變異系數(shù)7.8%～14.7%，回收率為75%（添加濃度：0.5 μg/kg），結果顯示，該方法能夠滿足痕量RAC殘留檢測的要求。Jose Blanca等[9]用HPLC-MS測定了肝臟和尿樣品RAC等3種β2受體激動劑，結果顯示該方法的靈敏度較高，RAC在肝臟和尿樣品中的檢出限分別為 0.32 μg/kg 和 0.18 μg/kg。Eshaq（Isaac）Shishani[10]等采用液相色譜（熒光檢測器）-質(zhì)譜聯(lián)用技術測定了豬和牛肌肉中RAC殘留量，樣品被β-葡糖醛酸糖苷酶水解，甲醇提取后測定。實驗液相條件，柱：Supelcosil LC-18-DB，250 mm×4.6 mm，5 μm particle size；流速：1 mL/min；Excitation：226 nm，Emission：306 nm；流動相：320 mL乙腈，680 mL去離子水，20 mL冰乙酸，0.87 g戊烷磺酸鈉，混合后脫氣；進樣量：100 mL；時間：15 min；質(zhì)譜結果顯示，樣品回收率80%～117%（添加量：1 ng/g～4 ng/g）。Jean-Philippe Antignac[11]等采用同樣的技術測定了豬肌肉組織和尿樣中痕量RAC，最低檢測線可以達到10 ng/kg。Bing Shao[12]等利用Ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry技術同時測定了16種β2受體激動劑。

Limin He[13]等采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術測定了飼料中RAC和克倫特羅（CLB）含量量。樣品用0.1 mol/L的高氯酸提取后離心中和后再用乙酸乙酯-異丙醇（9∶ 1；體積比）液液萃取，后經(jīng)SPE凈化衍生后，在質(zhì)譜選擇離子模式（M/Z 179、250、267 和 502）下檢測，該方法的檢出限為4 μg/kg。吳銀良等[14]用GCMS同時測定了動物肝組織中CLB和RAC，樣品用乙酸乙酯和異丙醇混和液提取，凈化，氮吹干，衍生，采用選擇離子模式進行測定，外標法定量，RAC檢出限為1.0 μg/kg，回收率在 69.8%～82.1%之間（RSD：3.5%～4.9%），該方法能夠滿足對RAC檢測的需要。

3 免疫分析方法

免疫分析方法主要包括，酶聯(lián)免疫分析法、膠體金免疫層析法、化學發(fā)光免疫分析法和熒光免疫分析法等。前兩種分析方法對萊克多巴胺檢測方面的綜述已有報道[3]，本論文主要綜述化學發(fā)光免疫分析法和熒光免疫分析法在萊克多巴胺殘留檢測方面的最新進展。

化學發(fā)光免疫分析方法綜合了化學發(fā)光法的高靈敏度和免疫分析法的成本低、速度快、特異性強、樣品預處理簡單等優(yōu)點，具有很大的發(fā)展前景。高彬文等[15]采用化學發(fā)光免疫分析法檢測殘留在豬尿中萊克多巴胺含量，結果顯示：該方法具有很低的檢測限（0.01 ng/mL），檢測范圍在0.036 ng/mL～32.2 ng/mL之間，實際樣品檢測中此方法表現(xiàn)了較好的穩(wěn)定性，平均變異系數(shù)為10.5，可以達到檢測RAC殘留的要求。

張禎等[16]基于競爭雙標記時間分辨熒光免疫分析技術，建立了一種能同時測定豬肉組織中氯霉素和萊克多巴胺的方法，試驗結果顯示：該方法的對RAC的檢出限可達到0.25 ng/g，加標回收率在69.8%～85.8%之間；對18個豬肉樣品的分析表明競爭雙標記時間分辨熒光免疫分析法的測定結果與ELISA及GC-MS法一致（R2=0.92～0.98）。這種方法利用不同標記的抗體同時檢測屬于不同種類的藥物，縮短了分析時間，成為一種多殘留快速檢測方法。

量子點又稱為半導體量子點或半導體納米微晶體，主要由Ⅱ～Ⅵ族或Ⅲ～Ⅴ族元素組成，是一種能夠接受激光激發(fā)產(chǎn)生熒光的納米顆粒，成為目前國內(nèi)外研究的熱點[17]。張國華等[18]以量子點為標記物制備免疫層析試紙條檢測樣品中萊克多巴胺殘留，該方法是對膠體金層析技術的突破。試驗結果顯示，量子點標記萊克多巴胺快速檢測試紙條的檢測線為3 ng/mL，檢測時間為10 min。該方法不僅能夠提高RAC試紙條的檢測限，也能保證試紙條的檢測范圍和檢測的特異性，是一種新型RAC檢測方法。

4 其它最新分析方法

近年來，表面等離子體共振生物傳感器受到廣泛的關注。這種方法不需要標記物，方法建立簡單，所需樣品量少，可以實現(xiàn)實時檢測。李輝等[19]利用表面等離子體共振傳感器對萊克多巴胺與固定在芯片表面的萊克多巴胺衍生物的相互作用進行分析，根據(jù)一定范圍內(nèi)相對響應值和時間近似呈線性關系的動力學特性，建立了連續(xù)檢測萊克多巴胺的方法，該檢測方法簡單，快速。

生物芯片技術是一項新的檢測技術。胡磊等[20]構建了一種基于功能化微珠表面競爭性免疫反應的流控芯片體系，該檢測系統(tǒng)對萊克多巴胺的檢測限可以達到0.03 μg/L，檢測時間不超過45 min。該系統(tǒng)靈敏、準確。適宜大規(guī)模檢測的初篩實驗，在食品檢測中發(fā)揮巨大的作用。劉天龍等[21]利用懸液芯片系統(tǒng)建立了一種高通量檢測牛奶中萊克多巴胺殘留的方法，實驗結果顯示：該方法多萊克多巴胺的檢測限為23.51 ng/mL，加標回收率在70%～110%之間。另外，該方法能再同一樣品中檢測不同的待檢物，極大地推動了免疫檢測技術的發(fā)展。

確定物質(zhì)的光譜特征會為該物質(zhì)的儀器檢測奠定基礎。陳錫愛等[22]應用太赫茲時域光譜技術獲得了鹽酸萊克多巴胺在0.2 THz～2.2 THz波段的光譜特征，并計算獲得了鹽酸萊克多巴胺在室溫下的折射率譜和吸收譜，為其殘留檢測的應用提供了新的實驗方法。

5 結論

萊克多巴胺是一種是苯乙醇胺類β2-興奮劑，有營養(yǎng)再分配的作用。在“瘦肉精”克倫特羅禁止使用后，萊克多巴胺常作為替代品非法應用在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中。因此，加強食品中萊克多巴胺殘留的監(jiān)測極為重要。本文綜述了萊克多巴胺殘留檢測方法的最新進展，為食品中萊克多巴胺殘留的監(jiān)測提供了技術保證。

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The Latest Research Progress of Detecting Methods of Ractopamine

SONG Yang
（Tianjin Key Laboratory of Animal and Plant Resistance，Tianjin Normal Uiversity，Tianjin 300387，China）

Abstract：Ractopamine， as a β-agonist， is illegal used as an alternative to clenbuterol in animal husbandry as a tissue repartitioning.Therefore，detecting ractopamine residues in food is very important.This article gives an overview of the latest progress of detecting method of ractopamine，which offers a technological guarantee for food safe in ractopamine residues.

Key words：ractopamine；detecting method；capillary electrophoresis；immunosorbent assay

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.13.037

天津市自然科學基金（13JCQNJC14800）；天津師范大學博士基金（52XB1103）

宋洋（1983—），女（漢），講師，博士，研究方向：食品安全檢測。

2012-10-08