118例兒童急性白血病免疫分型特點分析

包豐昌，馬 平，劉 煒，王國峰，劉俊閃

(鄭州市兒童醫(yī)院血液科 河南鄭州 450003)

兒童急性白血病(acute leucemia，AL)是一組高度異質(zhì)性的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。由于各種致病原因?qū)е略煅?祖細(xì)胞不能正常分化成熟，阻滯于分化發(fā)育的某個階段。1976年法國(F)、美國(A)、英國(B)三國協(xié)作組基于白血病細(xì)胞的形態(tài)特征和細(xì)胞化學(xué)染色，提出了急性白血病的FAB分型，目前該分型標(biāo)準(zhǔn)仍是白血病形態(tài)分類的主要標(biāo)準(zhǔn)。但是對于某些細(xì)胞形態(tài)不典型的患者僅靠形態(tài)學(xué)分類難以明確診斷和分型。流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)是檢測表達(dá)于白血病細(xì)胞不同分化階段的分化抗原來進(jìn)行免疫學(xué)分型，因其靈敏度高、快速高效、重復(fù)性好、多參數(shù)的定量和定性分型、具有客觀性、準(zhǔn)確性高的特點，該方法已成為AL診斷和分型的重要方法。某些抗原的表達(dá)與白血病預(yù)后關(guān)系密切，免疫分型可以作為判斷白血病預(yù)后的指標(biāo)之一［1］。本研究應(yīng)用三色FCM CD45/SSC雙參數(shù)散點圖設(shè)門法對鄭州市兒童醫(yī)院2009年1月至2010年12月收治的118例初治兒童AL患者行免疫學(xué)分型檢測，分析白血病細(xì)胞表面抗原表達(dá)的規(guī)律，并進(jìn)一步探討兒童AL免疫學(xué)分型的特點。

1 材料與方法

1.1 研究對象 自2009年1月至2010年12月鄭州市兒童醫(yī)院共收治118例初治兒童AL患者，其中男80例，女38例;年齡39 d至14歲(中位年齡8歲)。所有患兒均行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織化學(xué)染色及流式細(xì)胞術(shù)免疫分型分析。

1.2 主要儀器及試劑 使用美國BD公司生產(chǎn)的FACSCaliburTM流式細(xì)胞儀。所用單克隆抗體、同型對照、細(xì)胞膜通透試劑及溶血試劑均購自美國 BD公司。

1.3 免疫分型的判斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)目前已知的各系列抗原特異性并參考?xì)W洲白血病免疫學(xué)分型研究組(EGIL)提倡的抗原積分系統(tǒng)進(jìn)行分型［2］，積分標(biāo)準(zhǔn):雙標(biāo)記時同一細(xì)胞上異系抗體≥10%，MPO≥3%，其它抗體≥30%。未分化型(AUL):每個系列(T、B、髓細(xì)胞)的積分均≤2。單純型:要求T、B或髓細(xì)胞某一系列積分≥2，其他系列積分為0。變異型:要求某一系列積分≥2，其他系列積分≤2，即Ly+AML和My+ALL?；旌闲?要求2個或2個以上系列積分≥2［2］。

2 結(jié)果

2.1 AL FAB分型與免疫分型的關(guān)系 118例初診兒童AL經(jīng)FAB分型為急性淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphocytic leukaemia，ALL)者76例，急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)35例，急性粒-淋混合型白血病1例，6例形態(tài)學(xué)檢查難以確診。經(jīng)免疫學(xué)分型檢測，急性B淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)占58.5%(69/118)，急性T淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)占5.9%(7/118)，急性髓系白血病(AML)占34.7% (41/118)，急性混合性白血病1例。FAB分型與免疫分型的診斷符合率為94.9%(112/118)。其中FAB形態(tài)分型粒-淋混合型白血病1例與免疫分型結(jié)果一致。FAB形態(tài)學(xué)不能明確者分型者6例經(jīng)免疫分型后診斷為急性髓系白血病。

2.2 ALL免疫分型抗原表達(dá)特點 69例B-ALL主要表達(dá) CD19、CD22、CD10、CD20，表達(dá)率分別是: 98.6%、92.9%、87.1%、51.4%;7例T-ALL主要表達(dá)CD2、CD7、CD5、CD3，表達(dá)率分別是100%、100%、85.7%、71.4%。CD117在ALL中未檢測到表達(dá)。急性淋巴細(xì)胞白血病伴髓系抗原表達(dá)占 23.2% (16/69)，主要表達(dá)CD13、CD33、CD15。

2.3 AML免疫分型抗原表達(dá)特點 在41例AML中，M1占4.8%(2/41)，M2占51.2%(21/41)，M3占14.6%(6/41)，M4+M5占26.8%(11/41)和M6 2.4%(1/41);其CD13、CD33、CD117及CD64的表達(dá)率分別為92.6%、92.6%、87.8%和26.8%。其中M6僅有1例，可見大量幼紅細(xì)胞(占78.4%)，表達(dá)GlyA和CD71，而原始細(xì)胞(13.1%)表達(dá)CD13、CD34、CD38。急性髓系白血病伴淋巴系統(tǒng)抗原表達(dá)占26.8%(11/41)，主要是CD7、CD19。

3 討論

流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)是通過檢測表達(dá)于白血病細(xì)胞不同分化階段的分化抗原來進(jìn)行白血病免疫學(xué)分型，因其靈敏度高、快速高效、重復(fù)性好、多參數(shù)的定量和定性分型、具有客觀性、準(zhǔn)確性高的特點，該方法已成為AL診斷和分型的重要方法，另外，免疫分型可以反映FAB分型無法顯示的一些生物學(xué)特性，如變異型，雙表型及ALL的分期等，這些都與治療方案的制定和預(yù)后相關(guān)，為個體化治療提供依據(jù)。本研究中，F(xiàn)AB分型與免疫分型的診斷符合率為94.9%，與國內(nèi)文獻(xiàn)報道相似［3］。

依據(jù)B淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞系表達(dá)的抗原不同，將ALL分為T-ALL和B-ALL及T/B雙表型。本研究中，B-ALL CD19表達(dá)率為98.6%，CD22表達(dá)率92.9%，抗原CD19、CD22是B-ALL中比較有診斷價值的抗原，其敏感性最高，對B系相關(guān)性白血病的診斷與鑒別具有重要作用。在T-ALL中，雖然CD2、CD7表達(dá)率達(dá)到100%，但上述抗原在B-ALL及AML中可見交叉表達(dá);隨然CD3表達(dá)率71.4%，但在B-ALL及髓系白血病中未見表達(dá)，因此CD3對T-ALL的診斷更具特異性。

AML白血病細(xì)胞的免疫表達(dá)種類繁雜，免疫分型研究也較ALL進(jìn)展慢，免疫學(xué)標(biāo)記可以將髓系白血病鑒別出來，但尚不能將其與各亞型一一對接，因此臨床上各亞型仍采用FAB分型。本研究顯示所有AML中CD13、CD33表達(dá)率均為92.6%，CD117表達(dá)率為87.8%，而CD13、CD33在ALL中亦有不同程度表達(dá)，CD117在ALL中未檢測到表達(dá)，提示CD117是髓系比較特異性的標(biāo)記，與文獻(xiàn)報道基本一致［4］，CD117可以作為鑒別ALL與AML的分子標(biāo)志。最常見的單個髓系抗原在ALL的表達(dá)，依次為CD13、CD33、CD15。

本組資料中，B-ALL和T-ALL伴髓系抗原表達(dá)分別為57.1%、28.5%。明顯高于文獻(xiàn)報道的兒童ALL髓系相關(guān)抗原陽性率不會超過24%［5］。本研究急性髓系白血病伴淋系抗原表達(dá)陽性率29%，與國內(nèi)報道淋系抗原在AML中的表達(dá)陽性率多居于16%～22%之間相比略高，國內(nèi)亦有報道研究高達(dá)40%的［6］，均以CD7表達(dá)最常見。

總之，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對兒童急性白血病進(jìn)行免疫分型診斷能夠彌補FAB分型的不足，提高兒童的診斷率為個體化治療和評估預(yù)后提供信息。

［1］ 王玉龍，李筱駿，顧龍君.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型與預(yù)后的關(guān)系［J］.中華血液學(xué)雜志，1996，17:70-72.

［2］ Bene M C，Castoldi G，Knapp W，et al.Proposals for the immunological classification of acute leukemias.European Group for the Immunological Characterization of Leukemias(EGIL)［J］.Leukemia，1995，9(10):1783-1786.

［3］ 沈紅強(qiáng)，湯永民，楊世隆，等.多色流式細(xì)胞術(shù)在222例兒童急性白血病免疫分型中的應(yīng)用［J］.中華兒科雜志，2003，41(5): 334-337.

［4］ 黃正剛，陳啟文，吳星恒，等.67例兒童急性白血病流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的研究［J］.實用臨床醫(yī)學(xué)，2008，9(5):87-90.

［5］ Pui C H，Behm F G，Crist W M.Clinical and biologic relevance of immunologic marker studies in childhood acute lymphoblastic leukemia［J］.Blood，1993，82(2):343-362.

［6］ 姚志娟，廖麗，黨永輝，等.180例急性白血病流式細(xì)胞術(shù)免疫分型的特點分析［J］.中國實驗血液學(xué)雜志，2004，12(1):83-85.