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    外源siRNA誘導(dǎo)家蠶先天免疫應(yīng)答

    2013-04-09 07:09:34何漸鳴王明慧毛鈺霞沈衛(wèi)德許雅香
    江蘇蠶業(yè) 2013年3期
    關(guān)鍵詞:家蠶淋巴昆蟲

    何漸鳴 王明慧 毛鈺霞 沈衛(wèi)德,3 許雅香,3*

    (1蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院,江蘇 蘇州 215123;2現(xiàn)代絲綢國家工程實驗室;3蘇州大學(xué)蠶桑研究所)

    RNAi是由雙鏈RNA引發(fā)的序列特異性基因沉默現(xiàn)象[1],可高效、特異地沉默特定基因。這是個應(yīng)對病毒感染或dsRNA結(jié)構(gòu)分子進(jìn)化保守的防御應(yīng)答機(jī)制,除RNAi外,病毒或dsRNA也能觸發(fā)別的免疫應(yīng)答途徑[2]。

    昆蟲有一個高效的先天免疫系統(tǒng)來區(qū)別異己成分和消除外源入侵物。先天性免疫應(yīng)答系統(tǒng)產(chǎn)生的抗菌肽可以對微生物感染作出迅速有效的免疫應(yīng)答[3,4]。LPS 是眾所周知的病原體相關(guān)分子模式(PAMP),能引起昆蟲的先天免疫應(yīng)答,而siRNA作為外源物質(zhì),是否也被當(dāng)做異物識別,發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng),至今鮮見報道。

    在這個研究里,我們報道了家蠶在 LPS和siRNA誘導(dǎo)后黑化作用相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平,相關(guān)基因表達(dá)量的相似說明siRNA在家蠶先天免疫應(yīng)答中也能充當(dāng)PAMP。

    2 材料和方法

    2.1 材料

    家蠶品種為本研究室保存的大造,正常桑葉育。LPS購自Sigma公司,Trizol RNA提取及M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑及其它化學(xué)常規(guī)試劑均購自寶生物工程(大連)有限公司,引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

    2.2 方法

    2.2.1 家蠶幼蟲注射有效siRNA及LPS

    取5齡第4天幼蟲,實驗組每頭家蠶幼蟲注射10μL LPS(150mmol/L NaCl溶解,終濃度1mg/mL),對照組每頭幼蟲注射10μL 150mmol/L NaCl。分別在注射后9h取實驗組和對照組幼蟲的血淋巴。每組至少取10頭家蠶幼蟲。

    將適量的siRNA溶于不含有RNA酶的無菌水中,輕輕混勻,siRNA為10μg/μL。取5齡第4天幼蟲,實驗組每頭家蠶幼蟲注射10μL siRNA,對照組每頭幼蟲注射10μL無菌水,分別在注射后24h后取實驗組和對照組的血淋巴,每組至少取10頭家蠶幼蟲。

    2.2.2 樣品制備

    取5齡第4天幼蟲,在冰上剪腹足取血淋巴,-80℃冷凍保存。

    2.2.3 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)

    用Trizol(TaKaRa公司)試劑盒說明書分別提取組織總RNA,用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司)反轉(zhuǎn)錄為為cDNA。

    2.2.4 PO活性分析

    LPS 注射后 3h、6h、9h、12h、18h、24h、48h 取家蠶的血淋巴,PO活性檢測用L-多巴作為底物,固定波長490nm。取96孔U形板,在每個微孔內(nèi)加入28℃下預(yù)溫育的300μL 0.1mol/L PH=6的磷酸鹽緩沖液,10μL 0.01mol/L 的 L-多巴及10μL 血清,酶標(biāo)儀震蕩4次,立即測反應(yīng)體系的吸光值,每隔2min讀一次吸光值,共10次。

    2.2.5 基因表達(dá)分析

    采用Primer 5.0軟件,引物如表1所示。采用SYBR PrimeScriptTM RT-PCR試劑盒測定具體步驟按照說明書進(jìn)行,反應(yīng)程序為:95℃預(yù)變性1 min,95℃變性15s,60℃退火30s,循環(huán)45 次。

    表1 實時熒光定量PCR反應(yīng)體系

    反應(yīng)過程由ABI7300熒光定量PCR儀(Applied Biosystems公司)軟件自動設(shè)定,每個樣品重復(fù)3次。

    表2 實時熒光定量PCR的檢測基因和內(nèi)參照基因的引物

    3 結(jié)果

    3.1 血淋巴PO活性分析

    在用LPS處理后檢測家蠶幼蟲血淋巴的PO活性,結(jié)果顯示LPS處理后PO活性是先升高再降低,PO活性在LPS處理后的3h、6h、9h后上升,9h時活性最高,PO活性在12h時開始降低,在18h時PO活性降到初始水平,見圖1。

    圖1 LPS誘導(dǎo)不同時間后PPO活性變化

    3.2 基因表達(dá)

    LPS誘導(dǎo)和siRNA片段干擾后各基因的表達(dá)如圖2、3所示。

    在用 LPS 誘導(dǎo)后 9h,Bmβ-1,3-GRPB2,Bm-PAEE,Bmserpin-3的表達(dá)量是上升的,而BmβGRP1,BmPPO2,BmDDC的表達(dá)量則下降,見圖2。

    圖2 LPS誘導(dǎo)9h后各基因的mRNA相對表達(dá)量

    在用siRNA片段干擾后24h,BmPPAE,Bmserpin-3 的表達(dá)量呈上升,而 BmβGRP1,Bmβ-1,3-GRPB2的表達(dá)量則下降,BmPPO2,BmDDC的表達(dá)量略下降,見圖3。

    圖3 RNA干擾24h后各基因的mRNA相對表達(dá)量

    4 討論

    在哺乳動物里,dsRNA被認(rèn)為是以病毒的分子模式引起先天免疫[5,6]。人類 TLR3作為激活 NF-kB途徑的dsRNA的PRR,生產(chǎn)Ⅰ型干擾素(IFN-a/b)[7,8]。在昆蟲方面,dsRNA 作為一個蛋白觸發(fā)先天免疫反應(yīng)鮮為人知,而siRNA與dsRNA相似,猜想是否siRNA也能觸發(fā)昆蟲的先天免疫。

    siRNA廣泛用于RNAi導(dǎo)致基因沉默。在鱗翅目昆蟲中,RNAi效率在不同物種、組織、時期和靶基因顯示相當(dāng)多的變化[9]。我們的研究表明siRNA可以影響免疫相關(guān)基因的表達(dá),或許可以解釋鱗翅目昆蟲RNAi的可變性之多。

    LPS是眾所周知的病原體相關(guān)分子模式(PAMP),能引起昆蟲的先天免疫應(yīng)答,在用LPS誘導(dǎo)后,與模式識別受體(PRRS)相結(jié)合,進(jìn)而激活免疫系統(tǒng),如多酚氧化酶級聯(lián)(PPO)反應(yīng),我們先檢測LPS誘導(dǎo)后PPO的活性,發(fā)現(xiàn)其活性升高,推測可能參與黑化作用。

    我們推測siRNA引起的免疫反應(yīng)與LPS類似,因而檢測參與黑化作用的3類分子[10],即識別分子,信號分子和效應(yīng)分子相關(guān)基因表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示,作為識別分子的 BmβGRP1,Bmβ-1,3-GRPB2,siRNA片段誘導(dǎo)后都下降,而LPS誘導(dǎo)后Bmβ-1,3-GRPB2上升,BmβGRP1 略下降,結(jié)果的不同可能是因為兩者都是針對于革蘭氏陰性菌的識別因子,而siRNA片段不屬于此類,作為信號(調(diào)節(jié))分子的 BmPPAE,Bmserpin-3,siRNA片段和 LPS誘導(dǎo)后都上升,作為效應(yīng)分子 BmPPO2,BmDDC,siRNA片段和LPS誘導(dǎo)后都下降,但LPS誘導(dǎo)后下降幅度大。由此可知,兩種方式誘導(dǎo)后,各基因的表達(dá)模式基本相似,說明siRNA在家蠶先天免疫應(yīng)答中也能充當(dāng)PAMP。

    [1]Yang M,Mattes J.Discovery biology and therapeutic potential of RNA interference,microRNA and antagomirs[J]PharmacolTher,2008,117(1):94 -104.

    [2]Merkling S.H,van Rij R.P.Beyond RNAi:antiviral defense strategies in Drosophila and mosquito.[J]Journal of Insect Physiology,2012,59,159 -170.

    [3]許平震.家蠶先天免疫的模式識別信號傳導(dǎo)和抗微生物肽基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究[D],2010重慶:西南大學(xué).

    [4]HOFFMANN J A.The immune response of Drosophila[J]Nature,2003,26(6962):33 -38.

    [5]DeWitteOrr S.J,Mossman KL.DsRNA and the innate antiviral immune response[J]Future Virology,2010,5,325-341.

    [6]Berke.IC,Li Y,Modis Y.Structural basis of innate immune recognition of viral RNA[J].Cellular Microbiology,2012,15,386 -394.

    [7]Alexopoulou L,Holt AC.Recognition of double-stranded RNA and activation of NF-kappaB by Toll-like receptor 3.[J]Nature 2001,413,732-738.

    [8]Doyle SE,Vaidya SA.Toll-like receptor 3 mediates a more potent antiviral response than Toll-like receptor 4[J].Journal of Immunology 2003,170,3565-3571.

    [9]Terenius O,Papanicolaou A.RNA interference in Lepidoptera:an overview of successful and unsuccessful studies and implications for experimental design[J]Journal of Insect Physiology 2011,57,231 -245.

    [10]楊松.昆蟲黑化反應(yīng)的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]2003,30(4):164-168.

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