肉羊鮮精液態(tài)保存技術(shù)研究進展

孔凡虎 朱應(yīng)民 許海軍 楊志強 徐文彬 （山東省煙臺市畜牧獸醫(yī)工作站 264001）

肉羊鮮精液態(tài)保存技術(shù)研究進展

孔凡虎 朱應(yīng)民 許海軍 楊志強 徐文彬 （山東省煙臺市畜牧獸醫(yī)工作站 264001）

目前我國已經(jīng)引入了德國肉用美利奴、夏洛萊、薩?？?、特克塞爾、無角陶塞特等優(yōu)質(zhì)肉用羊品種，利用引進的肉用品種進行當(dāng)?shù)鼐d羊品種改良，已經(jīng)取得了較好效果。為了提高引用肉用公羊的利用率，迅速擴大肉用羊的繁殖數(shù)量，采用鮮精低溫保存方法進行人工授精是較為直接有效的方法。鮮精低溫保存技術(shù)大大延長了肉羊精子的存活時間，提高了優(yōu)良種公羊精液的利用率，擴大了配種范圍。

1 肉羊鮮精保存技術(shù)

精液液態(tài)保存可以方便地用于現(xiàn)場的人工輸精，按溫度可以分為常溫保存(20～25℃)和低溫保存(0～5℃)兩種，常用的為4～5℃保存。羊精液在4℃的保存效果要優(yōu)于常溫的保存效果，較低PH、較高滲透壓的稀釋液更有利于羊精液的保存。低溫保存鮮精是指暫時地抑制或者停止精子的運動，降低其代謝速度，減緩其能量消耗，以便達到延長精子壽命而又不使其喪失受精能力。

2 肉羊鮮精保存稀釋液成分

2.1 糖類 主要作用是提供精子營養(yǎng)和補充精子能量，還具有低溫保護性能和穩(wěn)定細胞膜蛋白質(zhì)—脂類復(fù)合物的作用。Salamon等(1967)報道，三糖的低溫保護性能高于雙糖和單糖。Nauk(1974) (1991)發(fā)現(xiàn)，幾種糖類穩(wěn)定細胞膜蛋白質(zhì)—脂類復(fù)合物的性能大小順序為：棉子糖＞蔗糖＞ 乳糖＞ 果糖＞ 葡萄糖，且某種糖與另一種糖配合使用的效果比單一使用要好。Salamon 等(1972) 研究證實，在Tris液中葡萄糖的效果優(yōu)于果糖、乳糖和棉子糖。高維強(2012)研究表明，在15℃條件下，MES稀釋液稀釋液中添加10mM果糖效果最好，精子活力保持30%以上的保存時間能達到6d。

2.2 奶類和卵黃 稀釋液中加入一定數(shù)量的奶類和卵黃，具有調(diào)節(jié)滲透壓、降低精液中電解質(zhì)濃度、保護精子膜等作用，有利于精子的存活，另外還具有防冷凍和防冷休克的作用。卵黃有維持精子活力、保護精子頂體和線粒體膜的作用，這些保護性能是由于其脂蛋白濃度較低的緣故(Watson等，1973)。劉長河(2010)研究了以MES卵黃包被液態(tài)保存山羊精液16d，精子活力維持在30%以上。

2.3 緩沖物質(zhì) 在稀釋液中加入緩沖物質(zhì)的目的是保證精液適宜的pH值，以利于精子的存活。在緩沖物質(zhì)中，無論是山羊還是綿羊，均以三羥基甲氨基甲烷(Tris)效果最好，Tris不僅有良好的緩沖性，另外還具有利尿性和滲透性，且高濃度對精子的毒性也很底(Nahas，1961)。salvador等(2006)研究了以乳汁為基礎(chǔ)的稀釋液中添加明膠和半胱氨酸對5℃條件下山羊精子的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)保存72h后，添加明膠組精子的活力可達67%。

2.4 抗生素及其它 雖然羊的人工授精過程中各個環(huán)節(jié)均在嚴格的操作下進行，有時精液也難免受到某些微生物的污染，加入抗生素的目的是為了保護精子的抗菌作用。羊的精液稀釋液中抗生素的用量一般為：青霉素1000U/ml；雙氫鏈霉素1000μg/ml。左福元等(2002)報道，硫酸慶大霉素100U/ml優(yōu)于青霉素和鏈霉素。有的資料上報道恩諾沙星的效果較好。黃成全等(1997)報道，將5mmol/L的咖啡因添加于冷凍前的山羊稀釋精液中，能顯著提高山羊精液的解凍后活率，增強精子的耐凍性；使山羊冷凍精液配種的情期受胎率提高9.58%。徐剛毅等(2002)指出：用VB12注射液稀釋小尾寒羊鮮精液，使用方便，不需人工配制，隨用隨取。稀釋后的精液能擴大精子的運動空間，降低異物對精子的不良影響，補充精子在體外所需的營養(yǎng)；延長精子在體外的存活時間。在5～10℃冰箱中保存鮮精，能抑制精子的運動和代謝，降低精子的能量消耗，延長精子壽命。因此，用VB12注射液做為小尾寒羊鮮精稀釋液，在5～10℃冰箱中保存，可明顯延長精子的有效存活時間，值得在綿羊鮮精液保存中推廣應(yīng)用。

3 肉羊鮮精液態(tài)保存對精子存活時間的影響

鮑志鴻等(2004)報道在0～4℃條件下，特克塞爾種羊精子存活時間可達167h，而在77h之內(nèi)存活率可達70%，因此該時間為可授配臨界時間。常溫15～25℃下綿羊精子存活時間約為72h而鮮精低溫保存時間是167h比常溫保存延長了95h。張培松等(2003)研究用維生素B12稀釋小尾寒羊精液，然后在5～10℃下保存，發(fā)現(xiàn)維生素B12能顯著提高精子的有效存活時間(精子活力高于0.6)和最長存活時間(90%精子死亡時間)，特別是以1:3比例稀釋時，可以分別達到22h和49h，而不含維生素B12的稀釋液有效存活時間和最長存活時間僅為7h和17h。但也有研究表明，與檸檬酸鈉稀釋液相比，維生素B12注射液用作波爾山羊精液低溫(4～5℃)保存的精子存活時間相對較短，精子有效存活時間(活力降至0.3前的保存時間)和最長存活時間(99%精子死亡前的保存時間)平均為33h和64h，而含檸檬酸鈉的稀釋液可分別達到59h和102h。高維強(2012)研究用MES稀釋液液態(tài)保存山羊精液，在15℃條件下，保存精子有效活力維持在50%以上。

4 肉羊鮮精液態(tài)保存技術(shù)的前景

當(dāng)前我國種羊市場價格偏高，大多數(shù)小規(guī)模飼養(yǎng)的農(nóng)戶無力購買優(yōu)質(zhì)種羊，少量優(yōu)質(zhì)種羊集中在少數(shù)地方，偏僻的農(nóng)村因交通等原因無法進行綿羊的配種改良，這已成為限制我國肉羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個瓶頸因素。而低溫鮮精技術(shù)可保存精液77h內(nèi)受胎率達65%以上，輻射半徑達300km，通過遍布各鄉(xiāng)形成網(wǎng)絡(luò)的鮮精低溫鏈，農(nóng)民用低溫保存的鮮精進行綿羊改良，總成本僅8～10元，這種低價而便捷的方式在實踐中解決了農(nóng)戶綿羊改良難的問題。

鑒于綿羊冷凍精液人工授精的受胎率偏低，鮮精人工授精的輻射半徑小，影響優(yōu)秀種羊的利用率，利用現(xiàn)有繁改體系，建立以低溫(0～4℃)保存鮮精的方法形成低溫鏈，進行人工授精技術(shù)為主體的肉羊繁殖改良體系，可使農(nóng)戶避開購買價格昂貴的種羊，提高優(yōu)秀種羊利用率與輻射范圍，因此，推廣適合我國國情的鮮精低溫保存技術(shù)將極大地加速我國肉羊改良步伐，提高我國羊肉品質(zhì)，提升我國肉羊產(chǎn)業(yè)化水平。

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