千斤拔屬植物提取工藝及藥理作用研究進(jìn)展＊

陳 鵬 翁劍斌 殷 虎 沈樹虎 覃洪含 高 琦 林 航 岳桂華 審校 秦海洸

遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校（遵義563002）

千斤拔來(lái)源于豆科植物蔓性千斤拔Moghania philippinensis（Merr.et Rolfe）Li.、大葉千斤拔 M.macrophylla（Willd.）O.Kuntze 或繡毛千斤拔 M.ferruginea（Wall.ex Benth.）Li.的干燥根。主產(chǎn)于廣西和云南。我國(guó)產(chǎn)16種以及1變種。千斤拔屬植物在我國(guó)一直作為民族藥及民間藥被廣泛使用，其中有確切藥用歷史的就有6種。千斤拔性平味甘，具有補(bǔ)氣血，助陽(yáng)道的作用，臨床上主要用于治療手足痹痛，腰部風(fēng)濕作痛，理跌打傷等，《廣西中藥志》介紹：“舒筋活血，祛風(fēng)濕，強(qiáng)筋骨，四肢酸軟，跌打扭傷，陽(yáng)黃疸［1］，又治腰肌勞損，腹脹，食欲不振，月經(jīng)不調(diào)”［2］。饒偉文等［3］進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)分析并采用依據(jù)文獻(xiàn)的方法進(jìn)行試管法和TLC 預(yù)試法推測(cè)千斤拔屬植物中含有黃酮、酚類、鞣質(zhì)、糖類、甾醇、生物堿和氨基酸類試驗(yàn)均呈陽(yáng)性反應(yīng)。且近年研究發(fā)現(xiàn)，豆科千斤拔屬植物中廣泛存在異黃酮類物質(zhì)［4］。綜合查閱近幾年文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)關(guān)于千斤拔提取工藝的研究主要有滲漉法、回流法、水蒸氣蒸餾法、超聲法及其他提取方法；現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，千斤拔屬植物多具有抗炎、抗病毒等作用，在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用前景非常廣闊。筆者就近年來(lái)對(duì)該屬植物的提取工藝、藥理作用及臨床應(yīng)用等方面研究成果進(jìn)行綜述。

1 千斤拔屬植物提取工藝研究

1.1 滲漉法提取工藝研究 海莉等［5］以總生物堿的最大吸光度值為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)篩選千斤拔中生物堿提取方法及工藝參數(shù)，表明最佳提取工藝為酸水滲漉提取，最佳提取工藝參數(shù)是硫酸濃度為3%，滲漉時(shí)間為12h，流速為1mL·min－1，能得到較高產(chǎn)率的生物堿類成分，符合工業(yè)化生產(chǎn)。

1.2 回流法提取工藝研究 任朝琴等［6］研究千斤拔多糖的提取最佳工藝條件，其最佳提取工藝為：采用加熱回流法，石油醚（30～60℃）回流3h；濾渣用乙醚回流5h；濾渣用95%乙醇回流5h，濾渣用18倍量提取3次，2h／次，提取液濃縮至10mL加入乙醇后使溶液中乙醇的濃度約為90%，靜置8h后抽濾，真空干燥即得千斤拔多糖粗品。任朝琴等［7］采用正交試驗(yàn)篩選千斤拔總黃酮的提取工藝。以蘆丁含量為指標(biāo)，其最佳工藝為乙醇回流，最佳工藝參數(shù)為回流時(shí)間為3h，料液比為1∶14，乙醇濃度為50%，提取2次。并考察了提取工藝的穩(wěn)定性。此方法簡(jiǎn)單，可行性好，穩(wěn)定。

1.3 超聲法提取工藝研究 李華等［8］通過(guò)單因素多水平及正交試驗(yàn)考察超聲－甲醇法提取其總黃酮的試驗(yàn)條件，以染料木素作為對(duì)照品，通過(guò)比色法測(cè)定總黃酮的含量，高效液相色譜驗(yàn)證結(jié)果，在85%甲醇，料液比1∶40，超聲提取20min，提取1次，采用染料木素為對(duì)照品測(cè)定總黃酮得率為4.98%。該方法簡(jiǎn)單，易操作。鄧雪陽(yáng)等［9］首次運(yùn)用試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化提取總酚酸。乙醇濃度，超聲時(shí)間，超聲溫度和溶劑溶質(zhì)液固比用full two－level factorial design同時(shí)進(jìn)行優(yōu)化篩選，乙醇濃度，超聲時(shí)間，超聲溫度用face－centered composite design 進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。結(jié)果：優(yōu)化超聲提取總酚酸條件為乙醇濃度58.9%，超聲時(shí)間38min，超聲溫度47.2℃。在此條件下，總酚含量為40.36mg·g－1。朱琳等［10］研究超聲波輔助提取千斤拔多糖工藝，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明在最佳工藝為提取溫度70℃，超聲時(shí)間30min，料液比1∶40，提取時(shí)間2h時(shí)，多糖提取率為0.372%。陳帥［11］等采用采用單因素和正交試驗(yàn)輔助超聲波法提取千斤拔總黃酮工藝條件，在最佳條件為乙醇濃度80%，提取工藝為25min，料液比為1∶20，提取次數(shù)為2次時(shí)，總黃酮得率為3.00%。

1.4 水蒸氣蒸餾法提取工藝研究 王小慶等［12］利用水蒸氣蒸餾法提取蔓性千斤拔揮發(fā)油，流出液用乙醚萃取3次，合并及低溫除盡乙醚，無(wú)水硫酸鈉干燥，得淡黃色油狀物0.5mL，收率為0.5%，并用GC－MS進(jìn)行成分分析測(cè)定，結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索技術(shù)鑒定出38個(gè)化學(xué)成分。劉建華等［13］采用水蒸氣蒸餾法，從蔓性千斤拔的根莖中提取揮發(fā)油，得油狀物0.5mL，收率為0.02%，并采用氣相色譜－質(zhì)譜－計(jì)算機(jī)聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)揮發(fā)油的化學(xué)組成進(jìn)行了定性、定量研究，從提取出的60個(gè)成分中分析、鑒定出39個(gè)成分。周菊峰等［14］用水蒸氣蒸餾法得到的蔓性千斤拔揮發(fā)油采用子窗口因子分析法（SFA）分辨重疊色譜峰，依靠每一組分純質(zhì)譜在NIST 質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行相似性檢索而定性分析，總體積積分法進(jìn)行定量分析，共分辨出76 個(gè)色譜峰，鑒定出59個(gè)化學(xué)成分。

1.5 其他提取工藝方法研究 范賢等［15］分別采用水蒸氣蒸餾（SD）法、超聲萃取水蒸氣蒸餾（UESD）法、超臨流體萃?。⊿FE－CO2）法提取千斤拔的揮發(fā)油。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SD 法、UESD 法和CO2－SEF法提取的揮發(fā)油的收率分別為0.03%，0.08%和0.5%，SD 法和UESD 法提取的主要化學(xué)成分為萜烯類的物質(zhì)，而CO2－SEF法提取的主要化學(xué)成分是醇和酸類物質(zhì)。年曉莉等［16］利用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)蔓性千斤拔總黃酮進(jìn)行水提取工藝優(yōu)選，以浸膏得率和總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果顯示最佳水提工藝為以1∶30倍水量，于75℃條件下水提3h，共提取3次，該工藝簡(jiǎn)便，收率高，并且指出水提時(shí)間對(duì)蔓性千斤拔總黃酮的提取有較大影響。

2 藥理作用及臨床應(yīng)用研究

2.1 藥理作用 目前，從文獻(xiàn)已知千斤拔主要藥理作用有抑菌、鎮(zhèn)痛和抗炎、抗雌激素活性、保護(hù)神經(jīng)和保護(hù)血腦屏障等作用。其被廣泛應(yīng)用于婦科、風(fēng)濕痹痛等類型的中成藥生產(chǎn)，如婦科千金片、千斤拔飲、金雞膠囊（沖劑）、補(bǔ)血調(diào)經(jīng)片和壯腰健腎丸等中成藥。跌打損傷、乳房疾病、牙痛、婦科病、慢性腎炎、病后氣虛、食欲不振，均收到了良好的效果［17］。我國(guó)民間和臨床采用千斤拔治療疾病的有效單驗(yàn)方，用于風(fēng)濕骨疼、毒蛇咬傷、急性咽喉炎、各種腫毒、婦女白帶過(guò)多、產(chǎn)后關(guān)節(jié)疼痛等癥的治療［18］。再有，病后及老年人下肢軟弱無(wú)力、白細(xì)胞減少癥、急性乳腺炎、軟組織損傷及感染，千斤拔治療效果佳［19］。

2.1.1 鎮(zhèn)痛、抗炎作用 陳一等［20］采用蔓性千斤拔乙醇提取物對(duì)小鼠進(jìn)行抗扭體反應(yīng)和熱板試驗(yàn)，研究表明千斤拔乙醇提取物顯著抑制小鼠醋酸性“扭體”反應(yīng)；在熱板法中顯著提高小鼠痛閾，提示具有一定的鎮(zhèn)痛作用。試驗(yàn)又采用蔓性千斤拔乙醇提取物對(duì)小鼠足腫脹的影響和小鼠巴豆油耳部水腫的影響來(lái)證明其抗炎作用。王俊芳等［21］探討千斤拔抗炎的可能機(jī)制，同時(shí)探討千斤拔、芬必得與時(shí)間之間是否具有交互效應(yīng)。結(jié)果顯示千斤拔具有修復(fù)損傷神經(jīng)的作用，可能是通過(guò)抗炎作用實(shí)現(xiàn)的，同時(shí)降低P物質(zhì)含量可能是其抗炎的機(jī)制之一。且兩者具有正交互作用（聯(lián)合作用）。

2.1.2 對(duì)周圍神經(jīng)損傷的保護(hù)作用 袁建新等［22］以Wistar大鼠坐骨神經(jīng)擠壓為動(dòng)物模型，用千斤拔給Wistar大鼠灌胃，于周圍神經(jīng)損傷后的不同時(shí)期檢測(cè)感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（SCV）、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)遠(yuǎn)段端潛伏期（ML）、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（SFI）。結(jié)果千斤拔能促進(jìn)Wistar大鼠坐骨神經(jīng)損傷后有髓神經(jīng)再生，能促進(jìn)感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)纖維的恢復(fù)。

2.1.3 對(duì)腦組織及血腦屏障的保護(hù)作用 趙節(jié)緒等［23］在家兔口服千斤拔浸出液后，采用視神經(jīng)孔注入無(wú)肝素化自身動(dòng)脈血的方法建立急性蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）模型，造成家兔血腦屏障損害，結(jié)果表明千斤拔對(duì)實(shí)驗(yàn)組家兔腦波頻率和振幅的恢復(fù)有明顯的促進(jìn)作用，顯微鏡下可見腦組織也有極少量熒光現(xiàn)象。

2.1.4 抑菌作用 王明煜［24］用蔓性千斤拔提取物對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及白色念珠菌等四種臨床常見致病菌的抑制作用，陽(yáng)性對(duì)照藥物婦炎康顆粒。結(jié)果表明，與陽(yáng)性對(duì)照比較，蔓性千斤拔兩種提取物對(duì)上述四種致病菌均有較好的抑制作用。

2.1.5 抗血栓作用 張明秋等［25］研究探索了千斤拔黃酮抑制血栓形成及機(jī)制，結(jié)果表明千斤拔黃酮高劑量組血小板聚集率明顯降低。說(shuō)明千斤拔黃酮具有抑制血栓形成作用，其機(jī)制為主要抑制血小板活化和促進(jìn)纖溶作用。

2.1.6 類雌激素和抗雌激素活性作用 韋麗君等［26］研究壯藥千斤拔飲對(duì)去卵巢大鼠免疫內(nèi)分泌的影響。觀察各組大鼠血清E2、FSH、LH 及IL－2的變化、子宮重量及子宮組織學(xué)改變。壯藥千斤拔飲高劑量組能夠明顯增加去勢(shì)大鼠的子宮重量指數(shù)，但子宮內(nèi)膜并無(wú)明顯增厚；明顯升高去勢(shì)大鼠血清E2、IL－2水平，降低去勢(shì)大鼠血清FSH、LH 的水平。日本學(xué)者［27］曾對(duì)千斤拔的提取物進(jìn)行雌激素活性指導(dǎo)分離，從中分離得到幾個(gè)活性類黃酮化合物，其中8－（1，1二甲烯丙基）－染料木黃酮活性最強(qiáng)，連續(xù)給藥14d對(duì)卵巢切除大鼠的子宮亦具有明顯的增重作用?？勾萍に鼗钚栽囼?yàn)顯示，5，7，3’，4’－四羥基－6，8－異戊二烯基異黃酮活性最強(qiáng)。

2.1.7 其他作用 曾春蘭等［28］觀察大葉千斤拔的抗炎鎮(zhèn)痛、抗肝損傷、抗凝血、抗疲勞作用及毒性情況，結(jié)果說(shuō)明大葉千斤拔能減輕小鼠耳廓腫脹，減少小鼠扭體次數(shù)；降低肝損傷小鼠轉(zhuǎn)氨酶活性，延長(zhǎng)凝血時(shí)間和小鼠游泳時(shí)間。急性毒性試驗(yàn)表明，大葉千斤拔的小鼠最大給藥量為160.1g生藥／kg，藥物毒性很小。祁曉晨等［29］觀察大葉千斤拔水煮液對(duì)納洛酮引起的嗎啡依賴離體豚鼠回腸戒斷性收縮作用及它對(duì)乙酰膽堿引起的正常離體豚鼠回腸平滑肌收縮的影響。結(jié)果顯示，大葉千斤拔對(duì)以上兩種情況均有抑制作用。饒偉文等［3］利用昆明小白鼠，對(duì)蔓性千斤拔、大葉千斤拔、寬葉千斤拔的水煎液做了急性毒性與藥效學(xué)比較，結(jié)果表明，3種千斤拔均屬無(wú)毒類；與蒸餾水對(duì)照組相比，除鎮(zhèn)痛、抗炎作用外，免疫增強(qiáng)作用、抗疲勞、抗缺氧等指標(biāo)均有增強(qiáng)趨向。付鑫等［30］建立高脂血癥大鼠模型，用千斤拔總黃酮連續(xù)灌胃4 周，測(cè)定血清中TC、TG、HDL2c、LDL2c、NO 含量及NOS活性，結(jié)果表明TC、TG、LDL2c含量降低，NO 含量增加，NOS活性升高，即能調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠血脂代謝，糾正NO 代謝紊亂。

2.2 臨床應(yīng)用 在傣醫(yī)中應(yīng)用具有調(diào)理土塔，消食化積，收斂止瀉的作用。大葉千斤拔根20g煎服，主要用于治療急慢性腹瀉、腹痛、不思飲食、消化不良；25g煎服治療產(chǎn)后體弱多病和月經(jīng)不調(diào)等［31］。韋麗君等［32］探討壯藥千斤拔飲治療90例更年期綜合征觀察療效。治療組60例服千斤拔飲，治療3個(gè)月，愈顯率為81.66%，有效率為100%。結(jié)論是千斤拔飲能有效降低血中卵泡雌激素（FSH）濃度，提高雌二醇（E2）水平，改善更年期癥狀。向自軍［33］用婦科千金片（金櫻根、千金拔、穿心蓮、當(dāng)歸、雞血藤、黨參等）治療慢性盆腔炎102例，千斤拔清熱涼血、解毒除濕、通絡(luò)，并設(shè)對(duì)照組觀察，治療組顯效50例，有效25例，總有效率73.5%。趙連皓等［34］用婦科千金片治療慢性前列腺炎50例，結(jié)果總有效率95%。提示婦科用藥治療男性病，可開辟新思路。陸璇霖［35］運(yùn)用千斤拔、黃芪、桂枝等組成的芪桂千斤拔湯內(nèi)服外用治療痹癥80例，取得滿意效果，14例（17.5%）治愈，關(guān)節(jié)疼痛消失，58例（70.25%）顯效，關(guān)節(jié)疼痛減輕，復(fù)發(fā)時(shí)間較原來(lái)延長(zhǎng)；8例（10%）無(wú)效，服藥2個(gè)療程癥狀改善不明顯?？傆行蕿?0%。姜穎等［36］運(yùn)用金雞膠囊治療盆腔炎80例，治愈率100%，治療簡(jiǎn)便，療程短，療效可靠。梁晶［37］采用金雞沖劑配合外用康婦消炎栓法治療慢性盆腔炎73例，取得了滿意的效果，總有效率達(dá)97.3%。

3 結(jié)語(yǔ)與展望

近年來(lái)，研究者們?cè)谄浠瘜W(xué)成分的提取分離等方面獲得了肯定的成果，綜合文獻(xiàn)大都表明了其主要有效成分是黃酮類和多糖，在藥效學(xué)方面證明千斤拔具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌及神經(jīng)功能恢復(fù)等作用，并提示具有免疫作用。在以后工作中應(yīng)該進(jìn)一步應(yīng)用現(xiàn)代化手段深入神經(jīng)功能恢復(fù)和免疫調(diào)節(jié)方面研究，將不同的工藝設(shè)計(jì)及提取方法有機(jī)結(jié)合起來(lái)，確定最佳提取工藝條件，并聯(lián)合色譜技術(shù)建立藥材主要成分的HPLC、HPLC－MS及GC－MS指紋圖譜，考察活性部位指紋圖譜的特征峰與藥效的關(guān)系，用“量化的化學(xué)特征數(shù)據(jù)”建立“譜－效”關(guān)系，從藥效角度控制追蹤千斤拔化學(xué)成分的藥物活性，以便使該屬植物得到更好的開發(fā)與利用，這些都有待今后更進(jìn)一步的深入研究。相信隨著研究的不斷深入，進(jìn)行全成分的高效分析、檢測(cè)，提高其提取效率，推進(jìn)中藥千斤拔研究現(xiàn)代化進(jìn)程。

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