艾滋病常見(jiàn)機(jī)會(huì)性感染生物學(xué)特性與實(shí)驗(yàn)室檢查研究進(jìn)展

羅曉璐綜述，吳念寧 審校

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)，廣西南寧5300232)

艾滋病常見(jiàn)機(jī)會(huì)性感染生物學(xué)特性與實(shí)驗(yàn)室檢查研究進(jìn)展

羅曉璐綜述，吳念寧 審校

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西艾滋病臨床治療中心(南寧)，廣西南寧5300232)

艾滋病是人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染侵犯人體引起的機(jī)體免疫功能下降而導(dǎo)致的各種機(jī)會(huì)性感染和腫瘤發(fā)生的綜合征。近年來(lái)，我國(guó)艾滋病流行范圍日趨擴(kuò)大，全球范圍內(nèi)的艾滋病毒感染患者以及患者的理論報(bào)告監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)逐年上升，當(dāng)前正處于艾滋病防治的關(guān)鍵時(shí)期。低免疫水平所導(dǎo)致的各種機(jī)會(huì)性感染也成為實(shí)驗(yàn)室診斷的一大熱點(diǎn)和難點(diǎn)。本文將艾滋病的幾種常見(jiàn)機(jī)會(huì)性感染的生物學(xué)特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行歸納總結(jié)，以期探索更好的實(shí)驗(yàn)方法。

艾滋??；機(jī)會(huì)性感染；病原學(xué)；免疫學(xué)；診斷

HIV感染人體后，會(huì)破壞人體細(xì)胞的免疫功能，降低患者抵抗力，導(dǎo)致各種病原體侵入發(fā)生機(jī)會(huì)性感染。機(jī)會(huì)性感染會(huì)使艾滋病患者的多個(gè)器官系統(tǒng)受侵害，感染的病原體種類(lèi)繁多、復(fù)雜，并且經(jīng)常會(huì)有幾種機(jī)會(huì)性感染同時(shí)發(fā)生的情況，這些病原體對(duì)正常人的致病性很低，但是對(duì)艾滋病患者則有生命危險(xiǎn)。本文針對(duì)艾滋病的幾種常見(jiàn)機(jī)會(huì)性感染的生物學(xué)特性、實(shí)驗(yàn)室診斷綜述如下。

1 馬爾尼菲青霉菌

1.1 生物學(xué)特性馬爾尼菲青霉菌是青霉菌屬中唯一具有溫度雙相型性質(zhì)的種類(lèi)。雖然大部分的青霉菌都不會(huì)引發(fā)人類(lèi)的健康問(wèn)題，但是馬爾尼菲青霉菌卻是致病的[1]。在25℃時(shí)馬爾尼菲青霉菌呈現(xiàn)為菌絲相，在37℃時(shí)則為酵母型。前者在培養(yǎng)基中可形成紅色素，后者沒(méi)有。只有酵母型才有致病性。此外，馬爾尼菲青霉菌在兩者之間轉(zhuǎn)換的時(shí)間長(zhǎng)短不一，從酵母相變?yōu)榫z相較容易，只需要1～2d即長(zhǎng)出帚狀枝并產(chǎn)生紅色色素，而后者轉(zhuǎn)變?yōu)榍罢咝枰?個(gè)星期以上。此菌在自然界中廣泛存在，其中廣西銀杏竹鼠的帶菌率高達(dá)96%。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢查(1)病原學(xué)：取患者的骨髓、血液、痰液、分泌物等為標(biāo)本，經(jīng)瑞-姬氏染色，可在巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等中見(jiàn)橢圓形或圓形的菌體，約2～8μm[2]。(2)血清免疫學(xué)：經(jīng)血清中馬爾尼菲青霉菌產(chǎn)生的蛋白抗原、機(jī)體產(chǎn)生的抗體檢測(cè)。經(jīng)間接免疫熒光檢測(cè)可檢測(cè)出馬爾尼菲青霉菌的IgG[3]；馬爾尼菲青霉菌菌絲相和酵母相時(shí)均可產(chǎn)生蛋白抗原，其中酵母相時(shí)蛋白抗原的免疫反應(yīng)性更大[4]。(3)分子生物學(xué)：PCR在診斷馬爾尼菲青霉菌時(shí)要給予該病毒的58SrRNA基因及特殊寡聚核苷酸引物，目前直接血液檢查陽(yáng)性率低[5]，需進(jìn)一步研究。

2 新型隱球菌

2.1 生物學(xué)特性在培養(yǎng)物或組織液中呈較大球形，直徑約為5～20μm，菌周有厚莢膜，折光性強(qiáng)，不易著色，經(jīng)墨汁陰性顯影法檢查，能見(jiàn)透明莢膜包裹菌細(xì)胞，菌細(xì)胞常有出芽，但不生成假菌絲。在沙保氏瓊脂及血瓊脂培養(yǎng)基上，病原性隱球菌在25℃及37℃可生長(zhǎng)，而非病原性隱球菌在37℃不能繁殖。培養(yǎng)數(shù)日后生成酵母型菌落，初呈白色，1周后轉(zhuǎn)淡黃或棕黃、濕潤(rùn)黏稠，狀似膠汁。本菌能分解尿素，以此與酵母菌和念珠菌鑒別。

2.2 實(shí)驗(yàn)室檢查(1)常規(guī)檢查：大約有70%的患者腦脊液壓力在1.95～3.92KPa的范圍內(nèi)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)增多0.02～0.7×109/L,多為淋巴細(xì)胞。(2)病原學(xué)：大約有57%～74%的患者經(jīng)腦脊液墨汁染色圖片可檢查出帶有莢膜的圓形隱球菌。把腦脊液接種在Sabouraud培養(yǎng)基上，約有95%的病例可培養(yǎng)出新型隱球菌[6]。(3)血清免疫學(xué)：隱球菌莢膜中含有多糖體，大約90%的病例可檢出這一抗體的相應(yīng)抗體。乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè)腦脊液中隱球菌莢膜多糖抗體的陽(yáng)性率高達(dá)92%；初體結(jié)合試驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè)出急性患者的的多糖體抗原，陽(yáng)性率約為50%[6]；ELISA檢測(cè)法顯示抗原含量和病情預(yù)后之間的相關(guān)性。

3 卡氏肺孢子蟲(chóng)

3.1 生物學(xué)特性卡氏肺孢子蟲(chóng)為真核微生物，主要有兩種形態(tài)，即包囊與滋養(yǎng)體，包囊前期為兩者之間的中間形，其形態(tài)學(xué)特征欠清。包囊呈圓形或橢圓形，直徑4～6μm，囊壁內(nèi)含有囊內(nèi)小體，完全成熟的包囊內(nèi)一般為8個(gè)。卡氏肺孢子蟲(chóng)的寄生部位限于肺泡腔，成熟包囊進(jìn)入肺泡后破裂，囊內(nèi)小體脫囊后發(fā)育為滋養(yǎng)體，滋養(yǎng)體緊貼肺泡上皮寄生、增殖，包囊多位于肺泡中央。

3.2 實(shí)驗(yàn)室檢查(1)常規(guī)檢查：白細(xì)胞計(jì)數(shù)不定，嗜酸細(xì)胞增多，pH正常或升高，二氧化碳分壓和動(dòng)脈氧分壓降低，肺活量減少，肺泡-動(dòng)脈氧分壓差增加。(2)病原體：經(jīng)呼吸道或肺組織分泌物標(biāo)本檢查(主要有痰液、支氣管肺泡灌洗液、支氣管肺活檢等)可見(jiàn)卡氏細(xì)胞菌的滋養(yǎng)體和包裹。染色使用Giemsa、Gram、Wright、甲基藍(lán)等。(3)血清學(xué)抗原檢測(cè)采用熒光素標(biāo)記單克隆抗體行直接免疫熒光法監(jiān)測(cè)，或使用酶標(biāo)記單克隆抗體行免疫組織化學(xué)染色法監(jiān)測(cè)[7]，主要監(jiān)測(cè)對(duì)象為支氣管肺泡灌洗液、痰液等；抗體檢測(cè)采用間接熒光抗體試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、蛋白印跡試驗(yàn)等監(jiān)測(cè)血清的特異性抗體[8]。(4)分子生物學(xué)當(dāng)前檢測(cè)卡氏肺孢子蟲(chóng)的PCR方式有單一PCR、套式PCR，PCR檢測(cè)靈敏度較高，肺泡組織、痰液、支氣管肺泡灌洗液標(biāo)本和全血標(biāo)本均可采取該方式檢測(cè)。

4 巨細(xì)胞病毒

巨細(xì)胞病毒通常造成視網(wǎng)膜炎，它的發(fā)生與CD4細(xì)胞關(guān)系密切，通常患有巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎的CD4細(xì)胞低于0.10×109/L，當(dāng)CD4細(xì)胞＜0.05×109/L時(shí)[9]，該病癥的發(fā)生率顯著提高。

4.1 生物學(xué)特性具有典型皰疹病毒形態(tài)，DNA結(jié)構(gòu)與HSV相似，但比HSV大5%。對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞或宿主有高度特異性。巨細(xì)胞病毒只感染人，并在纖維細(xì)胞中增殖。具有增殖緩慢、復(fù)制周期長(zhǎng)的特點(diǎn)。

4.2 實(shí)驗(yàn)室檢查(1)形態(tài)學(xué)：經(jīng)患者的尿液、唾液、子宮分泌物等標(biāo)本離心沉淀后，使用吉姆薩染色[10]鏡檢查脫落細(xì)胞的巨大細(xì)胞、核內(nèi)，以及胞質(zhì)內(nèi)嗜酸性包涵體即可診斷。(2)病毒分離：將患者的尿液、唾液、乳汁、生殖道分泌物、白細(xì)胞等接種至成纖維細(xì)胞進(jìn)行繁殖、分離，1天或數(shù)周后出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)[11]，通過(guò)固定以及蘇木精-伊紅(HE)[12]染色后即可見(jiàn)巨細(xì)胞，且核內(nèi)有內(nèi)包涵體，核周有嗜酸性胞質(zhì)內(nèi)包涵體及暈圈。(3)血清免疫學(xué)抗原檢測(cè)是患者有病毒血癥時(shí)，使用葡萄糖液提取外周血單核細(xì)胞，制成涂片，加用巨細(xì)胞病毒單克隆抗體，使用熒光染色或酶免疫監(jiān)測(cè)胞內(nèi)抗原[13,14]；抗體檢測(cè)常規(guī)采用的有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、間接免疫熒光試驗(yàn)、放射性免疫試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)等檢測(cè)IgM和CMV IgG。在血清標(biāo)本確定有感染時(shí)，留血清標(biāo)本和間隔2周、4周、8周的血清標(biāo)本[15]，結(jié)合病毒分離結(jié)果診斷。(4)分子生物學(xué)當(dāng)前在艾滋病的檢測(cè)中廣泛應(yīng)用，32P標(biāo)記[16]靈敏度最高，某種程度上其監(jiān)測(cè)結(jié)果靈敏于病毒分離。從巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎的感染組織的上清液中可以監(jiān)測(cè)出相當(dāng)于數(shù)十個(gè)病毒的DNA分子，或1～5個(gè)孔板形成單位病毒DNA序列[17]。

5 單純皰疹病毒

5.1 生物學(xué)特性單純皰疹病毒的病毒形態(tài)特征明顯，基因組約152kb，編碼70多個(gè)多肽，34個(gè)基因，部分功能明確[18]。其中g(shù)B、gD與病毒吸附與穿入相關(guān)，是與細(xì)胞特異性受體相互作用的病毒配體分子。單純皰疹病毒在多種細(xì)胞中能增殖，常用原代兔腎、人胚腎細(xì)胞以及地鼠腎等傳代細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒。感染細(xì)胞很快出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變，并出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體。

5.2 實(shí)驗(yàn)室檢查(1)病原體：取患者生殖器、皮膚等部位的分泌物、唾液等標(biāo)本接種人二倍體成纖維細(xì)胞株WI38和BHK、Vero[19]等傳代細(xì)胞株經(jīng)24～48h后，細(xì)胞變圓、腫脹、融合，后采用HSV-1、HSV-2的單克隆抗體作免疫熒光染色鑒定。(2)血清免疫學(xué)常用抗體檢測(cè)的方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、免疫熒光及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，臨床多用于急性感染診斷和器官移植患者的檢測(cè)，以及流行病學(xué)調(diào)查。如用于急性感染診斷，應(yīng)采取急性期和恢復(fù)期雙份血清，同時(shí)檢測(cè)血清中的IgG和IgM。(3)分子生物學(xué)靈敏度高，特異性好，通常于病變細(xì)胞、組織中提取病毒DNA，使之與標(biāo)記的HSV DNA探針雜交，或采用PCR檢測(cè)HSV-1或HSV-2的gB糖蛋白基因[20]。

6 弓形蟲(chóng)

6.1 生物學(xué)特性弓形體無(wú)運(yùn)動(dòng)器，但能活動(dòng)。滋養(yǎng)體對(duì)溫度較敏感，50℃15min后迅速死亡，-20℃1.5h后也喪失感染力；包囊的抵抗力較強(qiáng)，小鼠組織中的包囊可在4℃保存68d，而組織中的滋養(yǎng)體只能存活10d，包囊加熱30℃需30min后才死亡。包囊對(duì)蛋白酶的抵抗也較強(qiáng)，可存活8h以上，而滋

養(yǎng)體接觸蛋白酶后即迅速被破壞。卵囊對(duì)酸、堿和常用的消毒劑的抵抗力較強(qiáng)，對(duì)熱、干燥和氨水則較敏感，加熱50～55℃30min就能被殺死。

6.2 實(shí)驗(yàn)室檢查(1)病原體：取腦脊液涂片，采用常規(guī)免疫細(xì)胞學(xué)法或染色法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)弓形蟲(chóng)包裹或滋養(yǎng)體[21]而確診。(2)血清免疫學(xué)：抗體檢查，在疾病初2周有IgM特異抗體，4～8周高峰，后數(shù)月內(nèi)下降至檢測(cè)不到[22]。IgG抗體緩慢上升，1～2月高峰并持續(xù)數(shù)月或數(shù)年。IgM高于IgG4倍，為急性感染[23]；抗原體檢查采用抗弓形蟲(chóng)特異性抗體監(jiān)測(cè)患者腦脊液或血清中的弓形蟲(chóng)循環(huán)抗原方法，弓形蟲(chóng)循環(huán)抗原陽(yáng)性為病原體存在即可診斷[24]。(3)分子生物學(xué)：采用PCR或核酸原位雜交檢測(cè)弓形蟲(chóng)的DNA[25]。

本文所述僅是常見(jiàn)和少見(jiàn)的機(jī)會(huì)性感染，免疫功能低下導(dǎo)致的并發(fā)癥都是由機(jī)會(huì)性感染所致。目前，機(jī)會(huì)性感染日益增多、嚴(yán)重，并且病原體多為耐藥菌，治療困難、療效差、死亡率高，因此日益引起人們的重視。為減少艾滋患者發(fā)生機(jī)會(huì)性感染的幾率，除盡早進(jìn)行抗病毒干預(yù)外，還應(yīng)不斷提高臨床實(shí)驗(yàn)室HIV和機(jī)會(huì)性感染的診斷水平，不斷開(kāi)發(fā)新的診斷方法，采用PCR或核酸原位雜交檢測(cè)弓形蟲(chóng)的DNA，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，提高患者生存率。

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R446.5,R512.91

A

1674-1129(2013)02-0151-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.02.017

南寧市重大科技資助項(xiàng)目(No：201109047C)；南寧市科技項(xiàng)目資助課題(No：20123164)；廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(No：Z20120621)

羅曉璐，男，1968年10月生，廣西醫(yī)科大學(xué)畢業(yè)，學(xué)士學(xué)位，副主任技師，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)研究方向?yàn)榕R床檢驗(yàn)與研究。