同型半胱氨酸與阿爾茨海默病的臨床研究*

李艷玲，侯 王月，牛 超，虞立霞，程義勇，洪 燕△

（1.天津市中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院營養(yǎng)科，天津300193；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，天津300050）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是蛋氨酸代謝過程中的重要中間產(chǎn)物。近年來大量的流行病學(xué)調(diào)查、臨床和基礎(chǔ)研究表明，高同型半胱氨酸血癥與某些神經(jīng)精神疾患如阿爾茨海默病、帕金森病、抑郁癥及認(rèn)知障礙等疾病的發(fā)病、發(fā)展和預(yù)后存在一定的聯(lián)系。多項(xiàng)研究表明老年癡呆患者血漿的Hcy水平明顯高于對(duì)照組［1］，但AD患者的Hcy水平與認(rèn)知功能的相關(guān)性尚需研究資料證實(shí)。本研究通過臨床研究觀察AD患者和對(duì)照組血清Hcy和葉酸的水平，明確Hcy水平與認(rèn)知功能的相關(guān)性，為探討Hcy在AD發(fā)病中的作用提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例來源

在天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，選擇符合美國精神障礙診斷統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第4版 （DSM-IV）和美國國立神經(jīng)和語言障礙和卒中——老年性癡呆及相關(guān)疾病學(xué)會(huì)（NINCDS-ADRDA）診斷標(biāo)準(zhǔn)患有AD的患者36例，頭顱 CT和／或 MRI顯示腦室擴(kuò)大，腦裂、腦溝增寬，顳葉海馬萎縮，并排除其他可致認(rèn)知功能障礙的器質(zhì)性疾病及功能性精神障礙。對(duì)照組32例選擇年齡、性別盡量與病例組匹配且無癡呆的老年人。凡正在或1個(gè)月內(nèi)服用過B族維生素、葉酸以及合并嚴(yán)重肝腎功能異常、有感染征象及免疫性疾病和惡性腫瘤等者均予以排除。兩組應(yīng)在年齡、性別構(gòu)成比，合并高血壓、糖尿病、高脂血癥、冠心病、腦卒中以及吸煙、肝腎功能等方面差異均無顯著性。所有入選者對(duì)測(cè)試均知情同意。對(duì)受試者進(jìn)行認(rèn)知功能檢測(cè)，同時(shí)測(cè)定血漿中Hcy及葉酸水平。比較AD患者和對(duì)照組的Hcy及葉酸水平，對(duì)AD組受試者血漿Hcy水平與認(rèn)知功能障礙程度進(jìn)行相關(guān)性分析。對(duì)受試者或其家屬進(jìn)行膳食調(diào)查，依據(jù)食物調(diào)查表觀察和計(jì)算葉酸的攝入量是否與AD的發(fā)生有關(guān)。

1.2 認(rèn)知功能檢測(cè)

認(rèn)知功能障礙評(píng)定采用簡易智力狀態(tài)檢查量表（mini－mental state examination，MMSE），癡呆程度評(píng)定根據(jù)臨床癡呆評(píng)定量表（clinical dementia rating scale，CDR）。

1.3 膳食調(diào)查

膳食調(diào)查采用三天24 h回顧法，資料采集直接通過患者或在其家屬協(xié)助下完成。結(jié)合中國食物成分表（2002）中各類食物葉酸的含量，計(jì)算受試者的葉酸攝入量。

1.4 血清Hcy水平檢測(cè)

采用酶轉(zhuǎn)化法測(cè)定血清中Hcy的總濃度。檢測(cè)時(shí)先用1，4二硫蘇糖醇（dithiothreitol，DDT）將氧化態(tài)的Hcy還原，再用基因重組甲硫氨酸分解酶（methioineγ-lyase）將 Hcy反應(yīng)生成硫化氫（H2S），氨（ammonia）和酮基丁酸（2-ketobutyrate），形成的硫化氫再與適當(dāng)呈色劑反應(yīng)形成可測(cè)量的熒光化合物。這種熒光物質(zhì)在660 nm刺激后可在710 nm處放出熒光。其定量線性范圍介于 1μmol／L和 100μmol／L之間。具體檢測(cè)步驟按照試劑盒的要求進(jìn)行。Hcy檢測(cè)試劑盒和OP-162 Hcy熒光專用檢測(cè)儀為上海杏恩生物科技公司產(chǎn)品。血清Hcy正常值是5～15 μmol／L，高于此值為高同型半胱氨酸血癥。

1.5 血清葉酸含量的檢測(cè)

血清樣品按照美國DPC公司的電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)試劑盒中的說明書進(jìn)行檢測(cè)。向預(yù)先準(zhǔn)備的試管中分別加入200μl校正、質(zhì)控或檢測(cè)樣本。向所有試管中加入1 000μl的工作液，旋轉(zhuǎn)混勻。松開所有試管蓋，將所有試管放入沸騰水浴（100℃）內(nèi)15～20 min。從100℃水浴箱中取出所有試管，放入室溫水浴箱內(nèi)冷卻5 min。向IMMULITE樣本杯加入至少350μl經(jīng)處理的樣本，用美國DPC公司IMMULITE 1000電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，應(yīng)用SPSS 10.0軟件對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清同型半胱氨酸、葉酸水平比較

結(jié)果顯示，AD患者血清Hcy水平顯著高于對(duì)照組，AD組有23例（64%）病人有高同型半胱氨酸血癥（Hhcy），對(duì)照組 7例（22%），經(jīng)χ2檢驗(yàn)兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血清和膳食葉酸水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05，表 1）。

Tab.1 Concentration of Hcy and folate in serum and folate in diet（±s）

Tab.1 Concentration of Hcy and folate in serum and folate in diet（±s）

Hcy：Homocysteine；Hhcy：Hyperhomocysteinemia number of all subjects；FA：Folate*P＜0.05 vs Control

Group n Hcy（μmol／L）Hhcy n（%） FA（μg／L） FA（μg／d ）Control 32 12.38±4.25 7（22） 7.92±2.22 259.74±41.92 AD 36 17.51±5.62*23（64）*5.17±1.76*206.94±44.51*

2.2 AD組受試者血清Hcy水平與CDR分值的相關(guān)性

圖1所示，AD組受試者血清Hcy水平與CDR分值呈顯著正相關(guān)性。

Fig.1 Correlation plots of serum Hcy concentrations and CDR

2.3 AD組受試者血清Hcy水平與MMSE分值的相關(guān)性

圖2所示，AD組受試者血清Hcy水平與MMSE分值呈顯著負(fù)相關(guān)性。

Fig.2 Correlation plots of serum Hcy concentrations and MMSE

3 討論

Hcy是營養(yǎng)必需氨基酸蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物。Hcy的代謝途徑主要有兩條：一是以維生素B12為輔酶，在蛋氨酸合成酶（methionine synthase，MS）、N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）的作用下再甲基化形成蛋氨酸；二是以維生素B6為輔酶在胱硫醚β-合成酶（cystathionine beta-synthase，CBS）的作用下合成胱硫醚。血漿 Hcy的正常值是 5～15μmol／L［2］。血漿的Hcy水平高于此值稱為高同型半胱氨酸血癥，遺傳和后天的多種因素都可導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥。

1976年Wilcken等通過流行病學(xué)調(diào)查最先提出Hcy是心腦血管病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，近年來又有研究表明，高同型半胱氨酸血癥與某些神經(jīng)心理疾患如 AD、帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）、抑郁癥及認(rèn)知障礙等疾病的發(fā)病、發(fā)展和預(yù)后有一定的聯(lián)系。1992年，Bell等首次在一組急性抑郁癥發(fā)作的老年患者中發(fā)現(xiàn)血漿Hcy濃度與認(rèn)知功能呈顯著負(fù)相關(guān)［3］。1996年Riggs等報(bào)道，在68例58歲及以上的觀察對(duì)象中，血漿Hcy濃度與空間模仿技巧呈負(fù)相關(guān)關(guān)系［4］；Den Heijer等（2003）研究了 1077名年齡60～90歲受試者血漿Hcy水平與其腦組織萎縮程度的關(guān)系，結(jié)果顯示，血漿Hcy水平較高者，大腦皮層和左右兩側(cè)海馬的萎縮程度也較高，為Hcy與阿爾茨海默病發(fā)病之間的關(guān)系提供了另一有利證據(jù)［5］。Mizrahi等（2004）檢測(cè)了 79例 AD患者和 156例健康對(duì)照者血漿Hcy、維生素B12和葉酸水平，在校正年齡、性別和吸煙后發(fā)現(xiàn)，AD患者Hcy水平顯著高于對(duì)照組，而葉酸和維生素B12并無顯著差異，提示認(rèn)知功能減退可能是高Hcy血癥直接引起［6］。近年 Kim（2008）、Sung（2009）和 Abderrahim（2010）［7］等的研究顯示，Hcy水平升高與認(rèn)知功能損傷存在密切聯(lián)系。

葉酸是Hcy代謝過程中的重要輔助因子，影響血漿Hcy水平的因素眾多，但幾無例外，都是通過影響其代謝途徑而起作用的，血漿葉酸水平可能是眾多因素中對(duì)血漿Hcy水平影響最大的因素之一。業(yè)已證明血漿Hcy水平與葉酸水平呈負(fù)相關(guān)，高同型半胱氨酸血癥者較非高同型半胱氨酸血癥者血漿葉酸水顯著降低。Sturat（2004）［8］的 Meta分析表明，相對(duì)維生素B12、維生素B6、維生素B2等B族維生素而言，葉酸降低血漿Hcy的能力最強(qiáng)，每日補(bǔ)充0.5～5.0 mg可使血漿 Hcy濃度平均下降約 25%。Tanne（2004）［9］通過對(duì)大量的臨床葉酸干預(yù)實(shí)驗(yàn)Meta分析后預(yù)測(cè)，每日攝入200μg的葉酸可使血漿Hcy平均降低4μmol／L，使美國每年死于心血管疾病的患者減少 13 500～50 000人。嚴(yán)江濤（2004）［10］等對(duì)220例中老年人血漿Hcy及葉酸進(jìn)行檢測(cè)分析以探討它們之間的關(guān)系，進(jìn)而對(duì)35例高同型半胱氨酸血癥病人給予口服葉酸治療觀察，結(jié)果高同型半胱氨酸血癥組的血漿葉酸水平顯著低于正常組；在血漿葉酸水平低于6μg／L時(shí)，高同型半胱氨酸血癥發(fā)生率明顯高于其它組，口服葉酸可以顯著降低血漿Hcy水平。由此可見血漿Hcy水平升高與機(jī)體葉酸水平有關(guān)，增加富含葉酸的飲食攝入有助于血漿Hcy水平恢復(fù)正常。

本研究結(jié)果顯示，AD患者血清Hcy水平顯著高于對(duì)照組，AD組受試者血清Hcy水平與CDR分值呈顯著正相關(guān)，與MMSE分值呈顯著負(fù)相關(guān)。結(jié)果還表明血清和膳食葉酸水平顯著低于對(duì)照組。老年人由于機(jī)體各器官代謝功能減退，胃腸道消化吸收能力降低、食欲不好、長期進(jìn)食少以及某些疾病等原因引起偏食、厭食、挑食，或者是由于生活習(xí)慣等原因，容易發(fā)生維生素缺乏，所以葉酸缺乏可能是老年人Hcy水平升高進(jìn)而導(dǎo)致AD發(fā)生的重要原因。

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