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    莧籽ACE抑制肽的大孔樹(shù)脂分離純化

    2013-03-13 03:29:52陳飛平周家華曾凡坤
    食品工業(yè)科技 2013年11期
    關(guān)鍵詞:大孔靜態(tài)水解

    陳飛平,周家華,曾凡坤,常 虹

    (1.北京市農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)業(yè)綜合發(fā)展研究所,北京100097; 2.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,重慶400715)

    大孔樹(shù)脂是一類(lèi)非離子型高分子吸附劑,主要是通過(guò)物理作用力有選擇地吸附有機(jī)物,同時(shí)由于樹(shù)脂顆粒具有一定的孔徑,使得它們對(duì)通過(guò)孔徑的化合物根據(jù)其相對(duì)分子量的不同而具有一定的選擇性,從而達(dá)到分離純化的目的。在實(shí)際應(yīng)用中大孔樹(shù)脂對(duì)一些與其骨架結(jié)構(gòu)相近的分子如芳香族苯環(huán)化合物尤具很強(qiáng)的吸附能力[1]。由于其操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、可重復(fù)利用等優(yōu)點(diǎn),近年來(lái)大孔樹(shù)脂在分離純化領(lǐng)域中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛,常被用于黃酮[2-4]、多糖[5]、皂苷[6-8]、生物堿[9]、活性肽[10-11]等物質(zhì)的分離純化中。籽粒莧是一種糧、菜、飼兼具的多用型作物,在我國(guó)已有2000多年的栽培歷史,其籽實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,必需氨基酸含量高于一般谷物。目前國(guó)內(nèi)對(duì)莧籽蛋白的研究鮮見(jiàn)報(bào)道,而國(guó)外對(duì)其研究稍多。研究結(jié)果表明莧籽蛋白中含有降壓[12-13]、抗癌[14]、抗氧化[15]、抗菌[16]等肽片段。為了保持體系pH的恒定,在酶解制備莧籽ACE抑制肽的過(guò)程中需要加入氫氧化鈉溶液,致使莧籽ACE抑制肽粗提物中存在一定量的鹽分(主要為氯化鈉),這些鹽分的存在不僅會(huì)影響產(chǎn)品的風(fēng)味,還會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生不利影響,如加重腎臟負(fù)擔(dān)、導(dǎo)致高血壓等,因此需要對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽處理。同時(shí)粗提物中還含有大分子的蛋白以及其他雜質(zhì),需要進(jìn)行分離純化。有研究發(fā)現(xiàn),大孔樹(shù)脂在純化ACE抑制肽方面的效果較好[17-20],因此本實(shí)驗(yàn)采用大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽進(jìn)行分離純化研究,以期為ACE抑制肽的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    籽粒莧莧籽(雜交K112) 北京市密云縣太師屯鎮(zhèn)流河溝村;DA201-C、DA201-E 江蘇蘇青水處理集團(tuán)有限公司;D101、HPD600、HPD826 滄州寶恩化工有限公司;NKA-9 南開(kāi)大學(xué)化工廠;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)、馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL) Sigma公司;乙腈 色譜純;堿性蛋白酶(Alcalase 2.4L FG) 諾維信公司;其他試劑 均為分析純。

    表1 大孔樹(shù)脂的物理結(jié)構(gòu)參數(shù)Table 1 Physical configuration parameters of the macroporous absorbed resins

    高效液相色譜儀 沃特世(Waters)科技有限公司;H2050R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 湘儀離心機(jī)儀器有限公司;PHS-3C酸度計(jì) 上海理達(dá)儀器廠; FD-80真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;CP225D電子天平 德國(guó)賽多利斯股份公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 莧籽蛋白粉制備 稱(chēng)取一定量的脫脂莧籽粉按料液比1∶35加入一定體積的0.018%質(zhì)量濃度的NaOH溶液,置于35℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱中震蕩保溫提取30min,取出靜置10min,將上清液倒入離心管中,4℃、6000r/min離心20min,過(guò)濾得上清液。上清液用2mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至4.6,在4℃下靜置6h,然后4℃、3000r/min離心15min,取沉淀用適量的水進(jìn)行溶解并調(diào)節(jié)pH至中性,進(jìn)行冷凍干燥得到莧籽蛋白粉。

    1.2.2 莧籽ACE抑制肽制備 稱(chēng)取適量莧籽蛋白粉,用蒸餾水將其溶解為底物質(zhì)量濃度為4%的水解底物,在90℃恒溫水浴中預(yù)處理10min,取出冷卻至54.4℃,用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH8.78,加入質(zhì)量為底物質(zhì)量5%的堿性蛋白酶,在54.4℃恒溫水浴震蕩搖床中水解3h,水解過(guò)程中保持pH和溫度恒定,用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)維持pH8.78±0.05之間。酶解結(jié)束后在沸水浴中加熱10min滅酶,迅速冷卻,4℃、10000r/min離心20min,取上清液冷凍干燥得莧籽ACE抑制肽。

    1.2.3 大孔樹(shù)脂的預(yù)處理 采用2倍體積無(wú)水乙醇浸泡24h,使其充分溶脹,用無(wú)水乙醇洗至洗脫液加適量蒸餾水無(wú)白色混濁出現(xiàn),隨后用蒸餾水洗至無(wú)乙醇味;接著用2倍體積的質(zhì)量濃度為5%鹽酸浸泡3h,再用蒸餾水洗至中性;最后用2倍體積的質(zhì)量濃度5%氫氧化鈉溶液浸泡3h,再用蒸餾水洗至中性,備用。

    1.2.4 大孔樹(shù)脂型號(hào)的篩選 為了富集莧籽蛋白酶解物中的多肽,脫去無(wú)機(jī)鹽,本實(shí)驗(yàn)以吸附率和解吸率為指標(biāo),比較DA201-C、DA201-E、D101、HPD600、NKA-9和HPD826等6種大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的分離純化效果。

    稱(chēng)取10g預(yù)處理樹(shù)脂置于150mL錐形瓶中,向其中加入質(zhì)量濃度10mg/mL的水解液30mL,在25℃,160r/min條件下震蕩12h,使樹(shù)脂與料液充分接觸,震蕩結(jié)束后取出抽濾,測(cè)定濾液的蛋白含量,大孔樹(shù)脂吸附能力的計(jì)算如公式(1)。再將過(guò)濾后的大孔樹(shù)脂置于150mL錐形瓶中,加入體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇30mL,在25℃,160r/min條件震蕩12h,取出抽濾,測(cè)定濾液中的蛋白含量。大孔樹(shù)脂解吸能力的計(jì)算如公式(2)。

    1.2.5 DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附能力的測(cè)定 稱(chēng)取10g預(yù)處理樹(shù)脂置于150mL錐形瓶中,向其中加入質(zhì)量濃度 10mg/mL的水解液 30mL,在 25℃,160r/min震蕩7h使樹(shù)脂與料液充分接觸,每0.5h取樣1次,測(cè)定其蛋白質(zhì)含量,計(jì)算吸附率,作DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附曲線。

    1.2.6 DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)解吸能力的測(cè)定 稱(chēng)取10g預(yù)處理樹(shù)脂置于150mL錐形瓶中,向其中加入質(zhì)量濃度 10mg/mL的水解液 30mL,在 25℃,160r/min震蕩6h,待其充分吸附后取出抽濾,再將吸附后的大孔樹(shù)脂重新置于150mL錐形瓶中,加入體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇30mL,每0.5h取樣1次,測(cè)定其蛋白質(zhì)含量,計(jì)算解吸率,作DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)解吸曲線。

    1.2.7 DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝 稱(chēng)取一定量的預(yù)處理樹(shù)脂于錐形瓶中,加入一定量的水解液,在25℃,160r/min震蕩6h,待其充分吸附后取出抽濾,測(cè)定其濾液的蛋白質(zhì)含量,計(jì)算吸附率,分別考察水解液質(zhì)量濃度6、8、10、12、14、16mg/mL和pH2、3、4、5、6、7、8、9對(duì)樹(shù)脂吸附性能的影響。

    稱(chēng)取一定量水解液吸附后的大孔樹(shù)脂于錐形瓶中,加入一定量的洗脫劑,在25℃,160r/min條件震蕩2h,抽濾,測(cè)定濾液中的蛋白質(zhì)含量,計(jì)算解吸率。收集洗脫液并濃縮,冷凍干燥后分別用等體積的去離子水復(fù)溶,測(cè)定氯化物含量和ACE抑制效果,計(jì)算其脫氯率和ACE抑制率,考察不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液對(duì)樹(shù)脂解吸性能的影響。

    1.2.8 DA201-C大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝 在層析柱(3.2cm×100cm)中裝入預(yù)處理好的樹(shù)脂,濕法上柱,讓其自然沉淀得高約87cm,床體積(BV)約700mL的樹(shù)脂固定床。將一定量的水解液流經(jīng)層析柱,吸附完成后用1BV的蒸餾水將未吸附的蛋白以及粘附在樹(shù)脂上的雜質(zhì)沖洗干凈,再將一定量的體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液流經(jīng)層析柱進(jìn)行洗脫,以A280nm≤0.05時(shí)停止洗脫,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥,得到莧籽ACE抑制肽。

    在靜態(tài)純化實(shí)驗(yàn)確定的最適水解液質(zhì)量濃度和pH以及洗脫劑的基礎(chǔ)上,以吸附率或解吸率為指標(biāo),分別考察上樣流速 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL/min、上樣量0.2、0.4、1.0BV、洗脫流速1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL/min、和洗脫體積0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0BV對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附-解吸的影響。

    1.2.9 成分分析 蛋白質(zhì)含量測(cè)定:Folin-酚法;短肽含量測(cè)定:三氯乙酸法[21];氯含量測(cè)定:鉻酸鉀指示劑法GB/T11896-89;ACE抑制率測(cè)定:高效液相色譜法[22]。

    1.2.10 數(shù)據(jù)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次平行實(shí)驗(yàn)的平均值,用Sigma Plot和Excel軟件進(jìn)行圖表處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 分離純化莧籽ACE抑制肽最適大孔樹(shù)脂篩選結(jié)果

    從圖1中可知,6種樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的吸附和解吸性能呈現(xiàn)一定的趨勢(shì),即非極性樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的吸附和解吸能力較強(qiáng),說(shuō)明莧籽ACE抑制肽的疏水性較高。6種大孔樹(shù)脂的吸附率差異不是很大,相比之下,DA201-C的吸附效果稍高于其他型號(hào),達(dá)到73.42%,可能是由于DA201-C樹(shù)脂是一種比表面積較大、非極性樹(shù)脂,其對(duì)疏水性多肽有較強(qiáng)的吸附性,同時(shí)其平均孔徑相對(duì)較小,對(duì)分子量較大的蛋白吸附力差,可以初步達(dá)到分離純化小分子莧籽ACE抑制肽的目的。在體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇為洗脫劑的條件下,DA201-E的解吸率最高,達(dá)71.77%,DA201-C次之。盡管DA201-E有較高的解吸率,但其在吸附的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生難聞的化學(xué)氣味,因此本實(shí)驗(yàn)篩選DA201-C為分離純化莧籽ACE抑制肽的最適大孔樹(shù)脂。

    圖1 6種大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的吸附率和解吸率比較結(jié)果Fig.1 Comparison of adsorption rates and desorption rates of 6 types of macroporous resins

    2.2 DA201-C大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的靜態(tài)吸附曲線

    DA201-C是一種非極性樹(shù)脂,在吸附過(guò)程中,吸附質(zhì)分子的疏水性部分通過(guò)范德華力或氫鍵作用優(yōu)先被吸附在樹(shù)脂的疏水聚合物表面,由于樹(shù)脂表面的結(jié)合位點(diǎn)有限,樹(shù)脂的吸附會(huì)出現(xiàn)飽和現(xiàn)象。從圖2中可以看出,在前3h內(nèi)DA201-C大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的吸附率隨著時(shí)間的增加迅速增加,之后增加率變緩,6h后吸附率趨于穩(wěn)定,這與劉志東[23]報(bào)道的結(jié)果相符。因此選擇6h為后續(xù)靜態(tài)吸附的時(shí)間。

    圖2 DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附曲線Fig.2 Static adsorption curves of DA201-C resin

    2.3 DA201-C大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的靜態(tài)解吸曲線

    有研究表明,大孔樹(shù)脂在吸附過(guò)程中,吸附質(zhì)通常并不進(jìn)入微球相(凝膠相),而是被吸附在微球相表面,因此洗脫過(guò)程一般較快[1]。如圖3所示,相對(duì)于吸附來(lái)說(shuō),解吸達(dá)到平衡所需的時(shí)間較短,屬于快速平衡型。體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇可以比較集中的在大約1h內(nèi)將大部分吸附的多肽洗脫下來(lái)。因此,DA201-C大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽具有良好的吸附和解吸性能。

    圖3 DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)解吸曲線Fig.3 Static elution curves of DA201-C resin

    2.4 DA201-C大孔樹(shù)脂靜態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝

    2.4.1 水解液質(zhì)量濃度對(duì)樹(shù)脂靜態(tài)吸附效果的影響如圖4所示,水解液質(zhì)量濃度較低時(shí),隨著質(zhì)量濃度的增加,樹(shù)脂吸附率增加;水解液的質(zhì)量濃度達(dá)到10mg/mL時(shí),樹(shù)脂的吸附率達(dá)到最大(64.84%);水解液質(zhì)量濃度大于10mg/mL時(shí),樹(shù)脂的吸附率反而降低。可能是由于濃度過(guò)高,樣品中肽分子多,在擴(kuò)散過(guò)程中相互碰撞,阻礙了其向樹(shù)脂的擴(kuò)散速度,導(dǎo)致吸附率下降。因此,水解液的質(zhì)量濃度控制在10mg/mL左右為宜。

    2.4.2 水解液pH對(duì)樹(shù)脂靜態(tài)吸附效果的影響 從圖5中可見(jiàn),pH偏酸性時(shí)樹(shù)脂的吸附效果較好,這可能是由于莧籽ACE抑制肽中疏水性氨基酸的含量較多,而疏水性氨基酸多為酸性氨基酸,因此在酸性環(huán)境下樹(shù)脂的吸附性能更佳。同時(shí)莧籽ACE抑制肽是一類(lèi)兩性分子,pH可以影響其電離狀態(tài),從而改變其靜電引力和形成氫鍵的能力,致使樹(shù)脂的吸附率發(fā)生改變。當(dāng)pH為3~5時(shí),大孔樹(shù)脂的吸附率達(dá)到最大,可能是因?yàn)閜H3~5為莧籽ACE抑制肽的等電點(diǎn),在這個(gè)條件下,ACE抑制肽以分子狀態(tài)存在,能與樹(shù)脂間通過(guò)氫鍵作用結(jié)合,樹(shù)脂對(duì)其吸附作用強(qiáng)[24],并且此時(shí)肽的溶解度最低,最容易被吸附[1]。由于酶解過(guò)程是在堿性條件下完成的,莧籽ACE抑制肽粗提物的pH偏堿性,為了減少調(diào)節(jié)pH而加入的鹽酸的用量,本實(shí)驗(yàn)選擇 pH5為最適的酶解液pH。

    圖4 水解液質(zhì)量濃度對(duì)樹(shù)脂靜態(tài)吸附性能的影響Fig.4 Effect of sample concentration on static adsorption of DA201-C resin

    圖5 水解液pH對(duì)樹(shù)脂靜態(tài)吸附性能的影響Fig.5 Effect of sample pH on static adsorption of DA201-C resin

    2.4.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)脂靜態(tài)解吸效果的影響 大孔樹(shù)脂對(duì)有機(jī)物的吸附作用主要是基于有機(jī)物的疏水基團(tuán)與吸附劑之間的物理作用力,因此大孔樹(shù)脂對(duì)物質(zhì)的吸附力微弱,只要改變體系的親水與疏水平衡,就可以引起被吸附物質(zhì)的解吸。DA201-C是一種非極性樹(shù)脂,根據(jù)“相似相溶”原理,洗脫劑的極性越低,其對(duì)吸附質(zhì)的洗脫能力越強(qiáng)。如圖6所示,不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)莧籽ACE抑制肽的解吸效果差異顯著,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,解吸率增加,體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液的解吸率最高,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到100%時(shí),解吸率較75%時(shí)有所下降,這可能是由于ACE抑制肽中疏水性氨基酸含量較高,其在蒸餾水中溶解性小,而部分相對(duì)分子質(zhì)量較大的多肽在無(wú)水乙醇中的溶解性不好。由于溶液呈電中性,而酶解液中的鹽分主要為氯化鈉,因此可以用脫氯率來(lái)大致反映酶解液的脫鹽效果。從圖6中可以看出5種乙醇溶液均有較高的脫氯率,其中體積分?jǐn)?shù)75%時(shí)脫氯率最高,說(shuō)明DA201-C大孔樹(shù)脂具有降低莧籽ACE抑制肽中鹽分的作用。

    圖6 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)樹(shù)脂靜態(tài)解吸率和脫氯率的影響Fig.6 Effect of ethanol concentration on the static desorption and dechlorination of DA201-C resin

    不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液的極性不同,它們與疏水性的肽段的親和力也不同,從而可以得到疏水性不同的肽段,而肽段的降壓活性與其疏水性密切相關(guān)[25-27]。如圖7所示,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,產(chǎn)物的ACE抑制率呈現(xiàn)先升高后降低的變化,在體積分?jǐn)?shù)為75%時(shí)達(dá)到最大,為53.59%,比未純化的酶解液的ACE抑制率提高了9.13%。因此選擇體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液為最適的洗脫劑。

    圖7 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)洗脫產(chǎn)物ACE抑制率的影響Fig.7 Effect of ethanol concentration on the ACE inhibition ratio of elute of DA201-C resin

    2.5 DA201-C大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)純化莧籽ACE抑制肽工藝

    2.5.1 上樣流速和上樣量對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附效果的影響 上樣流速會(huì)影響溶質(zhì)向樹(shù)脂表面擴(kuò)散,從而影響樹(shù)脂固定床動(dòng)態(tài)吸附效率,如圖8所示,隨著上樣流速的增加,樹(shù)脂吸附率下降,可能是由于流速過(guò)快,溶液在樹(shù)脂內(nèi)停留時(shí)間縮短,固定相和流動(dòng)相沒(méi)有充分接觸,導(dǎo)致流動(dòng)相中的肽分子還未與樹(shù)脂內(nèi)表面接觸就已提前穿透流出,致使吸附率降低。當(dāng)上樣量為0.2BV時(shí),莧籽ACE抑制肽幾乎完全被吸附,吸附率達(dá)95%左右,隨著上樣量的增加,吸附率下降,但是考慮到充分利用樹(shù)脂、提高純化效率,本實(shí)驗(yàn)選擇上樣量1BV,上樣流速6mL/min。

    2.5.2 洗脫流速對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)解吸效果的影響 不同的洗脫流速對(duì)解吸效果有一定的影響(見(jiàn)圖9),以5mL/min的流速進(jìn)行洗脫得到的解吸率最高,所以,本實(shí)驗(yàn)采用5mL/min的洗脫流速。

    圖8 流速和上樣量對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附性能的影響Fig.8 Effect of flow rate and hydrolysate quantity on the dynamic adsorption of DA201-C resin

    圖9 洗脫流速對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)解吸性能的影響Fig.9 Effect of elution flow rate on dynamic desorption of DA201-C resin

    2.5.3 洗脫體積對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)解吸效果的影響 從圖10可見(jiàn),體積分?jǐn)?shù)75%乙醇的洗脫能力與其用量呈正相關(guān),用量越大,解吸率越大,在前2.5BV時(shí),解吸率隨著洗脫體積的增加,迅速增加,4.5BV后解吸率的變化緩慢。從節(jié)約成本方面考慮,洗脫體積以4.5~5.0BV為宜。

    圖10 洗脫體積對(duì)樹(shù)脂動(dòng)態(tài)解吸性能的影響Fig.10 Effect of the effluent volume on dynamic desorption of DA201-C resin

    2.6 DA201-C大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽的分離效果

    由表2可以得出,經(jīng)過(guò)樹(shù)脂純化后,莧籽ACE抑制肽的蛋白純度為89.47%(含水量9.33%),脫鹽率為88.86%,短肽含量提高了20.96%,ACE抑制活性提高了27.91%。

    表2 DA201-C大孔樹(shù)脂分離效果(%)Table 2 The purified effect of DA201-C resin

    3 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)采用大孔樹(shù)脂對(duì)莧籽ACE抑制肽進(jìn)行吸附-解吸實(shí)驗(yàn),選出性能最佳的樹(shù)脂,并對(duì)其純化工藝進(jìn)行優(yōu)化。采用靜態(tài)吸附-解吸實(shí)驗(yàn),對(duì)6種不同極性的樹(shù)脂進(jìn)行篩選,確定DA201-C樹(shù)脂為純化莧籽ACE抑制肽的理想樹(shù)脂,并考慮水解液質(zhì)量濃度和pH對(duì)DA201-C樹(shù)脂靜態(tài)吸附性能的影響以及不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)該樹(shù)脂解吸性能的影響,確定水解液質(zhì)量濃度10mg/mL,pH5時(shí),樹(shù)脂的靜態(tài)吸附率最大,體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇對(duì)樹(shù)脂的解吸率最高,洗脫產(chǎn)物的脫氯率和ACE抑制率均為最大。在此基礎(chǔ)上,采用動(dòng)態(tài)吸附-解吸實(shí)驗(yàn),考察上樣流速、上樣量、洗脫流速和洗脫體積對(duì)樹(shù)脂純化莧籽ACE抑制肽工藝的影響,確定最優(yōu)的條件為:上樣流速6mL/min,上樣量1BV,洗脫流速5mL/min,洗脫體積5BV,此時(shí)DA201-C樹(shù)脂的吸附率為83.69%,解吸率為98.69%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,莧籽ACE抑制肽經(jīng)DA201-C大孔樹(shù)脂純化后,蛋白純度含量由85.5%提高到89.47%(含水量9.33%),脫鹽率為88.86%,短肽含量提高了20.96%,ACE抑制活性提高了27.91%,因此DA201-C大孔樹(shù)脂可以較好的脫除莧籽ACE抑制肽中無(wú)機(jī)鹽等雜質(zhì),提高其純度和生理活性。

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