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    兔出血癥不同佐劑滅活疫苗的制備及免疫效果比較

    2013-03-10 00:23:32葉青華
    四川畜牧獸醫(yī) 2013年3期
    關(guān)鍵詞:活苗蜂膠清液

    葉青華

    (成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院,四川 成都 611130)

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)用兔 成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院實(shí)訓(xùn)場(chǎng)飼養(yǎng)的未經(jīng)兔出血癥疫苗免疫的商品兔,體重2~2.5kg。

    1.2 種毒 RHDV地方毒株。采取兔出血癥病死兔的肝、脾組織,去除周圍的筋膜,在滅菌生理鹽水中清洗數(shù)次,加適量PBS液,于組織勻漿機(jī)中完全搗碎,然后按1∶5比例加入滅菌PBS液,經(jīng)37℃~-80℃反復(fù)凍融3次。1500r/min離心10min,取上清液,再加入1000IU/mL的青、鏈霉素,37℃感作2h。將上述處理好的病料,感染未經(jīng)免疫的敏感兔,使其發(fā)病。取發(fā)病兔的肝組織加滅菌PBS液搗碎,1500r/min離心10min,取上清液,HA滴度在1∶1280以上即可備用。

    1.3 佐劑 蜂膠,氫氧化鋁膠。

    1.4 兔出血癥不同佐劑滅活苗的制備

    1.4.1 兔出血癥組織滅活苗的制備 無(wú)菌采取人工感染發(fā)病后的兔肝、脾,按1∶10比例加入滅菌PBS液搗碎,1500r/min離心10min,在上清液中加入0.4%的甲醛,放在37℃搖床中滅活48h。

    1.4.2 兔出血癥蜂膠佐劑滅活苗的制備 取市場(chǎng)上購(gòu)置的優(yōu)質(zhì)蜂膠搗成細(xì)末,按1∶4的比例加入95%的食用酒精,置23℃水浴24 h,其間不斷搖勻,取出冷至室溫,3 800 r/min離心30 min,取上清液即為蜂膠乙醇浸液。將1.4.1制備的兔出血癥組織滅活苗與蜂膠乙醇浸液按1∶3比例混合,勻漿,4℃下作用24 h即成蜂膠佐劑疫苗。

    1.4.3 兔出血癥鋁膠佐劑滅活苗的制備 用去離子水將三氯化鋁配成8%的溶液,加溫至56~60℃;再用去離子水將氫氧化鈉配成4%的溶液,緩慢加入三氯化鋁溶液中,調(diào)節(jié)pH至5.6~6.0,再加溫10min,分裝瓶中,121℃高壓蒸汽滅菌30min,即成鋁膠佐劑。將1.4.1制備的兔出血癥組織滅活苗與鋁膠佐劑按1∶1比例混勻,即成鋁膠佐劑滅活苗。

    1.4.4 疫苗檢驗(yàn) 按常規(guī)方法檢查其物理性狀,并進(jìn)行菌檢及安全性檢驗(yàn)。

    1.5 免疫接種 選取未經(jīng)兔出血癥疫苗免疫的試驗(yàn)兔16只,隨機(jī)分成4組,每組4只,隔離飼養(yǎng)。1~3組分別于頸部皮下注射兔出血癥組織滅活苗、蜂膠佐劑苗、鋁膠佐劑苗1mL,第4組于頸部皮下注射滅菌生理鹽水1mL。接種后7、14、45、85、145d進(jìn)行耳靜脈采血,用微量法作血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)抗體效價(jià)。

    1.6 攻毒保護(hù)試驗(yàn) 攻毒病料制備:將兔出血癥病料加入少量PBS液在組織搗碎機(jī)中充分磨碎,然后制成1∶5懸液,經(jīng)37℃~-80℃反復(fù)凍融3次。1500r/min離心10 min,取上清液,內(nèi)加1 000 IU/mL的青、鏈霉素,37℃感作2h即成。

    試驗(yàn)兔全部攻毒。分別在疫苗接種后7、15、50、90、150d進(jìn)行攻毒試驗(yàn),每只肌注病料液1mL。

    2 結(jié)果

    2.1 抗體檢測(cè) 4組試驗(yàn)兔全部進(jìn)行抗體檢測(cè),其結(jié)果見表1。

    2.2 攻毒保護(hù)試驗(yàn) 非免疫對(duì)照組試驗(yàn)兔48h內(nèi)全部死亡,剖檢均呈現(xiàn)出典型的兔出血癥癥狀。免疫組攻毒結(jié)果詳見表2。

    表1 免疫兔血清抗體檢測(cè)結(jié)果

    表2 攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果

    3 小結(jié)與討論

    3.1 3種疫苗均于免疫后7d產(chǎn)生抗體,此時(shí),蜂膠佐劑苗的抗體滴度最高,鋁膠佐劑苗的抗體滴度最低。14d后,佐劑苗的抗體滴度均高于組織滅活苗的抗體滴度,其中以蜂膠佐劑苗的抗體滴度最高。45d后抗體滴度均有所下降,但以蜂膠佐劑苗的抗體滴度下降最慢。據(jù)報(bào)道,蜂膠佐劑苗在免疫30d后抗體滴度高達(dá)211,幾乎是組織滅活苗抗體滴度的2倍,且還有上升趨勢(shì)。表明蜂膠佐劑滅活苗的抗體滴度高于其他2種疫苗,這與蜂膠既能促進(jìn)機(jī)體對(duì)抗原產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng),又能啟動(dòng)機(jī)體非特異性免疫反應(yīng)有關(guān)。由此可見,蜂膠佐劑滅活苗吸收快,產(chǎn)生效價(jià)高而持久,是值得推廣的新型疫苗。組織滅活苗中的抗原成分在短時(shí)間內(nèi)即能被組織大量吸收,產(chǎn)生較高水平的抗體。鋁膠佐劑滅活苗由于抗原成分釋放緩慢,產(chǎn)生高水平抗體所需的時(shí)間較長(zhǎng)。

    3.2 從攻毒保護(hù)試驗(yàn)來(lái)看,3種疫苗均能有效抵抗兔出血癥強(qiáng)毒的攻擊。免疫后7d,鋁膠佐劑滅活苗的抗體滴度最低,為26.5,但攻毒后試驗(yàn)兔均能成活,而非免疫對(duì)照組全部死亡,說(shuō)明26.5抗體滴度已能有效抵抗兔出血癥強(qiáng)毒的攻擊。免疫后150d攻毒,免疫組試驗(yàn)兔雖有不同程度的死亡,但以組織滅活苗組的死亡率最高,達(dá)75%,蜂膠佐劑滅活苗組死亡率最低,達(dá)25%。表明組織滅活苗的免疫期較佐劑疫苗短,而蜂膠佐劑滅活苗的免疫期較長(zhǎng)。據(jù)報(bào)道,兔出血癥滅活苗的免疫期為4~6個(gè)月,合理攻毒試驗(yàn)應(yīng)在免疫后10d內(nèi)或4個(gè)月后,這樣才能更好地看出不同佐劑疫苗在保護(hù)率方面的差異。

    [1]曾群輝,張冰,陳明勇,等.牦牛ETEC滅活疫苗的研制及免疫效力試驗(yàn)[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2001,23(3):197-199.

    [2]寧康健,王慧,楊靖松,等.兔瘟蜂膠組織滅活苗的研制及免疫效果觀察[J].安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào),2003,17(2):112-114.

    [3] 沈志強(qiáng).蜂膠及其在家畜傳染病上的應(yīng)用與前瞻[J].中國(guó)畜禽傳染病,1992,(4):60-61.

    [4]楊增岐,趙余放,劉長(zhǎng)富,等.兔瘟蜂膠佐劑苗對(duì)家兔細(xì)胞免疫水平的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,1997,27(6):21-22.

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