貴陽地區(qū)1 143例孕婦地中海貧血篩查及基因檢測結(jié)果分析＊

馬星衛(wèi)，許 吟，戴 薇，李貴芳，劉興梅，陳銘希，蘇 莉，黃盛文△

（貴州省人民醫(yī)院：1.產(chǎn)科；2.檢驗科，貴陽550002）

地中海貧血（簡稱地貧）是一類由于珠蛋白合成障礙而引起的慢性溶血性疾病。根據(jù)合成障礙的珠蛋白類型，地貧主要分為α-地貧和β-地貧。據(jù)估計，全球約有1.7%的人是α-地貧或β-地貧基因攜帶者，每10 000出生活嬰就有4.4個地貧患者［1］。迄今，對地貧尚無理想的治療方法，開展產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前基因診斷，防止新的受累胎兒出生，仍是目前控制地貧發(fā)生最為有效的措施［2-3］。為了解貴陽地區(qū)孕婦人群的地貧發(fā)生情況，并探討地貧產(chǎn)前篩查的臨床意義，作者對本院1 143例孕婦產(chǎn)前地貧篩查和基因診斷的結(jié)果進行分析報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 2010年6月至2012年3月在本院產(chǎn)科門診進行孕期保健的孕婦1 143例，均為貴陽戶籍，年齡19～41歲，平均（28.3±3.8）歲。

1.2 篩查方法 采用紅細胞指數(shù)分析結(jié)合血紅蛋白電泳檢測，篩查地貧表型陽性的孕婦。如MCV＜82fL和／或MCH＜27pg，列為重點篩查對象。再按血紅蛋白電泳結(jié)果進行表型分析，如 HbA2≥3.5%，HbF正?；蛟龈?，擬診為β-地貧；如HbA2≤2.5%，擬診為α-地貧；如 HbA2在2.5%～3.5%之間，擬診為α-地貧或β-地貧，或α復(fù)合β-地貧，統(tǒng)稱為α／β-地貧。

1.3 基因診斷 對地貧表型陽性的孕婦，抽取外周靜脈血2 mL，EDTA-Na2抗凝，按試劑盒操作說明提取基因組DNA，進一步做基因檢測以明確基因型。（1）α-地貧基因診斷：應(yīng)用跨越斷裂點聚合酶鏈反應(yīng)（Gap-PCR）檢測--SEA、-α4.2和-α3.73種常見α-珠蛋白基因缺失突變，應(yīng)用反向點雜交（reverse dotblot，RDB）檢測αCS、αQS和αWS3種常見的α-珠蛋白基因點突變。（2）β-地貧基因診斷：應(yīng)用RDB檢測中國人8種常見和9種少見的β-珠蛋白基因點突變，依次為CD41-42（-TCTT）、IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD71-72（＋A）、CD17（A→T）、CD26（G→A）、-28（A→G）、-29（A→G）、CD43（G→T）、CD31（-C）、CD14-15（＋C）、Int（T→G）、CD27-28（＋C）、IVS-Ⅰ-1（G→T）、IVS-Ⅰ-5（G→C）、-32（C→A）、-30（T→C）、CAP＋40―＋43（-AAAC）。PCR擴增儀為E-CyclerTM96PCR儀，試劑購自深圳益生堂生物企業(yè)有限公司，具體操作步驟按說明書進行。

2 結(jié) 果

2.1 篩查結(jié)果 1 143例孕婦經(jīng)MCV和MCH篩查表型陽性68例（5.95%）。經(jīng)血紅蛋白電泳分析，擬診為α-地貧19例（1.66%），擬診為β-地貧41例（3.59%），擬診為α／β-地貧8例（0.70%），見表1。另外，篩出異常血紅蛋白2例，分別是HbJ和HbG各1例。

表1 1 143例孕婦地貧篩查情況

2.2 基因診斷 68例地貧表型陽性的孕婦經(jīng)基因檢測，有63例（5.51%）確診為地貧，確診率為92.65%，其中表型為β-地貧的確診率最高（97.62%）。8例表型為α／β-地貧的孕婦，有6例均確診為α-地貧，未檢測出α復(fù)合β-地貧，見表1。63例地貧孕婦的基因型分布見表2，其中α-地貧23例（2.01%），β-地貧40例（3.50%）。23例α-地貧中，靜止性8例，標(biāo)準(zhǔn)型15例，基因型以--SEA／αα最多，占60.9%。40例β-地貧均為輕型，基因型以CD17／N最多，占45.0%，其次是CD41-42／N和IVS-Ⅱ-654／N，分別占27.5%和15.0%。

表2 63例地貧孕婦基因型分布情況

3 討 論

中國南方各省是地貧的高發(fā)區(qū)，其中廣東、廣西兩省的α-和β-地貧總發(fā)生率分別為11.07%［4］和25.30%［5］。貴州也屬地貧的高發(fā)區(qū)，該地區(qū)β-地貧的發(fā)生率已基本清楚，不同民族的發(fā)生率為2.66%～7.85%［6-8］，與本調(diào)查結(jié)果（3.50%）相吻合。目前，還沒有關(guān)于貴州省α-地貧發(fā)生率的大樣本調(diào)查結(jié)果。本課題組前期關(guān)于貴陽地區(qū)新生兒α-地貧發(fā)生率的初步調(diào)查結(jié)果為2.63%［9］，略高于本研究的結(jié)果（2.01%），這可能與調(diào)查的人群不同有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，貴陽地區(qū)α-地貧基因型以缺失型為主，其中--SEA／αα基因型占60.9%，與國內(nèi)其他地區(qū)的α-地貧基因突變類型類似［10-12］。本組數(shù)據(jù)表明，貴陽地區(qū)的β-地貧基因突變類型以CD17（A→T）最多，其次是CD41-42（-TCTT）和IVS-Ⅱ-654（C→T），與國內(nèi)其他地區(qū)的β-地貧基因突變類型明顯不同。廣東［4，12］、廣西［13］β-地貧基因突變類型以 CD41-42（-TCTT）最多，在海南黎族人中，β-地貧基因突變幾乎全是CD41-42（-TCTT）［14］。這表明即使是在國內(nèi)，不同地域和人群的β-地貧基因突變譜的構(gòu)成也不盡相同。

本組調(diào)查人群中的地貧表型陽性率為5.95%，確診率為92.65%，說明紅細胞指數(shù)分析結(jié)合血紅蛋白電泳檢測是地貧篩查的有效方法，尤其是MCV、MCH和HbA2定量檢測是β-地貧篩查的可靠血液學(xué)指標(biāo)。本組中有5例表型陽性的孕婦未檢測出相應(yīng)的珠蛋白基因突變位點，這可能是缺鐵性貧血或存在罕見突變類型所致。因此，對于這類孕婦需要了解是否存在缺鐵性貧血，同時應(yīng)進一步作珠蛋白基因序列分析，排除罕見突變類型。

雖然目前還沒有治療地貧的有效方法，但地貧是可以預(yù)防的遺傳性疾病。進行產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前基因診斷，完全可以避免中、重型地貧患兒的出生。自20世紀(jì)70年代開始，塞浦路斯政府強制實施婚前和產(chǎn)前篩查，已使重型地貧患兒的出生率幾乎降為零。在中國的廣東、廣西地區(qū)，也在廣泛開展婚前和產(chǎn)前篩查，對減少重型地貧患兒的出生起到了積極作用。貴陽地區(qū)作為地貧高發(fā)區(qū)，在地貧的預(yù)防工作方面還處于起步階段，應(yīng)盡快建立地貧產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷網(wǎng)絡(luò)，對孕婦人群開展以紅細胞指數(shù)分析和血紅蛋白電泳技術(shù)為主的產(chǎn)前篩查工作，表型陽性的樣本交由有條件的醫(yī)院進一步作基因診斷和產(chǎn)前診斷，避免重型地貧患兒的出生。

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