HPLC法測定心葉紫金牛中巖白菜素的含量

劉 元宋志釗

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西 南寧 530022

HPLC法測定心葉紫金牛中巖白菜素的含量

劉 元1，2宋志釗1，2

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西 南寧 530022

目的：建立心葉紫金牛中巖白菜素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以AQ－C18色譜柱為分離柱，以甲醇－水（22：78）為流動相，285nm為檢測波長，柱溫為室溫。結果：巖白菜素在0.05～0.80μg范圍內，峰面積與其濃度呈良好線性關系（r＝0.9996），平均回收率為102.7%，RSD為2.37%（n＝6）。結論：該方法簡便、準確、重復性好，可作為該藥材含量測定方法。

心葉紫金牛；巖白菜素；HPLC

心葉紫金牛，又名走馬風、紅鋪地毯，為紫金?？谱辖鹋僦参镄娜~紫金牛（Ardisia maclurei Merr.）的全株，是瑤藥 “七十二風”中的走馬風［1］，具有鎮(zhèn)咳祛痰，活血調經，消腫止痛之功效，用于治療肺結核，慢性支氣管炎，咳嗽氣喘，月經不調，痛經，產后惡露不盡，產后體弱，風濕疼痛，跌打損傷等。目前心葉紫金牛尚未有法定標準，對其有效成分及藥理學研究更是尚未涉及，本研究采用高效液相色譜法測定心葉紫金牛中巖白菜素的含量，為心葉紫金牛的質量控制提供了檢測依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC－20ATVP高效液相色譜儀，SPD－20AVP紫外檢測儀；威瑪龍色譜工作站；AQ－C18（4.6mm× 250mm，5μm）；KQ－100VDB雙頻數(shù)控超聲清洗儀。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。巖白菜素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號1532－200202）。心葉紫金牛藥材6批：20110428（靖西）、20110527（平南）、20110612（上林）、20110819（金秀）、20110923（昭平），由本院嚴克儉同志采集；20110721，購自金秀縣藥材市場。以上樣品均由本院中藥所鑒定。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：AQ－C18色譜柱（4.6mm× 250mm，5mm）；檢測波長為285nm；流動相：甲醇－水（22：78）；流速：1.0mL/min；柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按巖白菜素峰計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取巖白菜素對照品10.0mg，置50mL量瓶中用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成200μg/mL對照品溶液，備用。精密吸取上述對照品溶液1.0mL，置10mL棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過，即得（20.0μg/mL）。

2.3 供試品溶液的制備 取本品藥材粉末（過40目篩）0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相25mL，稱定重量，超聲提取30min（90W，45KHz），放冷，再稱定重量，用流動相補足缺失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.4 標準曲線及線性范圍考察 精密稱取巖白菜素對照品10.0mg，置50mL量瓶中用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成200μg/mL對照品溶液，備用。分別精密吸取200μg/mL巖白菜素對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，分別置10m l量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣10μL，測定。以巖白菜素對照品進樣量μg為橫坐標 （X），峰面積積分值為縱坐標 （Y）繪制標準曲線，得回歸方程為：Y＝990672X＋6554，r＝0.9996。結果表明：巖白菜素進樣量在0.05～0.80μg之間與峰面積積分值線性關系。

2.5 精密度試驗 分別吸取同一供試品溶液，進樣6次，依次測定，即得。測得供試品RSD為1.15%。

2.6 重復性試驗 取同一批號（20110721）樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進樣，測定，即得。結果測得巖白菜素含量為1.96mg/g，RSD＝1.60%（n＝6）。表明該方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液分別于0、4、8、12、16h進行測定。結果供試品中巖白菜素含量的RSD為1.70%，表明供試品溶液在16h內保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗 取已測知含量（1.96mg/g，批號20110721）的供試品0.25g，精密稱定，精密加入巖白菜素對照品溶液（200μg/m L）2.5m L，精密加入流動相22.5m L，按供試液制備項下的方法制備。結果巖白菜素平均回收率為99.0%，RSD為2.37%（n＝6），結果見表1。

2.9 樣品測定 按供試液的制備及檢測方法，測定6批心葉紫金牛藥材中巖白菜素含量，結果見表2。巖白菜素含量（mg/g）在0.88～2.31之間。

表1 加樣回收試驗測量結果（n＝6）

表2 6批心葉紫金牛藥材中巖白菜素測量結果

3 討論

3.1 心葉紫金牛的化學成分未見報導，但同科同屬植物翼莖白粉藤中含有巖白菜素［2］，對心葉紫金牛中巖白菜素的含量測定方法進行初步研究，經過預實驗，多批心葉紫金牛藥材中均含有巖白菜素。因此探索心葉紫金牛中指標成分巖白菜素的含量測定方法，可作為控制本品質量標準的指標之一。

3.2 對巖白菜素對照品溶液進行紫外掃描，結果其在285nm處有最大吸收，故確定檢測波長為285nm。參照《中國藥典》2010年版一部里有關巖白菜素含量測定方法，以甲醇－水為流動相，考察多個比例，最后確定甲醇－水（22：78）的比例較為適合。

3.3 采用超聲處理30min，加熱回流1h，索氏提取2h進行提取方法考察，三者結果相差不大，但超聲提取更簡便、快捷，故采用超聲提取法。采用甲醇、水、流動相作提取溶劑進行考察，用水提取所得含量最低，甲醇、流動相提取所得含量較高，但是甲醇提取樣品中巖白菜素峰形差，故采用流動相作為提取溶劑。以超聲提取15、30、45min進行提取時間考察，超聲提取15min，測得結果較低，超聲提取30～45min，兩者無明顯差別，故超聲提取時間定為30min。

［1］戴斌，李釗東，丘翠嫦，等. “虎牛鉆風”類傳統(tǒng)瑤藥的調查研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，1998，31（2）：28－34.

［2］葉君勇，徐燕云，吳曉梅.紫金牛屬植物巖白菜素研究現(xiàn)狀及開發(fā)利用［J］.安徽農學通報，2009，15（21）：160－162.

Determination of Bergenin in Ardisia Maclurei by HPLC

LIU Yuan1，2，SONG Zhi－zhao1，2
1.Guangxi Institute of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Scince，Nanning，Guangxi530022；2.Guangxi Key Laboratory of traditional Chinesemedicine quality standards，Nanning，Guangxi530022

Objective：To assay the content of Bergenin in Ardisia Maclurei by HPLC.Method：The AQ－C18（4.6mm× 250mm，5μm）column was used，the mobile phase consisted of Methanol－water（22：78），the detection wave length was 285nm and the column temperature was room temperature.Resuilts：Linearity of Quercitr was good at0.05～0.80μg（r＝0.9996）.The average recovery of buddleodide was99.0%with RSD less than 2.37%（n＝6）.Conclution：The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Bergenin in Ardisia Maclurei.

Ardisia Maclurei；Bergenin；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）14－0022－02

2013.05.08）

廣西科技攻關項目（桂科攻11107010－3－4）。

劉元，女，高級實驗師，從事中藥藥理學研究與新藥開發(fā)。E－mail：liuyuan0821＠vip.163.com