妊娠期高血壓疾病患者胎盤中MMP-9、TIMP-1和EMMPRIN的表達(dá)及意義

徐 虹，劉 芳

（1.浙江省紹興縣中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江紹興312030；2.浙江省紹興市人民醫(yī)院病理科，浙江紹興312000）

·論 著·

妊娠期高血壓疾病患者胎盤中MMP-9、TIMP-1和EMMPRIN的表達(dá)及意義

徐 虹1，劉 芳2

（1.浙江省紹興縣中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江紹興312030；2.浙江省紹興市人民醫(yī)院病理科，浙江紹興312000）

目的研究妊娠期高血壓疾病患者胎盤中基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP）1以及細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑（extracellularmatrixmetalloproteinase inducer，EMMPRIN）的表達(dá)，探討其與疾病的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)SP法和二步法對(duì)40例正常足月妊娠婦女以及55例妊娠期高血壓疾病患者（其中妊娠期高血壓患者15例，輕度子癇前期患者25例，重度子癇前期患者15例）胎盤中MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果MMP-9的表達(dá)，輕度子癇前期組明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組低于高血壓組，輕度子癇前期組低于正常妊娠組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TIMP-1的表達(dá)，子癇前期組高于正常妊娠組和高血壓組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。EMMPRIN的表達(dá)，子癇前期組明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組及高血壓組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論妊娠期高血壓疾病患者胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-9、EMMPRIN表達(dá)下降，TIMP-1表達(dá)升高，且其表達(dá)水平的高低可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

高血壓，妊娠性；胎盤；基質(zhì)金屬蛋白酶9

妊娠高血壓疾病是妊娠期特發(fā)的疾病，嚴(yán)重危及母嬰安全，其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不明確。近年來研究［1］認(rèn)為，妊娠期高血壓疾病與胎盤生理性血管重鑄障礙有關(guān)。在胎盤的形成過程中，降解細(xì)胞外基質(zhì)是滋養(yǎng)細(xì)胞向母體子宮內(nèi)膜有節(jié)制的浸潤的重要環(huán)節(jié)，降解細(xì)胞外基質(zhì)的一類重要酶便是基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）。本研究通過檢測(cè)MMP-9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of Matrix metalloproteinase，TIMP-1）和細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN，又稱CD147）在正常妊娠和妊娠高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)，探討這3種因子與該疾病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2010年8月—2011年8月浙江省紹興縣中心醫(yī)院住院行剖宮產(chǎn)術(shù)的妊娠高血壓疾病患者55例（診斷標(biāo)準(zhǔn)按照人民衛(wèi)生出版社出版的第7版《婦產(chǎn)科學(xué)》［2］），其中，妊娠高血壓患者15例，輕度子癇前期患者25例，重度子癇前期患者15例。同時(shí)收集同期住院的正常孕婦40例為對(duì)照組。2組孕婦均為初產(chǎn)、單胎，其年齡及平均孕周等一般情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 標(biāo)本采集：胎盤娩出后，立即取胎盤母面兩母體葉之間組織約1.5cm3大小，避開出血及鈣化區(qū)，立即置于福爾馬林液中固定，石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)：采用免疫組織化學(xué)二步法測(cè)定胎

盤組織中MMP-9、TIMP-1的表達(dá)，鼠抗人MMP-9免疫組織化學(xué)單克隆抗體和兔抗人TIMP-1免疫組織化學(xué)多克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。采用SP法檢測(cè)EMMPRIN，鼠抗人EMMPRIN免疫組織化學(xué)單克隆抗體購自SANTA CRUZ生物技術(shù)公司。

1.4 結(jié)果判定：在顯微鏡下全面觀察每張切片，以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，并攝影保存，利用Image pro-plus6.0圖像分析軟件，進(jìn)行圖像分析。以胎盤組織中滋養(yǎng)細(xì)胞作為目標(biāo)染色區(qū)域，測(cè)定這個(gè)區(qū)域的累積吸光度和這個(gè)區(qū)域的面積，兩者相除，即得平均吸光度。將平均吸光度作為評(píng)估蛋白表達(dá)的強(qiáng)度。每例對(duì)象選1張切片，每張切片隨機(jī)選3個(gè)視野，每個(gè)視野測(cè)定3次，取均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以±s表示，分別采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達(dá)，主要分布在滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)血管壁中。MMP-9的表達(dá)，子癇前期組明顯低于對(duì)照組，重度子癇前期組低于高血壓組，輕度子癇前期組低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TIMP-1的表達(dá)水平，子癇前期組高于對(duì)照組和高血壓組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。EMMPRIN的表達(dá)水平，子癇前期組明顯低于對(duì)照組，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組及高血壓組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組產(chǎn)婦胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達(dá)水平Table 1 The expression of MMP-9，TIMP-1 and EMMPRIN in placenta of each group（xˉ±s）

3 討 論

妊娠高血壓疾病的病因研究，近來多認(rèn)為系胎盤源性，繼發(fā)于胎盤著床過淺，即滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕過淺導(dǎo)致的胎盤灌注不足、缺血［3］。人類胎盤的形成是滋養(yǎng)細(xì)胞黏附于蛻膜化的子宮內(nèi)膜，與子宮螺旋小動(dòng)脈接觸，繼而侵入血管腔，分化并替換血管內(nèi)皮細(xì)胞，促成血管低阻高流量的形態(tài)變化，從而保證胎兒的營養(yǎng)需要，即所謂的“螺旋小動(dòng)脈生理重鑄”。有研究［3］表明，妊娠高血壓疾病患者螺旋動(dòng)脈生理變化僅限于動(dòng)脈的蛻膜段，30%～50%胎盤蛻膜段螺旋動(dòng)脈內(nèi)甚至沒有滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入，由此致子宮動(dòng)脈管徑較小，胎盤灌注不足，從而發(fā)?。?］。有學(xué)者［5］認(rèn)為正常妊娠有賴于促進(jìn)侵蝕性基因和抑制侵蝕性基因?qū)ψ甜B(yǎng)細(xì)胞的調(diào)控平衡，如果平衡被打破，則導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕能力下降，子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄障礙，胎盤缺血缺氧，最后導(dǎo)致妊娠高血壓疾病。

組織或細(xì)胞的侵蝕性主要表現(xiàn)為降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力大小，MMP是一組結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，至少由20種能降解細(xì)胞外基質(zhì)的酶類組成。它幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分，如膠原蛋白、蛋白多糖、纖維結(jié)合蛋白等。MMP-9是MMP家族中的重要一員，它主要參與降解Ⅳ型膠原，而Ⅳ型膠原是細(xì)胞外基質(zhì)最主要的成分，所以，MMP-9是常被用來作為組織細(xì)胞侵蝕性的標(biāo)志物之一。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP-9在子癇前期組的表達(dá)明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組的表達(dá)明顯低于高血壓組，這表明妊娠期高血壓疾病患者胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-9表達(dá)下降，其表達(dá)的高低還可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

TIMP是近年來發(fā)現(xiàn)的MMP的天然抑制劑。迄今發(fā)現(xiàn)有TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4共4種。TIMP-1與MMP-9有很強(qiáng)的親和力，它能與MMP-9以1∶1的比例形成復(fù)合物，從而抑制其活性。最早的Kolben等［6］用 ELISA法檢測(cè)胎盤提取液中TIMP-1含量明顯高于正常孕婦。本研究子癇前期組TIMP-1的表達(dá)水平高于正常妊娠組，這與國內(nèi)張弘等［7］的研究相一致，表明妊娠期高血壓疾病患者胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞TIMP-1表達(dá)升高。

EMMPRIN則是一類屬于免疫球蛋白的超家族跨膜糖蛋白，它是一種多功能蛋白，不僅能上調(diào)MMP的表達(dá)，還能促進(jìn)血管生長，參與免疫調(diào)節(jié)和組織重建等［8］。本研究中EMMPRIN在子癇前期組的表達(dá)明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組的表達(dá)低于高血壓組，這表明妊娠高血壓疾病患者胎盤中滋養(yǎng)細(xì)胞EMMPRIN表達(dá)下降，其表達(dá)的高低可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

綜上所述，妊娠高血壓疾病的發(fā)生可能與滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕性相關(guān)蛋白MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達(dá)水平高低有關(guān)，而且表達(dá)水平的高低可能與病情的嚴(yán)重程度有關(guān)。

［1］林其德.妊娠高血壓綜合征病因?qū)W研究進(jìn)展和展望［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2003，38（8）：471-473.

［2］樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：92-99.

［3］GALLERY ED，CAMPBELL S，ILKOVSKI B，et al.A novel in vitro co-culture system for the study of maternal decidual endothelial cell-trophoblast interaction in human pregnancy［J］.Br JObstet Gynaecol，2001，108（6）：651-653.

［4］MERVIEL P，EVAIN-BRION D，CHALLIER JC，et al.The molecular basis of embryo implantation in humans［J］.Zentralbl Gynakol，2001，123（6）：328-329.

［5］DE JAGER CA，LINTON EA，SPYROPOULOU I，et al.Matrix metalloprotease-9，placental syncytiotrophoblast and the endothelial dysfunction of pre-eclampsia［J］.Placenta，2003，24（1）：84-91.

［6］KOLBEN M，LOPENS A，BLASER J，et al.Proteases and their inhibitors are indicative in gestational disease［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，1996，68（1/2）：59-65.

［7］張弘，林其德，喬寵.子癇前期患者滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤相關(guān)基因mRNA及蛋白表達(dá)的研究［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2006，41（8）：509-513.

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（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION OF MATRIX METALLOPROTEINASE 9，TISSUE INHIBITOR OF MATRIX METALLOPROTEINASE 1 AND EXTRACELLULAR MATRIX METALLOPROTEINASE INDUCER IN PLACENTA W ITH HYPERTENSIVE DISORDER COMPLICATING PREGNANCY

XU Hong1，LIU Fang2
（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Shaoxing County Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China；2.Department of Pathology，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

Objective To study the expression and significance of matrix metalloproteinase（MMP）-9，tissue inhibitor of matrix metalloproteinase（TIMP）-1 and extracellular matrix metalloproteinase inducer（EMMPRIN）in placenta with hypertensive disorder complicating pregnancy.M ethods Immunohistochemical method was used to detect the expression of MMP-9，TIMP-1 and EMMPRIN in placenta from 40 cases normal term pregnancy women and 55 cases of pregnancy women with hypertensive disorder complicating pregnancy（including 15 cases of pregnancy women with hypertension，25 cases of pregnancy women withmild preeclampsia and 15 cases of pregnancy women with severe preeclampsia）.Results The Expression of MMP-9 in placenta of preeclampsia was significantly lower than that in normal term pregnancy，which in severe preeclampsia group was significantly lower than in hypertension group，and in mild preeclampsia group was significantly lower than in the normal group（P＜0.05）.Expression of TIMP-1 in placenta of preeclampsia was significantly higher than normal term

hypertension，pregnancy-induced；placenta；matrixmetalloproteinase 9

R714.246

A

1007-3205（2013）03-0284-03

2012-07-31；

2012-08-21

徐虹（1976-），女，浙江紹興人，浙江省紹興縣中心醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事婦產(chǎn)科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.03.013

pregnancy and hypertension group（P＜0.05）.Expression of EMMPRIN in placenta of preeclampsia was significantly lower than that in normal term pregnancy，which in severe preeclampsia group was significantly lower than that in mild preeclampsia group and hypertension group（P＜0.05）.Conclusion

The lower expression of MMP-9 and EMMPRIN，and higher expression of TIMP-1 in placenta may contribute to the development of hypertensive disorder complicating pregnancy.