復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者血清白細(xì)胞介素2水平及外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化規(guī)律研究

陳 宏，王越海，朱萍芳，丁 娟，蔡 薇

（浙江省紹興市人民醫(yī)院皮膚科，浙江紹興312000）

·論 著·

復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者血清白細(xì)胞介素2水平及外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化規(guī)律研究

陳 宏，王越海，朱萍芳，丁 娟，蔡 薇

（浙江省紹興市人民醫(yī)院皮膚科，浙江紹興312000）

目的觀察復(fù)發(fā)性生殖器皰疹（recurrent genital herpes，RGH）患者血清白細(xì)胞介素2（interleukin-2，IL-2）水平及外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律，探討RGH患者反復(fù)發(fā)作的免疫學(xué)機(jī)制。方法選擇100例RGH患者，采用酶聯(lián)免疫吸附測定方法檢測IL-2，采用流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞亞群。對照組100例來自無感染性疾病的健康志愿者。結(jié)果RGH組血清IL-2水平明顯低于正常對照組（P＜0.01）。RGH組外周血清中的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T細(xì)胞表達(dá)較對照組明顯降低（P＜0.05）；而CD8+T細(xì)胞表達(dá)則明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。RGH組老年患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T細(xì)胞明顯低于青年患者（P＜0.05），而CD8+T細(xì)胞明顯高于青年患者（P＜0.05）。結(jié)論RGH患者血清中IL-2水平及外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平異常，患者體內(nèi)存在細(xì)胞免疫功能失調(diào)及免疫抑制現(xiàn)象。

皰疹，生殖器；白細(xì)胞介素2；T淋巴細(xì)胞亞群

引起生殖器和肛周部位發(fā)生潰瘍、水皰及紅斑等病變刺激［1］。若宿主出現(xiàn)內(nèi)分泌紊亂、精神創(chuàng)傷或疲勞等，HSV-2可再激活并復(fù)制、繁殖，從而引起病情的反復(fù)發(fā)作。HSV-2感染患者的發(fā)病及復(fù)發(fā)機(jī)制可能與患者的免疫功能低下有關(guān)，為了解細(xì)胞免疫功能在RGH發(fā)病中的作用，本研究對100例RGH患者的血清白細(xì)胞介素2（interleukin-2，IL-2）水平及其外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平進(jìn)行了檢測比較，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2011年1月—2012年6月于我院皮膚性病科門診就診的復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者100例，均符合復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。入選標(biāo)準(zhǔn)包括HSV-DNA定性陽性及血清IgG抗體陽性；有非婚性接觸史或配偶感染史；1年內(nèi)未使用過任何免疫調(diào)節(jié)劑。排除標(biāo)準(zhǔn)包括糖尿病、嚴(yán)重心肝腎疾病、高血壓、妊娠及哺乳期婦女、肺結(jié)核、器官移植、自身免疫缺陷者、腫瘤和有其他微生物感染病史者。RGH組100例，男性63例，女性37例，年齡19～71歲，平均（52.7±2.9）歲，其中年齡≤40歲（A組）25例，＞40～60歲（B組）36例，＞61歲（C組）39例。病程5個月～7年，平均（2.6±0.9）年。對照組100例來自無感染性疾病的健康志愿者，男性67例，女性33例，年齡20～70歲，平均（51.3±3.1）歲。2組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 檢測方法

1.2.1 IL-2檢測：患者空腹，抽取靜脈血5mL，離心，取上層血清，-70℃下存于冰箱。采用常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附測定法，按照Quantikine人IL-2免疫檢測試劑盒（美國RD公司）說明書操作。待反應(yīng)終止后，即刻在波長405 nm處（Bio-RedBech-mark酶標(biāo)儀）測定樣品中IL-2的吸光度A值，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，做相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各樣品中的IL-2含量（ng/L）。

1.2.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測：患者空腹情況下，抽取靜脈血2mL，加入抗凝劑肝素鈉。精密取l00μL樣品，加入20μL相應(yīng)抗體，上下充分混勻，25℃下，暗處孵育20min，吸取500μL紅細(xì)胞裂解液，加入充分振蕩混勻，室溫靜置20min（不可移動），再加入500μL PBS緩沖液，充分搖勻，再次靜置20min，最后上流式細(xì)胞儀檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，分別采用t檢驗、F檢驗和q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 IL-2水平比較：檢測結(jié)果顯示，RGH組血清IL-2為（416.3±149.9）ng/L，對照組為（1 186±183.4）ng/L，RGH組明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。同時發(fā)現(xiàn)，發(fā)作期患者血清中IL-2為（418.3±151.2）ng/L，略高于緩解期患者的（386.0±191.3）ng/L，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 T淋巴細(xì)胞亞群比較：通過T淋巴細(xì)胞亞群檢測顯示，RGH組外周血的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T細(xì)胞表達(dá)較對照組明顯降低，而CD8+T細(xì)胞的表達(dá)則明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。RGH組老年患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T細(xì)胞明顯低于青年患者（P＜0.05），而CD8+T細(xì)胞明顯高于青年患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1，2。

表1 RGH組與對照組的T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較Table 1 Detection of T lymphocyte subsets in RGH group and control gorup （n=100，±s）

表1 RGH組與對照組的T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較Table 1 Detection of T lymphocyte subsets in RGH group and control gorup （n=100，±s）

*P＜0.05 vs control group by t test

Groups CD3+（％）CD4+（％）CD8+（％）CD4+/CD8+RGH 53.06±12.31*30.98±7.16*32.72±2.73*0.96±0.18*39±0.19 Control 66.25±5.97 35.27±2.06 24.89±6.39 1.

表2 RGH組不同年齡患者T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較Table 2 Detection of T lym phocytes subsetsin patientsw ith different age group of RGH （n=100，±s）

表2 RGH組不同年齡患者T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較Table 2 Detection of T lym phocytes subsetsin patientsw ith different age group of RGH （n=100，±s）

*P＜0.05 vs A group by q test

Groups n CD3+（％）CD4+（％）CD8+（％）CD4+/CD8+A 25 56.13±13.01 32.38±8.04 30.81±2.32 1.16±0.25 B 36 54.05±11.84 30.99±8.06 32.06±2.86 0.98±0.19 C 39 52.25±10.97*29.27±7.06*33.89±2.39*0.93±0.16*

3 討 論

由HSV-2感染引起的生殖器皰疹發(fā)生率每年都在增長，特別是發(fā)達(dá)國家。美國疾病預(yù)防控制中心的最新統(tǒng)計顯示，目前美國總?cè)丝谥杏?3％攜帶HSV-2病毒，10年內(nèi)增加了1/3，其中女性患者比例為40％～50％，男性為30％～40％。在日本，婦女性傳播疾?。╯exually transmitted diseases，STD）患者中至少有一半為生殖器皰疹患者。據(jù)世界衛(wèi)生組織不完全估計，全球每年新發(fā)生殖器皰疹病例為2 000萬，位居STD的第4位；同時，該病也已在我國存在并在STD中占有一定的比例［3］。機(jī)體對生殖器皰

疹的特異性免疫主要是細(xì)胞免疫，因此推測，RGH患者可能存在細(xì)胞免疫缺陷［4］。

IL-2主要由活化的T淋巴細(xì)胞分泌，并刺激T細(xì)胞表面表達(dá)IL-2的受體，而IL-2結(jié)合該受體，活化T淋巴細(xì)胞，最終發(fā)揮抗病毒作用［5］。同時，IL-2還是機(jī)體免疫應(yīng)答過程中重要的免疫增強(qiáng)因子，可直接促使自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及LAK等細(xì)胞的增殖，活化的自然殺傷細(xì)胞進(jìn)一步分泌功能細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-γ，其可殺傷靶細(xì)胞，達(dá)到免疫調(diào)節(jié)的功效［4］。另一靶細(xì)胞LAK細(xì)胞為淋巴細(xì)胞激活的殺傷細(xì)胞，它來源于NK細(xì)胞，在高劑量IL-2誘導(dǎo)下，能夠殺傷對NK細(xì)胞不敏感的靶細(xì)胞，增強(qiáng)了該類細(xì)胞溶解和破壞病毒感染細(xì)胞能力［6］。本研究顯示，RGH組血清IL-2水平明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；同時，發(fā)作期患者的IL-2水平略高。提示RGH患者體內(nèi)IL-2表達(dá)水平降低，可能通過上述幾個途徑誘導(dǎo)Thl型細(xì)胞免疫反應(yīng)減弱，并抑制HSV-2的復(fù)制能力，降低機(jī)體的清除病毒能力。推測這可能是生殖器皰疹病情反復(fù)發(fā)作的原因之一。

T淋巴細(xì)胞亞群在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)中占據(jù)著重要的位置，正常情況下，T淋巴細(xì)胞亞群之間相互調(diào)節(jié)影響，在數(shù)量和功能上，維持一定的平衡狀態(tài)，保證機(jī)體發(fā)揮正常的免疫功能［7-8］。但是，當(dāng)T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量或者功能發(fā)生異常、機(jī)體受到病毒抗原刺激時，機(jī)體免疫功能的平衡狀態(tài)被打破，對外界病原微生物入侵的防御能力便大大降低［9］。本研究RGH組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T細(xì)胞的表達(dá)較正常對照組顯著降低，而CD8+T細(xì)胞表達(dá)則明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示RGH患者受到皰疹病毒感染后，活化并產(chǎn)生了細(xì)胞毒性T細(xì)胞，機(jī)體的免疫系統(tǒng)平衡狀態(tài)被打破，最終可能導(dǎo)致生殖器皰疹病情反復(fù)發(fā)作［10］。本研究RGH組不同年齡患者之間T細(xì)胞亞群數(shù)量也存在一定差別，RGH組老年患者的外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+T細(xì)胞明顯低于青年患者（P＜0.05），而CD8+T細(xì)胞明顯高于青年患者（P＜0.05）。說明老年人機(jī)體免疫力下降，更易患復(fù)發(fā)性生殖器皰疹，而青年人機(jī)體免疫能力相對較強(qiáng)，復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的幾率相對較小。

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（本文編輯：劉斯靜）

EXPRESSION OF INTERLEUKIN-2 AND T LYMPHOCYTE SUBSETS IN PERIPHERAL BLOOD OF PATIENTSW ITH RECURRENT GENITAL HERPES

CHEN Hong，WANG Yuehai，ZHU Pingfang，DING Juan，CAIWei

（Department of Dermatology，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

Objective To detect the expression of interleukin-2（IL-2）and T lymphocyte subsets in peripheral blood of patients with recurrent genital herpes（RGH），and to discuss the immunologicalmechanism of repeated recurrent genital herpes.MethodsOne hundred cases of RGH patientswere selected as research objects.IL-2 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA），and the T lymphocyte subsets were detected by flow cytometry.Another 100 healthy volunteerswithout infectious diseases served in control group.ResultsThe serum IL-2 level of RGH group was significantly lower than that of normal control group（P＜0.01）；Peripheral serum CD3+，CD4+，CD4+/CD8+T expression in RGH group were significantly lower than those of the control group（P＜0.05）；while the CD8+T cell expression was significantly higher than thatof the control group（P＜0.05）；peripheral blood CD3+，CD4+，CD4+/CD8+T cells of elderly patients in RGH group was significantly lower than thatof young patient（sP＜0.05），and CD8+T cellswas significantly higher than that of young patients（P＜0.05）.ConclusionThe IL-2 and T lymphocyte subsets of patients with RGH were abnorma1.There are cellular immune dysfunction and immune suppression in the patientswith RGH.

herpes，genital；interleukin-2；T lymphocytes

R752.1

A

1007-3205（2013）06-0664-03

2012-11-19；

2013-01-09

陳宏（1968-），男，浙江紹興人，浙江省紹興市人民醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事皮膚疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.016

復(fù)發(fā)性生殖器皰疹（recurrent genital herpes， RGH）是一種主要由單純皰疹病毒（herpesvirus 2，HSV-2）感染所致的疾病，發(fā)病率逐年上升。HSV-2病毒侵入人體后，潛伏在骶神經(jīng)根區(qū)，通過與皰疹病毒感染患者性接觸傳染，生殖器皮膚黏膜發(fā)生感染，