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    蚤休醇提物對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響

    2013-03-03 05:33:29強金曼肖陽楊劉英姿劉丹林歡李旭偉胥正敏
    中國民族民間醫(yī)藥 2013年9期
    關(guān)鍵詞:川北動作電位提物

    宋 強金 曼肖 陽楊劉英姿劉 丹林 歡李旭偉胥正敏

    1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機能實驗中心,四川 南充 637000;2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系,四川 南充 637000;3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,四川 南充 637000

    蚤休醇提物對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響

    宋 強1,2金 曼1,2肖 陽1,2楊劉英姿1,2劉 丹1,2林 歡1,2李旭偉1胥正敏3

    1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機能實驗中心,四川 南充 637000;2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系,四川 南充 637000;3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,四川 南充 637000

    目的:研究蚤休醇提物對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)阻滯作用。方法:觀察蚤休醇提物對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅和傳導(dǎo)速度的影響。結(jié)果:0.0075g/ml,0.0175g/ml,0.0250g/ml,0.0500g/ml,0.1000g/ml 5種濃度的蚤休醇提物均使坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅變小 (P<0.01),傳導(dǎo)速度變慢 (P<0.01)并最終使坐骨神經(jīng)動作電位消失。結(jié)論:蚤休醇提物能阻滯神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)。

    蚤休醇提物;離體蟾蜍坐骨神經(jīng);復(fù)合動作電位;阻滯

    蚤休(manyleaf paridis rhizome)出自明·陳嘉謨《本草蒙筌》。別名七葉一枝花、重樓。為百合科植物華重樓或七葉一枝花的根莖。華重樓分布華南、華東、西南及陜西、山西、甘肅、河南、湖北、西藏等地。七葉一枝花分布四川、貴州、云南、西藏等地???,寒,有小毒。入心、肝經(jīng)。清熱解毒,消腫,定驚,止咳[1]。相關(guān)研究表明,蚤休在熱板法[2]實驗中能顯著提高小鼠的痛閾值;在醋酸扭體法[3]實驗中能有效減少扭體次數(shù)。說明蚤休具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛、活血作用[4]??赡芘c抑制一些內(nèi)源性炎癥介質(zhì),阻滯神經(jīng)傳導(dǎo)有關(guān),表現(xiàn)為鎮(zhèn)痛效應(yīng)[5]。本研究從電生理學(xué)的角度,觀察不同濃度蚤休醇提液對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動作電位的影響,以進一步探討蚤休醇提液鎮(zhèn)痛作用的可能機制。

    1 材料和方法

    1.1 實驗試劑 任氏液(NaC1 6.5 g,KC1 0.14 g,CaCl20.12 g;NaHCO30.20 g;NaH2PO40.01g加蒸餾水至1000 m1,所用試劑均為化學(xué)純,購自成都科龍化工試劑廠);蚤休(購自四川南充市百姓大藥房);95%乙醇溶液;85%乙醇溶液;75%乙醇溶液 (以上3種乙醇溶液均購自北京貞玉民生藥業(yè)有限公司)。

    1.2 實驗儀器 超聲波提取器(上海比郎儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海禾青儀器設(shè)備有限公司);恒溫水浴箱(天津艾維歐科技發(fā)展有限公司);BL-420F生物機能實驗系統(tǒng) (四川成都泰盟科技有限公司);神經(jīng)屏蔽盒 (四川成都泰盟科技有限公司);電子天平Model:ES6000-1(沈陽龍騰電子有限公司生產(chǎn))。

    1.3 蚤休醇提物提取 取100g蚤休藥材浸泡于400ml95%乙醇溶液中24小時,將其放入超聲波提取器中,設(shè)置溫度為25℃,提取40分鐘,過濾,將濾液保存于4℃的冰箱中,濾渣再次浸泡,重復(fù)上述步驟,分別將濾渣浸泡于85%、75%的乙醇溶液中,得初提液1167ml。將初提液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸餾30分鐘,得液體113ml,將所得液體置于37℃水浴箱中,水浴5小時,烘干,得固體8.7g。用任氏液分別配置0.0075g/ml,0.0175 g/ml,0.0250g/ml,0.0500g/ml,0.1000g/m l的蚤休溶液。

    1.4 實驗動物分組 中華大蟾蜍24只,雌雄兼用,體重80~100g,由川北醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供,隨機分為6組(任氏液組,0.0075g/ml,0.0175 g/m l,0.0250g/ml,0.0500g/ml,0.1000g/m l蚤休溶液組),每組6只。

    1.5 坐骨神經(jīng)標本制備 將蟾蜍進行稱重,搗毀腦和脊髓,分離坐骨神經(jīng)3~5cm,盡量將神經(jīng)干周圍的組織剔除干凈,神經(jīng)干脊柱端和足端用棉線結(jié)扎,置于任氏液中浸泡孵育10分鐘以穩(wěn)定其興奮性。

    1.6 動作電位引導(dǎo)并記錄 將孵育后的神經(jīng)干慢慢沿培養(yǎng)皿壁取出,瀝干其水分,搭到神經(jīng)屏蔽盒的電極上,測定動作電位振幅和傳導(dǎo)速度。再將神經(jīng)干取出屏蔽盒,放入不同濃度四數(shù)九里香溶液中浸泡2分鐘,沿管壁輕輕取出,瀝干其水分并防止刮傷神經(jīng)。將該神經(jīng)干依照之前的位置搭在電極上,在位于刺激電極與引導(dǎo)電極的神經(jīng)干上分別放置浸濕藥液(0.0075g/m l,0.0175 g/ml,0.0250g/ml,

    0.0500g/ml,0.1000g/ml蚤休溶液)的小棉條,用BL-420F生物機能實驗系統(tǒng)每隔2分鐘檢測動作電位相關(guān)值。動作電位速度測定需要測量兩個電極之間距離。單個動作電位及傳遞速度測定儀器設(shè)置值:方式,單刺激;延時,5.00ms;波寬,0.05ms;強度,1.00V;頻率,10KHz;采樣率,1.25ms/div。

    1.7 數(shù)據(jù)處理 記錄各組給藥前與浸泡后坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅與傳導(dǎo)速度,實驗數(shù)據(jù)用±s描述,采用配對t檢驗進行顯著性檢驗。

    2 結(jié)果

    2.1 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅的影響隨著藥物作用時間的延長,5種濃度的藥物均使得坐骨神經(jīng)干復(fù)合動作電位的振幅逐漸變小,具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.01)。藥物濃度越大,動作電位振幅的變化越大 (見表1)。

    表1 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅的影響

    2.2 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度的影響隨著藥物作用時間的延長,5種濃度的藥物均使得坐骨神經(jīng)干復(fù)合動作電位的傳導(dǎo)速度逐漸變小,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。藥物濃度越大,動作電位傳導(dǎo)速度的變化越大,神經(jīng)傳導(dǎo)速度的改變與神經(jīng)動作電位振幅的改變基本同步 (見表2)。

    表2 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度的影響

    3 討論

    本實驗通過離體實驗方法,觀察了蚤休醇提物對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位傳導(dǎo)的影響。實驗結(jié)果表明蚤休醇提物對坐骨神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)具有明顯阻滯的作用,提示阻滯神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)是蚤休的鎮(zhèn)痛作用可能的機制之一。

    有關(guān)蚤休的化學(xué)成分,張宏武等[6]從蚤休醇提物中分離并鑒定出七葉一枝花根含蚤休甙、薯蕷皂甙,薯蕷皂甙元的3-葡萄糖甙、3-鼠李糖葡萄糖甙、3-鼠李糖阿拉伯糖葡萄糖甙和3-四糖甙,娠二烯醇酮-3-查考茄三糖甙等多種皂甙。蚤休的活性成分極性較大,含量較小,化學(xué)成分研究進展較為困難,對于蚤休的鎮(zhèn)痛藥理機制及現(xiàn)代中藥藥學(xué)的開發(fā)探索,還可做進一步的深入研究。

    [1]李經(jīng)緯,區(qū)永欣,余瀛鰲,等.簡明中醫(yī)辭典 [M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2001:15-16.

    [2]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(xué),第3版 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:883-913.

    [3]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:484-484.

    [4]柳燕,竇昌貴.蚤休合劑鎮(zhèn)痛抗炎活血作用實驗研究 [J].時珍國醫(yī)國藥,2005,16(8):736-737.

    [5]Abbott FV,F(xiàn)ranklin KB.Noncompetitive antagonism of morphine analgesia by diazepam in the formalin test[J].Pharmacol Biochem Behav,1986,24(2):319-321.

    [6]張宏武,鄒鐘梅,徐麗珍,等.蚤休脂溶性化學(xué)成分的研究 [J].西北藥學(xué)雜志.2004,19(4):161-162.

    Effects of manyleaf paridis rhizome on Com pound Action Potential of Sciatic Nerve of Toad

    Objective:To study the blockade effect of manyleaf paridis rhizome on action potential of sciatic nerve of toad.Methods:The influence of manyleaf paridis rhizome on amplitude and conduction velocity of compound action potential of sciatic nerve of toad was observed in vitro.Results:The decoction of manyleaf paridis rhizome in five different concentrations(0.0045g/ml,0.009 g/ml,0.0175 g/ml,0.035g/ml,0.069g/m l)could decrease the amplitude(P<0.01)and slow down the conduction velocity(P<0.01).The action potential of sciatic nerve vanished at last.Conclusion:manyleaf paridis rhizome can block the conduction of action potential of nerve.

    manyleaf paridis rhizome;Sciatic nerve of toad in vitro;Compound action potential;Blockade

    R282.74

    A

    1007-8517(2013)09-0026-02

    2013.03.28)

    川北醫(yī)學(xué)院2012年大學(xué)生科研項目。

    宋強,川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系2010級本科學(xué)生,e-mail:875373158@qq.com。

    李旭偉(1980-),漢,碩士研究生,四川富順人,講師,研究方向為心血管生理與神經(jīng)電生理學(xué)。E-mail:lxwhi@qq.com

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