鉤藤散對(duì)癡呆大鼠組織內(nèi)乙酰膽堿酯酶含量及學(xué)習(xí)能力的影響

吳成舉 陳 靖 楊 光

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110032

鉤藤散對(duì)癡呆大鼠組織內(nèi)乙酰膽堿酯酶含量及學(xué)習(xí)能力的影響

吳成舉 陳 靖 楊 光

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110032

目的：研究鉤藤散治療血管性癡呆的作用機(jī)制。方法：采用大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎（2－VO法）制作VaD模型，將造模后的VD大鼠隨機(jī)分為A組B組和C組并加以相應(yīng)治療，另設(shè)D組采用水迷宮檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，同時(shí)檢測(cè)血清和大腦海馬組織含量。結(jié)果：C組、B組與A組給藥后相比較存在明顯差異（P＜0.05），差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；鉤藤散組血清和海馬含量較模型對(duì)照組降低（P＜0.05）。結(jié)論：鉤藤散能改善血管性癡呆大鼠血和海馬內(nèi)含量，鉤藤散可以治療VD大鼠。

VD大鼠；鉤藤散；乙酰膽堿酯酶

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是老年癡呆的主要類型之一，鉤藤散在老年癡呆的防治上，有一定療效。鉤藤散出自《本事方》，由鉤藤、石膏、半夏、茯苓、人參、防風(fēng)等11味藥組成。該方原為治療肝厥頭暈之癥，本研究通過鉤藤散對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)及組織內(nèi)乙酰膽堿酯酶含量的影響，為老年癡呆癥的治療提供理論依據(jù)和實(shí)踐材料。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量250g±50g，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：（遼）20114562。

1.2 藥品試劑與儀器 鉤藤散組成：用鉤藤、茯苓、菊花各15g，半夏、麥冬、黨參、防風(fēng)、川芎各10g，陳皮12g，石膏20g，甘草5g，生姜3片。以上藥物均購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥局，用水提法提得提取物，配成濃度為0.2g/m l；鹽酸噻氯匹定片（抵克立得），由賽諾菲安萬(wàn)特（杭州）制藥有限公司生產(chǎn)，用時(shí)配成濃度為0.2g/ml；大鼠乙酰膽堿酯酶（AChE）酶聯(lián)免疫試劑盒，上海邦奕商貿(mào)有限公司；Morris（包括電腦自動(dòng)攝象裝備系統(tǒng)）水迷宮系統(tǒng)；DG5033A酶標(biāo)儀。

1.3 動(dòng)物模型制備 結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈（2－VO法）制作 VaD模型。方法如下：腹腔麻醉用戊巴比妥鈉（40mg/kg），仰臥位，將大鼠固定于兔臺(tái)上。頸部脫毛，消毒用碘伏，頸部中央切開2cm左右的切口，將雙側(cè)頸總動(dòng)脈分離后，用手術(shù)線永久結(jié)扎。局部消毒后縫合。A組和B組C組行上述手術(shù)處理。假手術(shù)組血管不結(jié)扎。

1.4 分組與給藥 將造模后的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組（A）、鉤藤散組（B）和鹽酸噻氯匹定片組（C），每組各12只。B組灌胃，每只2g/（kg·d）；C組灌胃，每只2mg/（kg·d）；A組給以純凈水2g/（kg·d）灌胃。假手術(shù)組（D）12只，給以純凈水2g/（kgd）灌胃。各組均連續(xù)灌胃30d。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前訓(xùn)練大鼠學(xué)會(huì)水迷宮。在相同入水點(diǎn)將每只大鼠放進(jìn)2次。將大鼠的逃避潛伏期、游泳軌跡、游泳總路程等記錄下來。要求大鼠在120s內(nèi)找到平臺(tái)，在其上面保持40s以加強(qiáng)記憶。如果在120s找不到平臺(tái)，也要把大鼠引導(dǎo)到平臺(tái)上，同樣保持40s，再進(jìn)行下一次訓(xùn)練。造模前、后各記錄1次，實(shí)驗(yàn)至第30天進(jìn)行藥后測(cè)試。

1.5.2 AChE檢測(cè) 測(cè)試學(xué)習(xí)能力后，大鼠禁食過夜，次日尾靜脈取血，分離血清；另取大腦海馬組織，制成組織勻漿檢測(cè)AChE。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AD模型大鼠水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定見表1。

表1 各組大鼠逃避潛伏期的比較（±s）

表1 各組大鼠逃避潛伏期的比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較*P＜0.05；與模型組比較△P＜0.05。

組別 n 手術(shù)前 給藥前 給藥后A組12 20.795±2.693 82.673±11.354*88.675±7.643 B組12 21.354±3.356 58.326±4.568*22.682±5.342△C組12 19.362±2.564 92.124±6.145*14.134±3.527△D組12 16.659±2.958 16.356±5.163 22.325±7.658

結(jié)果顯示各組比較在手術(shù)前均無(wú)差異；A組、B組、C組各組給藥前與手術(shù)前比較均有顯著性差異（P＜0.05），說明造模成功；B組、C組與模型組給藥后相比較存在明顯差異（P＜0.05），提示噻氯匹定組、鉤藤散組的大鼠逃避潛伏期明顯縮短，說明兩藥均能改善AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能；與假手術(shù)組相比較B組和C組沒有差異，說明兩者均有療效。

2.2 鉤藤散對(duì)血管性癡呆大鼠血清和海馬AChE含量的影響見表2。

表2 治療后各組大鼠血清和海馬AChE含量對(duì)比（±s）

表2 治療后各組大鼠血清和海馬AChE含量對(duì)比（±s）

與模型組比較*P＜0.05；與假手術(shù)組比較，#P＜0.05

組別 n 血清AChE 海馬AChE # A組 12 1.0149±0.1832# 0.8997±0.2103 B組 12 0.8302±0.1016* 0.5619±0.0267*C組 12 0.8198±0.1148* 0.6011±0.0521*D組12 0.5768±0.1265 0.5578±0.0769

3 討論

血管性癡呆屬中醫(yī)的“癡呆”范疇，認(rèn)為癡呆為一種全身性疾病，本病多由腎精不足、髓海虧損，痰濁瘀阻，瘀血阻腦，神機(jī)失用。病位在腦，與心、肝、脾、腎皆有關(guān)系，其中與腎、肝關(guān)系尤為密切。治療時(shí)應(yīng)標(biāo)本兼顧，補(bǔ)其虛而瀉其實(shí)。發(fā)生VD的重要原因是腦缺血，造成海馬損傷引起學(xué)習(xí)記憶能力下降。而海馬對(duì)缺血非常敏感，其CA1區(qū)在學(xué)習(xí)記憶中起重要作用［1］。

海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的遲發(fā)性死亡可能是缺血性腦血管病導(dǎo)致癡呆的主要原因［2］，即使短暫的腦缺血也可造成錐體細(xì)胞延遲性神經(jīng)元死亡［3］。尤其腦海馬組織是學(xué)習(xí)、記憶的高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)中樞［4］，而腦內(nèi)海馬乙酰膽堿（acetyl－choline，Ach）的含量與記憶功能是密切相關(guān)的［5］。ChAT和AchE共同維持著Ach的動(dòng)態(tài)平衡，也是維持哺乳動(dòng)物正常進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶的必要條件。本研究結(jié)果表明，方中鉤藤、菊花平肝清熱；石膏辛寒清熱；陳皮、半夏健脾燥濕化痰；人參、茯苓補(bǔ)氣健脾。諸藥合用，共奏平肝清熱安神之功。鉤藤散組水迷宮大鼠逃避潛伏期較模型對(duì)照組縮短，血清及海馬中AChE活性較模型對(duì)照組降低，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示此方能改善VD大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，且能改善膽堿能系統(tǒng)的功能，調(diào)節(jié)ACh生理代謝，從而達(dá)到改善任知功能，治療VD的目的。

［1］楊春壯，馬英，張春軍，等.補(bǔ)腎醒腦方對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)能力及組織內(nèi)乙酰膽堿酯酶含量的影響［J］.中醫(yī)研究，2011，12（24）：10－12.［2］趙建新，田元祥，李國(guó)明，等.腦缺血再灌注擬血管性癡呆小鼠皮層及海馬細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)動(dòng)態(tài)觀察［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2000，17（4）：200－202.

［3］Abe K，AokiM，Kawagoe J，et al.Ischemic delayed neuro－nal death：A mitochondrial hypothesis［J］.Stroke，1995，26（8）：1478－1489.

［4］Melis F，Stancampiano R，Imperato，et al.Chronic ethanol consumptionin rats：correlation between memory performance and hippocampal ace－tylcholine release in vivo［J］.Neuroscience，1996，74（1）：155－159.

［5］Fang M，Li J，Tiu SC，et al.N－methy－D－aspartate receptor and apoptosis in Slzheimer＇s disease and multiinfarct dementia［J］.J Neuros－ci Res，2005，81（2）：269－274.

Hook rattan scattered within the organization for dementia rats acetylcholinesterase content and the influence of learning ability

WU Cheng－ju，CHEN Jing，YANG Guang
（Liaoning university of Chinese medicine，Shen Yang 110032）

objective：Research uncaria scattered treatment of vascular dementia mechanism of actionMethods：Using rat bilateral common carotid artery ligation（2－VO method）making VaD model，Making die after VD rats were randomly divided into group A and group B and C group to the corresponding treatment，establish A group D with water maze test rats learning and memory ability，At the same time measure serum and brain hippocampus tissue contentResults：C group，group B and A group after the treatment phase is obvious difference（P＜0.05）.The difference was statistically significance；Hook rattan scattered group serum and hippocampal content is reduced model control group（P＜0.05）Conclusion：uncaria scattered improve vascular dementia rats blood and hippocampus in content，Hook rattan powder can be treated VD rats.

VD rats；Hook rattan scattered；Acetyl cholinesterase

RR33

A

1007－8517（2013）03－0026－02

2013.01.08）