RP－HPLC法測定裸花紫珠顆粒中蘆丁的含量

郭培果

貴陽濟仁堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550005

RP－HPLC法測定裸花紫珠顆粒中蘆丁的含量

郭培果

貴陽濟仁堂藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550005

目的：建立裸花紫珠顆粒中蘆丁的含量測定方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Hpersil C18柱，流動相為乙腈－1%醋酸溶液（15∶85），流速為1.0ml·min－1，檢測波長為257nm，柱溫為40℃。結(jié)果：蘆丁進樣量在551.8～5518ng（r＝0.9999）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.09%，RSD為0.90%（n＝6）。結(jié)論：該方法簡便，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于裸花紫珠顆粒中蘆丁的含量測定。

裸花紫珠顆粒；蘆??；反相高效液相色譜法；含量測定

裸花紫珠顆粒系由收載于《中藥成方制劑》第6冊的“裸花紫珠片”改劑型而成的新品種［1］，由裸花紫珠提取加工而成，具有收斂止血的功效。用于肺喀血及消化道出血。為了更好的控制藥品質(zhì)量，參考相關(guān)文獻［2～6］，進行了色譜條件優(yōu)化和方法學(xué)考察。結(jié)果表明，該方法快速簡便、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好、可用于裸花紫珠顆粒中蘆丁的含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－10ATVP高效液相色譜儀，SPD－10AVP紫外檢測器；威瑪瓏色譜數(shù)據(jù)工作站（南寧威瑪龍色譜科技有限公司）；CTO－10ASvp色譜柱恒溫箱（日本島津）；UV－1750型紫外可見分光光度計。

1.2 試藥 蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100110－200707，供含量測定用）；裸花紫珠顆粒試驗用樣品由貴陽濟仁堂藥業(yè)有限公司研制；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hpersil C18（250×4.6mm，5um）；流動相：乙腈－1%醋酸溶液（15∶85）；流速：1.0ml· min－1；檢測波長：257nm；進樣量：10ul；柱溫：40℃。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗 按擬定的標(biāo)準(zhǔn)條件進行測定，結(jié)果理論板數(shù)按蘆丁峰計＞4000；蘆丁其它雜質(zhì)峰的分離度R＞1.5。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1m l含0.2mg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品粉末0.2g，精密稱定，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）45min，取出，放冷，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，即得。

2.3.3 陰性對照溶液的制備 取處方中除裸花紫珠外的其他輔料，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺裸花紫珠的陰性樣品，照“2.3.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.4 方法專屬性考察 分別吸取對照品溶液、樣品溶液和陰性對照溶液各10ul，注入HPLC儀，色譜見圖1。由圖1可見，陰性對照在與對照品相同的保留時間位置，無相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)，表明除裸花紫珠外輔料對測定無干擾。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸蘆丁對照品貯備液（濃度為1.1036mg·ml－1）0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、5m l置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，精密吸取上述溶液各10ul，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行試驗，以峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量（ng）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁回歸方程為：y＝831.563X－4.612（r＝0.9999）。結(jié)果表明，蘆丁在進樣量為551.8～5518ng（r＝0.9999）范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

擬合成過原點的直線方程為Y＝831.561X，將線性關(guān)系考察的最低進樣量與最高進樣量分別代入上述2個方程進行計算，所得峰面積相對偏差0.00012%（低）～0.00005%（高）。由此可作截距，近似為零，故采用外標(biāo)一點法計算蘆丁含量。

2.6 精密度試驗 精密吸對照品溶液適量，重復(fù)進樣測定6次，每次10ul。結(jié)果，以蘆丁的峰面積計，RSD＝0.05%，表明方法精密度好。

2.7 重復(fù)性試驗 取批號為110301的樣品6份，按“2.3.2”項下方法制備樣品溶液，并進行測定，考察測定方法的重復(fù)性。結(jié)果，蘆丁的平均含量為27.465mg·g－1，RSD＝0.22%，表明重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取樣品（批號為110301）適量，依“2.3.2”項下方法制備樣品溶液，室溫下分別于0、1、2、4、6、8、10h進樣測定，考察蘆丁在室溫下的溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果，RSD＝0.76%，表明樣品在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 取批號為110301樣品（含量為27.465mg·g－1）適量，混勻，取樣品約0.1g，共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入蘆丁對照品溶液（0.22072mg·ml－1），按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品含量測定 取本品10批，按“2.3.2”項下方法處理后，測定含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 波長的選擇 取蘆丁對照品適量，加50%甲醇稀釋成一定濃度的溶液，用UV－1750型紫外可見分光光度計進行掃描，蘆丁在258.0nm處有最大吸收，參照相關(guān)資料［3］，將檢測波長定為257nm。

3.2 提取溶劑的選擇 本研究曾對甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇提取用溶媒進行選擇，結(jié)果，50%甲醇提取液效果最好，故確定以50%甲醇為提取溶劑。

3.3 提取方法的選擇 參照有關(guān)資料，對提取方法進行了比較試驗，用同一批樣品（批號：110301）以不同的提取方法和相同的溶劑測定。結(jié)果，采用超聲處理（功率250W，頻率50kHz）蘆丁含量較高；對超聲處理時間15、30、45、60min進行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)45min提取含量最高。3.4 流動相的選擇 試驗中，考察了乙腈－1%醋酸溶液、甲醇－1%冰醋酸溶液、乙腈－甲醇－0.1%冰醋酸溶液等多個流動相系統(tǒng)進行比較。結(jié)果表明：流動相以乙腈－1%醋酸溶液（15∶85）較好，保留時間適當(dāng)，蘆丁峰與其它雜質(zhì)峰能較好分離，故將流動相確定為乙腈－1%醋酸溶液（15∶85）。

3.5 色譜柱的選擇 本研究曾考察了3種色譜柱（Thermo C18柱（250×4.6mm，5um）、Hypersil C18柱（250× 4.6mm，5um）、Diamons C18（250×4.6mm，5um））對蘆丁的分離情況。結(jié)果以Hypersil C18效果最佳，故最終選擇了Hypersil C18色譜柱。

［1］衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑［S］.第6冊.1992：199.

［2］國家藥品監(jiān)督管理局.國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編［S］.內(nèi)科氣血津液分冊，2002：41.

［3］中國藥典2010年版［S］.一部.2010：333.

［4］中國藥典2010年版［S］.一部.2010：469.

［5］中國藥典2010年版［S］.一部.2010：820.

［6］賓婕，劉潔，陳克嶙，等，不同來源苦蕎中蘆丁和槲皮素含量測定［J］.現(xiàn)代食品科技，2011（1）.

R282.71

A

1007－8517（2013）07－0027－02

2013.02.21）

郭培果（1978～），男，布依族，執(zhí)業(yè)藥師。

郭培果，執(zhí)業(yè)藥師，Tel：0851－5400121－8804，E－mail：guozdq＿888＠163.com。