幾種梅毒血清學(xué)檢測方法的比較與分析

張波

(淮北礦工總醫(yī)院檢驗科，安徽淮北235000)

幾種梅毒血清學(xué)檢測方法的比較與分析

張波

(淮北礦工總醫(yī)院檢驗科，安徽淮北235000)

目的通過比較梅毒的4種檢測方法的敏感性和特異性，建立適合自己實驗室的梅毒檢測流程和報告體系。方法經(jīng)TP-ELISA篩選出的198例血清標(biāo)本分別用TPPA、RPR、和金標(biāo)法進(jìn)行檢測，以TPPA檢測結(jié)果作為確認(rèn)。經(jīng)TPPA確認(rèn)有96例陽性標(biāo)本和102例陰性標(biāo)本。根據(jù)檢測結(jié)果可得出TP-ELISA、RPR、金標(biāo)法3種方法的敏感性和特異性。結(jié)果以TPPA為標(biāo)準(zhǔn)可得出，TZP-ELISA、RPR、金標(biāo)法的敏感性分別為98.97%、73.96%、92.70%；特異性分別為97.06%、95.09%、98.04%。TP-ELISA、金標(biāo)法的敏感性較高；而RPR的敏感性較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。3種方法的特異性均較高，無明顯差異。結(jié)論RPR敏感性較低不適用于大批量篩查，TP-ELISA適用于批量篩查，金標(biāo)法適用于急診檢測，而它們都存在一定的假陽性和假陰性，為提高梅毒的檢出率和準(zhǔn)確性，建議用TPPA復(fù)檢。

梅毒；TP-ELISA；RPR；金標(biāo)法；TPPA

近年來我國梅毒的感染率呈現(xiàn)大幅度上升的趨勢，梅毒螺旋體抗體的檢測是主要的診斷參考。梅毒是梅毒螺旋體感染引起的性傳播疾病，具有高傳染性[1]。梅毒螺旋體一旦侵入人體，一段時間后血清中可產(chǎn)生特異性的抗體和非特異性的“反應(yīng)素”?，F(xiàn)臨床上常用實驗室檢測方法有：TPELISA、RPR、金標(biāo)法、TPPA法等但如何選擇或聯(lián)合檢測，各實驗室不盡相同。所以應(yīng)建立一套適合自己的完整的梅毒實驗室檢測報告系統(tǒng)，以便為臨床提供快速可靠的參考結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 血清標(biāo)本血清標(biāo)本均來自我院2011年7月至2012年6月住院患者常規(guī)輸血前檢查、傳染病四項檢查。15296份血清標(biāo)本中，經(jīng)TP-ELISA篩查，選取198例標(biāo)本。

1.2 試劑TP-ELISA試劑盒由北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，RPR試劑盒是由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，金標(biāo)試劑盒是由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，TPPA試劑盒是由日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)。所有的試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法患者送檢的15296份血清標(biāo)本中，經(jīng)TP-ELISA篩查后，選取198例(含陽性、陰性)標(biāo)本。分別用RPR、金標(biāo)法、TPPA法進(jìn)行檢測，TPPA作為確認(rèn)試驗。經(jīng)TPPA確認(rèn)有96例陽性標(biāo)本和102例陰性標(biāo)本。(1)ELISA檢測：為雙抗原夾心一步法，用Wellscan MK2酶免分析儀檢測，具體操作按試劑說明書進(jìn)行。(2)RPR檢測：在卡片圓圈中加入50 μl待測血清，用滴管和專用針頭，加1滴抗原懸液，用手或旋轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)動卡片8 min，出現(xiàn)大小不等的黑色凝集塊為陽性。(3)TPPA檢測：血清25μl，樣品稀釋液100μl，充分混勻后加25 μl。于專用微孔板，再加入樣品稀釋液25μl倍比稀釋，重復(fù)上述操作，將血清稀釋為1：40，再加入TPPA液25μl，充分混勻，30℃孵育120 min，稀釋倍數(shù)為1：80。經(jīng)檢測探頭(LCD)檢測計算出現(xiàn)凝塊形成大小(SPC)，并根據(jù)SPC判斷結(jié)果，最終稀釋倍數(shù)1：80以上判定為陽性(試劑盒操作說明)。(4)金標(biāo)法檢測：將商品試紙條帶置于平坦臺面上，在加樣孔內(nèi)加入100μl血清樣本，肉眼觀察在反應(yīng)區(qū)出現(xiàn)紅色條帶為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 11．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。TPPA、TP-ELISA、RPR、金標(biāo)法4種方法對梅毒特異性抗體的定性檢測結(jié)果采用陽性率表示，以TPPA為標(biāo)準(zhǔn)對另外三種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行比較采用χ2檢驗，以α=0.05為檢驗水平，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

在15296份血清標(biāo)本中，經(jīng)TP-ELISA篩查，陽性標(biāo)本228例，陰性標(biāo)本15068例。隨機(jī)選取98例陽性結(jié)果和100份陰性血清標(biāo)本。198例標(biāo)本經(jīng)TPPA檢測有96例為陽性、102例陰性；RPR檢測有76例陽性、122例陰性；金標(biāo)法檢測有91例陽性、107例陰性。結(jié)果見表1。

表1 3種檢測方法與TPPA的比較

在TPPA確認(rèn)的96例陽性標(biāo)本中，TP-ELISA檢測有95例為陽性其敏感性為98.97%(95/96)；經(jīng)RPR法檢測有71例為陽性其敏感性為73.96% (71/96)；經(jīng)金標(biāo)法檢測有89例為陽性其敏感性為92.70%(89/96)。TPPA確認(rèn)的102例陰性標(biāo)本中，TP-ELISA檢測有3例為陽性其特異性為97.06% (99/102)；經(jīng)RPR法檢測有5例為陽性其特異性為95.07%(97/102)；經(jīng)金標(biāo)法檢測有2例為陽性其特異性為98.04%(100/102)，詳見表2。

表2 檢測方法的敏感性、特異性(與TPPA比較)

將TP-ELISA、RPR、金標(biāo)與TPPA的敏感性與TPPA進(jìn)行比較，并利用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果見表3。

表3 TP-ELISA、RPR、金標(biāo)與TPPA的χ2檢驗

3 討論

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種常見的性傳播疾病，梅毒螺旋體可侵入全身各個器官。人體感染后數(shù)周血清中可產(chǎn)生抗類脂抗原的非特異性抗體(即反應(yīng)素)和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體。而非特異性抗體檢出的時間要比特異性抗體的檢出時間遲2周[2]。

RPR檢測的是抗類脂抗體(即非特異性抗體)，一般是用牛心類脂質(zhì)作為抗原，所檢測的抗體是針對梅毒感染后宿主細(xì)胞釋放的類脂質(zhì)和螺旋體表面脂質(zhì)(即反應(yīng)素)而其他破壞機(jī)體的過程也可產(chǎn)生反應(yīng)素所以RPR陽性者并不一定感染梅毒螺旋體。懷孕、SLE、風(fēng)疹、水痘、病毒肝病、RF等RPR同樣可以呈現(xiàn)假陽性[3]，因此該試驗只能作為篩選試驗，且其敏感性較低。在梅毒感染的不同時期檢出率差別較大。在梅毒感染的最初4周內(nèi)，由于機(jī)體產(chǎn)生的反應(yīng)素不足，無法用RPR檢測出來，一般為陰性。4周后陽性率逐漸高至10%一30%，6～8周后達(dá)100%，經(jīng)過治療或晚期梅毒反應(yīng)素下降，有25%自然轉(zhuǎn)陰，治愈后3～6月逐漸消失，因此RPR檢測對療效的觀察有著重要的意義。

梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)是將純化的梅毒螺旋體特異性抗原包被在凝膠顆粒上，當(dāng)抗原和標(biāo)本血清中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng)時就會出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象，且與抗體的濃度成正相關(guān)。該抗體在血清中持續(xù)存在，不易轉(zhuǎn)陰，也不隨病程發(fā)展和治療好壞而變化，可終身保留，因此TPPA具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點，是目前國內(nèi)常用的梅毒螺旋體確證實驗之一[4,5]。，TPPA的特異性仍只能達(dá)99%左右，不能絕對排除假陽性。TPPA法操作復(fù)雜、試劑昂貴、結(jié)果判斷難以自動化，限制了該方法用于大規(guī)模的標(biāo)本檢測。

TP-ELISA是近年梅毒螺旋體基因工程的研制成功而建立起來的一種血清學(xué)檢測方法。具有雙重識別機(jī)制，使假陽性和假陰性不易出現(xiàn)，故有較高的特異性和敏感性[6]。而且梅毒螺旋體抗體出現(xiàn)的時間較非特異性抗體早1周左右，大約在感染后2～4周就出現(xiàn)IgM抗體，4～6周后即出現(xiàn)IgG抗體，即使經(jīng)抗梅毒治療梅毒螺旋體抗體仍可終生存在。從試驗結(jié)果來看ELISA檢出的98份陽性標(biāo)本中有96份TPPA確認(rèn)為陽性，此方法與TPPA確認(rèn)試驗有很好的一致性，而且此方法操作簡便，易自動化，適合大批量的檢測。但該方法對一期梅毒，三期梅毒和治療后梅毒檢測的不同步，往往可出現(xiàn)假陽性，造成漏檢。

金標(biāo)法是利用免疫層析分析的原理來檢測血清中是否存在梅毒抗體。該檢測方法快捷、簡單，不需要特殊設(shè)備，方便單人份檢測，適合于急診、門診患者和基層醫(yī)院。但其敏感性和特異性比TPPA和TP-ELISA法稍低。因此，該方法檢出的結(jié)果需進(jìn)一步復(fù)查。

綜上所述，RPR法適用于初步的篩查，金標(biāo)法適合于少量、單個的急門診患者的檢測，而TPELISA法則適用于大批量的檢測，在一定程度上可

替代TPPA試驗。TPPA法可用于復(fù)檢。

[1]徐如梅,沈菁,陳雯,等.CMIA法與TPPA法對梅毒螺旋體抗體檢測的相關(guān)性研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2012,30(5):441-443.

[2]陳遠(yuǎn)平,黎金鳳.不同梅毒血清學(xué)檢測方法比較及臨床應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2011,16(8):1937.

[3]肖勇健.2450例梅毒血清學(xué)結(jié)果分析[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報, 2008,5(3):65.

[4]黎新桂,周紅翠,尹承祥.三種梅毒血清試驗方法的應(yīng)用評估[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2012,30(3):276-277.

[5]華文清,孫繼云.4種梅毒血清學(xué)檢測方法的評價[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(9):1704.

[6]王曉萍,涂彩霞,漆巍慶.TP-TRUST與TP-ELISA法檢測梅毒結(jié)果回顧分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(5):570-571.

R759.1,R446.62

A

1674-1129(2013)02-0173-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.02.028