非小細(xì)胞肺癌組織中THRSP、ACACA的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系

康華麗 劉俊玲

肺癌為常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占75%～85%,包括肺鱗癌、肺腺癌、大細(xì)胞癌,NSCLC患者總體預(yù)后較差[1]。臨床治療多采用生物治療、放化療、分子靶向治療等,但患者死亡率仍未顯著降低[2]。目前NSCLC早期診斷水平有限,大部分患者確診時已發(fā)生區(qū)域或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,所以積極探究NSCLC進(jìn)展、預(yù)后相關(guān)影響因子對腫瘤治療至關(guān)重要[3]。既往研究發(fā)現(xiàn)THRSP蛋白的基因在乳腺癌中呈最高量表達(dá),其在乳腺腫瘤中可控制腫瘤代謝、生長[4]。ACACA屬于乙酰輔酶A羧化酶家族(ACC)成員,含生物素,可催化乙酰輔酶A生成丙二酰輔酶A,參與細(xì)胞內(nèi)脂肪酸限速合成[5]。既往研究證實ACACA在肝細(xì)胞肝癌中呈上調(diào)表達(dá),且與患者不良預(yù)后有關(guān)[6]。但是目前涉及到THRSP、ACACA與NSCLC的研究尚少。因此,本研究主要探討THRSP、ACACA在NSCLC癌組織中的表達(dá)水平及其臨床預(yù)后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年12月我院收治的112例NSCLC患者作為研究對象,術(shù)中收集NSCLC患者的癌組織標(biāo)本(NSCLC組)及對應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本(癌旁組)。男性66例,女性46例;年齡41～75歲,平均年齡(52.43±5.57)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理切片確診為NSCLC;②行手術(shù)治療患者;③臨床及隨訪治療完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①入組前接受放化療者;②心肝腎等組織器官功能異常者;③合并其他部位惡性腫瘤者。經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 THRSP、ACACA檢測 采用免疫組化法檢測THRSP、ACACA在NSCLC組織及癌旁組織中的表達(dá),操作流程如下:①主要試劑與儀器:免疫組化鏈霉菌親生物素蛋白-過氧化物酶連接(SP)試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司),兔抗人THRSP多克隆抗體(上海紀(jì)寧生物科技有限公司),鼠抗人ACACA多克隆抗體(美國Sigma公司),二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑(北京博奧森公司)。②檢測方法:常規(guī)固定(4%多聚甲醛)NSCLC組織及癌旁組織標(biāo)本,60℃熔點石蠟包埋切至4 μm,脫蠟(二甲苯)、脫水(不同梯度的酒精),蘇木精染色液染色確定病變區(qū)域,制片,檸檬酸鈉溶液高壓高溫修復(fù)抗原,冷卻后加入磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次,5 min/次;山羊血清封閉液內(nèi)滴加兔抗人THRSP多克隆抗體(稀釋比1∶500)、鼠抗人ACACA多克隆抗體(稀釋比1∶2000),4 ℃孵育,PBS清洗3次,3 min/次;加入兔抗鼠二抗(稀釋比1∶500),37 ℃環(huán)境內(nèi)孵育半小時,PBS沖洗3次。DAB顯色劑顯色3 min,蘇木精復(fù)染、酒精脫水、樹脂膠封片,高倍顯微鏡下觀察THRSP、ACACA蛋白表達(dá)水平情況。③判定標(biāo)準(zhǔn):顯微鏡示細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞百分比:<5%為0分、5%～25%為1分、25%～50%為2分、50%～75%為3分、>75%為4分。陽性細(xì)胞染色強度:無著色為0分、淺黃或黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。染色指數(shù)(SI)=染色強度×陽性細(xì)胞百分比,陽性:SI>3分,陰性:SI≤3分。

1.2.2 隨訪 連續(xù)3年對出院NSCLC患者行電話、門診復(fù)查隨訪,記錄患者生存狀況,截止至2022年12月,若患者死亡則隨訪終止。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

統(tǒng)計軟件為SPSS 24.0,采用例數(shù)和百分比(%)描述計數(shù)資料;采用χ2檢驗分析THRSP、ACACA表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系;采用多因素Cox回歸分析影響NSCLC患者預(yù)后的相關(guān)因素,雙側(cè)檢驗水準(zhǔn)α為0.05。

2 結(jié)果

2.1 2組THRSP、ACACA表達(dá)情況比較

NSCLC組THRSP、ACACA陽性表達(dá)率高于癌旁組(P<0.05),見表1。

表1 2組THRSP、ACACA表達(dá)情況比較(例,%)

2.2 THRSP、ACACA表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

不同性別、年齡、原發(fā)腫瘤大小、浸潤深度的NSCLC患者THRSP、ACACA表達(dá)情況比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);低分化、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者THRSP、ACACA陽性表達(dá)率高于中/高分化、TNM分期為Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05),見表2。

表2 THRSP、ACACA表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.3 NSCLC患者的預(yù)后生存情況及單因素分析

112例NSCLC患者隨訪3年后,62例患者存活,總體生存率為55.36%(62/112)。低分化、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、THRSP陽性表達(dá)、ACACA陽性表達(dá)NSCLC患者的3年生存率低于中/高分化、臨床分期為Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、THRSP陰性表達(dá)、ACACA陰性表達(dá)患者(P<0.05),見表3。

表3 NSCLC患者預(yù)后的單因素分析(例,%)

2.4 NSCLC患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

將NSCLC患者的預(yù)后作為因變量,將單因素分析有意義的指標(biāo)作為自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析,結(jié)果顯示,低分化、TNM分期為Ⅲ期、THRSP陽性表達(dá)、ACACA陽性表達(dá)是NSCLC患者預(yù)后的危險因素(P<0.05),見表4。

表4 NSCLC患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

3 討論

肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤,其中NSCLC發(fā)病率較高,居所有類型惡性腫瘤首位[7],但其癥狀無典型特征,早期難以確診,表現(xiàn)出呼吸困難、咳嗽、咳血等癥狀時已為中晚期,大多數(shù)已出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞浸潤及原發(fā)性病灶轉(zhuǎn)移,無法進(jìn)行手術(shù)治療[8]。隨診斷技術(shù)的發(fā)展,早期NSCLC檢出率升高,但預(yù)后仍較差。因此,行預(yù)后的早期評估可為臨床治療提供指導(dǎo)方案。

ACACA位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),為乳脂合成中的重要酶系之一,通過催化乙酰輔酶A生成丙二酰輔酶A,用于不同代謝反應(yīng)過程,可促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂肪酸從頭合成[9-10]。較正常細(xì)胞用于貯存能量相比,合成的脂質(zhì)作為促進(jìn)癌細(xì)胞生存、生長原料,所以脂肪形成與促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、存活有關(guān),癌細(xì)胞的脂肪酸合成被激活[11]。有研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌、前列腺癌中ACACA呈過度表達(dá)[12]。

還有研究表明,磷酸化ACACA蛋白表達(dá)和胃癌的腫瘤分級、發(fā)病階段具有相關(guān)性[13]。代謝組學(xué)分析證實,ACACA缺乏的肝組織中抗氧化劑含量更高,ACACA參與肝細(xì)胞生長中的抗氧化調(diào)節(jié)?；蚨繖z測發(fā)現(xiàn),肝細(xì)胞癌腫瘤組織中ACACA表達(dá)水平高于正常肝臟組織,說明可作為預(yù)測疾病預(yù)后的生物標(biāo)志或肝細(xì)胞癌的治療新靶點[14]。本研究結(jié)果顯示,NSCLC組THRSP陽性表達(dá)率高于癌旁組(P<0.05);不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的THRSP表達(dá)情況比較有差異(P<0.05)。提示THRSP在NSCLC患者中呈高表達(dá),且與病情進(jìn)展有關(guān)。分析可能的原因,癌細(xì)胞增殖、存活有ACC活性強的作用,其可參與NSCLC發(fā)生、發(fā)展[15]。ACC分為ACCA、ACCB兩種亞型,由不同基因編碼,前者存在于脂肪合成活躍的肝臟、脂肪組織、乳腺,與脂肪酸合成相關(guān),有研究發(fā)現(xiàn),肝癌細(xì)胞HepG2中ACC表型為ACCA;后者存在于心肌、骨骼肌,與脂肪酸氧化相關(guān);故抑制脂肪酸合成為新的腫瘤治療手段[16-17]。

THRSP被發(fā)現(xiàn)于研究脂肪組織中甲狀腺素的反應(yīng)時,THRSP蛋白的編碼基因處于11q13的染色體上,該基因存在于肝臟、脂肪、乳腺等脂肪生成組織內(nèi)。THRSP蛋白可迅速對甲狀腺素刺激和高葡萄糖水平產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。甲狀腺激素可調(diào)節(jié)THRSP轉(zhuǎn)錄,繼而調(diào)節(jié)脂肪酸合成酶基因轉(zhuǎn)錄[18]。有研究人員提取肝組織胞漿蛋白行雙向凝膠電泳證明THRSP為胞漿蛋白,還有研究人員通過免疫組化法證實THRSP處于胞核[19]。本研究結(jié)果顯示,NSCLC組ACACA陽性表達(dá)率高于癌旁組(P<0.05);不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的ACACA表達(dá)情況比較有差異(P<0.05)。提示ACACA在NSCLC患者中呈高表達(dá),且與病情進(jìn)展有關(guān)。究其原因,THRSP蛋白陽性過表達(dá)與其基因擴增有關(guān),從而介導(dǎo)癌癥發(fā)生。李潤華等研究顯示,THRSP基因過表達(dá)后蛋白表達(dá)上升,脂質(zhì)合成加快影響乳腺癌細(xì)胞內(nèi)信號通路傳導(dǎo),促進(jìn)脂質(zhì)型乳腺癌發(fā)生、發(fā)展[20]。本研究結(jié)果顯示,THRSP、ACACA陽性表達(dá)NSCLC患者的3年生存率低于THRSP、ACACA陰性表達(dá)患者(P<0.05),提示THRSP、ACACA高表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后不良有關(guān),可作為評估NSCLC預(yù)后的標(biāo)志物。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,低分化、TNM分期為Ⅲ期、THRSP陽性表達(dá)、ACACA陽性表達(dá)是NSCLC患者預(yù)后的危險因素(P<0.05),提示THRSP、ACACA過表達(dá)會增加NSCLC預(yù)后不良風(fēng)險,監(jiān)測其水平變化可行預(yù)后預(yù)測。

綜上所述,THRSP、ACACA在NSCLC組織中均呈高表達(dá),且與臨床病理特征及預(yù)后有關(guān),可作為NSC-LC預(yù)后評估的生物學(xué)標(biāo)志物。