蒼耳子的炮制工藝與質(zhì)量控制方法研究進展*

★ 韓燕全 洪燕 孫艷華 李光東 汪永忠 高家榮 夏倫祝*

(1. 安徽省中醫(yī)院中藥制劑三級實驗室 合肥 230031； 2. 安徽中醫(yī)學院 合肥 230031)

蒼耳子的炮制工藝與質(zhì)量控制方法研究進展*

★ 韓燕全1**洪燕2孫艷華2李光東2汪永忠1高家榮1夏倫祝1***

(1. 安徽省中醫(yī)院中藥制劑三級實驗室 合肥 230031； 2. 安徽中醫(yī)學院 合肥 230031)

對近年來蒼耳子的炮制工藝和質(zhì)量控制方法研究概況進行系統(tǒng)介紹。通過對蒼耳子的凈制工藝、炒制工藝、炮制機理以及主要的質(zhì)量控制方法的研究文獻進行整理、歸納并予以綜述。旨在為蒼耳子的炮制工藝、減毒機理和質(zhì)量控制方法的進一步研究提供理論依據(jù)。

蒼耳子；炮制工藝；質(zhì)量控制

蒼耳子來源為菊科植物蒼耳XanthiumsibiricumPart．的成熟帶總苞的果實[1]。蒼耳子在我國有悠久的藥用歷史，其始以葈耳實之名載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品；至唐代醫(yī)藥學家孫思邈所撰《千金·食治》一書始以蒼耳子之名收錄，后代本草專著多有記載。蒼耳子具有散風熱、通鼻竅之功效，是中醫(yī)臨床上散熱、解瘡毒、通鼻竅、痹癥的要藥，主要用于風寒頭痛，鼻淵流涕，風疹痰癢，濕痹拘攣等病癥。2010年版《中國藥典》一部蒼耳子項下記載其味辛、苦，性溫，有毒。關(guān)于蒼耳子的毒性，早在北宋期間成書的藥學專著《證類本草》就已記載：“蒼耳子，味苦、辛，微寒，有小毒”；中醫(yī)臨床經(jīng)驗也認為蒼耳子生品有毒，應(yīng)炮制后入藥使用[1，2]。隨著現(xiàn)代藥學的發(fā)展，蒼耳子的炮制工藝、減毒機理和質(zhì)量控制方法研究均取得了一定的成果，本文著重對蒼耳子的炮制工藝和質(zhì)量控制方法等方面的研究進展進行綜述，以期為蒼耳子的進一步研究開發(fā)和臨床合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 炮制工藝研究

在治療鼻病的大部分中藥復(fù)方制劑中,蒼耳子是最為常用的一味中藥，但其“有毒”，屬于有毒中藥范疇，近年來也頻有關(guān)于蒼耳子中毒的報道[3]。蒼耳子的炮制是其減毒的重要途徑，自古以來積累了豐富的經(jīng)驗，其炮制手段也多種多樣。縱觀近年文獻研究和臨床應(yīng)用實際，蒼耳子的炮制研究主要集中在凈制去刺、炒制處理和炮制機理等方面。

1.1 凈制工藝

蒼耳子凈制的主要目的是去刺和雜質(zhì)。傳統(tǒng)經(jīng)驗認為其“毒性在刺鉤上，去刺即除毒性”，中醫(yī)臨床也一直沿用去刺使用的習慣，因此，其凈制研究主要內(nèi)容是探討如何合理、高效的去刺，達到存效減毒的目的。本品在去刺時, 關(guān)鍵要防止果實被壓碎, 否則達不到去刺的目的?！吨袊幍洹?010版規(guī)定蒼耳子的去刺方法為清炒后碾去刺，篩凈，用時搗碎。此方法在實際操作過程中有其不足之處：傳統(tǒng)去刺多以電碾、鐵碾船等工具進行，去刺過程易導(dǎo)致部分蒼耳子易被碾碎, 種仁被擠出篩掉, 造成損耗率較高、去刺不完全, 且工作效率低下。劉氏等[4]比較了FN- 9型鐵輥碾米機、YF-240型粉碎和粉碎用鋼片磨粉機三種機械的去刺效果，通過反復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)，采用FN- 9型鐵輥碾米機得到的炮制品果實幾乎無刺, 且完整無破碎, 少部分呈扁狀，去刺效率高、結(jié)果最為理想。先去刺后炒制從實際可行性和炮制效果來說都較合理，目前商品藥材也多以去刺的生蒼耳子銷售，說明機械去刺的方法更為簡單、高效、已在實際生產(chǎn)中得到較普遍應(yīng)用。

1.2 炒制工藝

蒼耳子的常用炒制方法為清炒法和砂燙法。實際操作中，清炒法存在火候不易掌握，蒼耳子鉤刺相互連接“抱團”，受熱不均勻，容易炒成夾生或焦糊，影響藥品質(zhì)量。故目前的炮制工序，多采用先機械去刺，再以砂燙法取代傳統(tǒng)的清炒法炮制。具體操作為：取通過 20目篩的潔凈細砂, 用量是以能掩蓋所加藥物為度，將砂置鍋內(nèi), 武火加熱, 沙炒至靈活狀態(tài), 投入去刺或未去刺的蒼耳子果實, 用中火炒至外表呈深黃色, 有爆裂聲, 取出, 篩去砂, 放涼, 用時搗碎。由于砂粒細小可以滲入到蒼耳刺中，使蒼耳子受熱均勻，增加了傳熱表面積，提高熱利用率，可達到較好的炒制效果。研究人員通過反復(fù)實驗比較清炒法與砂燙法，得出結(jié)論：砂燙法的火候更容易掌握, 由于溫度較高且受熱面積大而均勻, 故其炮制品在內(nèi)在質(zhì)量和外觀色澤等諸方面均比清炒法炮制品為好, 成品藥香酥利于粉碎。因此，砂炒法炮制蒼耳子,其效果較理想[3]。程氏等[5]研究了烘制法炮制蒼耳子的工藝，實驗將凈制的生蒼耳子，置于控溫烘箱中，設(shè)置7個不同溫度(140，150，160，170，180，190和200℃)和8個不同時間(15，30，45，60，75，90，105和120min) 熱處理后的蒼耳子中綠原酸的含量，并與生蒼耳子中綠原酸的含量進行了比較分析,結(jié)果表明不同加熱溫度和時間均會對蒼耳子中綠原酸的含量產(chǎn)生較明顯影響，溫度比時間的影響更大，適當?shù)募訜崮芴岣呱n耳子中綠原酸的含量。烘制法的優(yōu)點在烘制工藝易于控溫，便于操作，節(jié)省人力，減少污染等，但其科學性需要進一步的深入研究。

2 炮制機理研究

蒼耳子生品有毒，研究認為經(jīng)炮制后毒性明顯降低，但蒼耳子炮制后降毒機理還不完全清楚。研究認為，蒼耳子脂肪油中所含的毒蛋白是其主要毒性成分之一，經(jīng)過加熱炮制可使毒蛋白變性失活，達到減毒的目的。陳氏[6]通過對蒼耳子不同炮制品的脂肪油、水浸出物含量、薄層色譜差異、鎮(zhèn)痛實驗和急性毒性實驗5個方面，比較了蒼耳子不同炮制品成分、藥效的差異，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)蒼耳子經(jīng)炒制和烘制后, 可顯著提高水溶性浸出物的含量；生品和各炮制品的脂肪油薄層層析結(jié)果表明，炮制過程對脂肪油中所含組分無明顯影響；鎮(zhèn)痛和毒性實驗結(jié)果表明，炮制可以達到減毒增效的目的。胡氏等[7]利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油、采用超臨界CO2萃取法提取脂肪油; 采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對蒼耳子及其炮制品揮發(fā)油和脂肪油的化學成分進行定性分析。實驗中生蒼耳子揮發(fā)油鑒定了18種化學成分，炒蒼耳子揮發(fā)油鑒定了13 種化學成分；生炒蒼耳子脂肪油均鑒定了4 個組分。結(jié)果表明蒼耳子炮制前后揮發(fā)油中化學成分存在差異，但脂肪油成分基本一致。吳氏等[8]通過小鼠急性毒性藥理試驗比較了炒制前后毒性部位的毒性差異；同時對炮制前后前后揮發(fā)油的化學成分變化、超臨界CO2萃取物成分的變化、蛋白質(zhì)成分及含量變化進行了系統(tǒng)的比較研究，結(jié)果表明蒼耳子炒制后醇提物的小鼠LD50值約為生品的3倍，炒制前后提取的揮發(fā)油成分“質(zhì)”和“量”差異明顯，炒制后的蛋白質(zhì)提取率也明顯降低，說明炮制可達到明顯的減毒效果。

早在1998年就有研究報道蒼耳子的有毒成分可能為水溶性苷類[9]。大量研究表明，蒼術(shù)苷及羧基蒼術(shù)苷可抑制體內(nèi)ADP/ATP對蛋白的轉(zhuǎn)運，并帶來嚴重的血糖下降，從而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂，因此被認為是蒼耳子毒性的主要成分。符氏等[10]采用紫外分光光度法，以羧基蒼術(shù)苷為對照，建立了總蒼術(shù)苷含量測定方法，并對5批蒼耳子水提物的總蒼術(shù)苷進行了含量測定，結(jié)果表明所建立的測定方法經(jīng)濟、簡便、重復(fù)性好，生蒼耳子與蒼耳子飲片中總蒼術(shù)苷含量差別較大，建議有必要建立蒼耳子毒性成分限量檢查標準。朵氏等[11]研究了炒制對蒼耳子進行了凈制、炒黃、炒焦和炒碳加工炮制，測定其有毒成分羥基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的含量，結(jié)果顯示，生品中羥基蒼術(shù)苷的含量較高，而炒黃后其含量下降達90%，炒制過程中羥基蒼術(shù)苷轉(zhuǎn)化為蒼術(shù)苷，炒焦的炮制品中基本不含羥基蒼術(shù)苷，蒼術(shù)苷含量也小幅下降，實驗結(jié)果認為蒼耳子應(yīng)按《中國藥典》2010版標準炒制黃褐色方可起到減毒存效的作用。

3 蒼耳子的質(zhì)控方法

蒼耳子所含化學成分復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油、蒽醌類、有機酸類、倍半萜內(nèi)酯、糖苷(甙)類以及脂肪油成分等。因此其質(zhì)量控制方法的報道文獻也相對較多，近年研究包括傳統(tǒng)的薄層色譜、紫外分光光度法和發(fā)展較快的是高效液相色譜法等。

3.1 薄層色譜法

薄層色譜法是快速分離和定性分析藥材質(zhì)量的一種很重要的實驗技術(shù)，從50年代發(fā)展起來至今，仍被廣泛采用。黃氏等[12]按照(中國藥典》2005版規(guī)定的蒼耳子薄層色譜法，對蒼耳子、南蒼耳子與蒼耳子對照藥材進行了比較，實驗以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5 )上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置氨氣中熏至斑點顯色清晰，結(jié)果蒼耳子、南蒼耳子與蒼耳子對照藥材在相同位置顯示相同顏色的斑點，但是對蒼耳子和南蒼耳子進行無法有效鑒別。實驗對兩者的乙醚提取物以環(huán)己烷-醋酸乙醋-甲酸(10∶2∶0.2 ) 為展開劑展開后，發(fā)現(xiàn)兩者的薄層色譜圖譜存在明顯差異，蒼耳子比南蒼耳子多出兩個紫紅色熒光斑點，此實驗方法為鑒別蒼耳子和南蒼耳子提供依據(jù)。吳氏等[13]采用薄層色譜法，以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G 板為固定相，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1) 為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，采用蒼耳子對照藥材和綠原酸對照品為對照，結(jié)果表明供試品與蒼耳子對照藥材及綠原酸對照品的薄層色譜相應(yīng)位置上，分別可見相同顏色的熒光斑點。實驗采用新的展開系統(tǒng)可以更好地鑒別蒼耳子，所建立的薄層色譜法，具有快速，簡便的特點，可用于蒼耳子的定性鑒別。

3.2 紫外-可見分光光度法

蒼耳子中含有蒽醌、酚酸和揮發(fā)油等有效部位。王氏等首次[14]以大黃素為對照品，以醋酸鎂-甲醇液為顯色劑，波長為426 nm，采用分光光度法測定蒼耳子中總蒽醌的含量，結(jié)果表明：蒼耳子樣品在顯色后在90min內(nèi)測定穩(wěn)定性好，蒼耳子樣品的平均含量為26.27μg·g-1左右，此法較之傳統(tǒng)的曹氏法與羅氏法測定總蒽醌更簡便、快速。Ting HAN等[15]，運用層析方法分離純化不同品種蒼耳屬植物果實中的總酚酸，以綠原酸作對照,用紫外分光度法測定蒼耳子酚酸類化合物的含量以評價其品質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同品種和不同居群蒼耳子藥材中，總酚酸含量的差異較為顯著，若采用總酚酸含量作為指標評價蒼耳子藥材的品質(zhì)，以上海和福建三明兩產(chǎn)地的蒼耳子為優(yōu)質(zhì)種群。上述實驗建立的紫外-可見分光光度法，操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好，目前仍是蒼耳子和有效部位含量測定可以借鑒的主要方法。

3.3 高效液相色譜法

研究表明,蒼耳子的毒性成分可能是脂肪油中所含的水溶性苷類成分包括羧基蒼術(shù)苷與蒼術(shù)苷以及其衍生物[16],因此，建立蒼耳子中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的準確含量測定方法對與控制蒼耳子的質(zhì)量尤為重要。朵氏等[17]采用高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)法，以Agilent SB-phenyl色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)為固定相，以乙腈-0.01molL-1磷酸二氫鈉溶液為流動相，建立了同時測定蒼耳子中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷含量的方法，并對34批次蒼耳子藥材及飲片的進行了測定，結(jié)果表明不同來源的蒼耳子中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的含量差異較大，實驗建立的方法簡便、可行，重現(xiàn)性好，為蒼耳子的毒性成分質(zhì)量控制提供了參考。吳氏等[18]采用HPLC法；以流動相為乙腈-0.1 %磷酸水溶液(10∶90)；檢測波長為 327nm，建立了同時測定炒蒼耳子配方顆粒中綠原酸和咖啡酸的高效液相色譜法，所建立的方法簡便、準確，可同時測定炒蒼耳子配方顆粒中綠原酸和咖啡酸的含量。

超高液相色譜法(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)法較 HPLC 檢測,具有分析時間短, 靈敏度高，有機溶劑用量少, 分離效率高等優(yōu)勢。楊氏等[19]首次采用UPLC法，以流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液，檢測波長為220和327nm,同時檢測蒼耳子中原兒茶酸、新綠原酸、隱綠原酸和1,3-二咖啡?？鼘幩岬暮?，為蒼耳子及其相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供了快速準確的檢測方法。秦氏等[20]建立了類似的UPLC法，對蒼耳子配方顆粒中5種酚酸類成分進行了同時測定，該方法快速、準確、重復(fù)性好、分離度高，可有效控制炒蒼耳子配方顆粒的質(zhì)量。

3.4 指紋圖譜法

指紋圖譜技術(shù)可體現(xiàn)中藥多成分、整體性的特點，可較全面反映藥材的質(zhì)量，已成為國際公認的控制中藥質(zhì)量的有效手段之一。最為常用的指紋圖譜技術(shù)是HPLC指紋圖譜，近年來在中藥質(zhì)量分析方面的應(yīng)用實例越來越多。王氏等[21]以甲醇-0.1%磷酸為流動相梯度洗脫，建立蒼耳子藥材的HPLC-UV 指紋圖譜分析方法，分別測定10批蒼耳子及炒蒼耳子醇提物的指紋圖譜，并作了相似度比較，結(jié)果表明不同批次蒼耳子和炒蒼耳子相似度均存明顯差異，炒制后蒼耳子的相似度差異更大，部分峰面積值明顯降低，但炮制后毒性降低的原因仍需要進一步深入研究。本課題組[22]則采用乙腈-0.1%磷酸為流動相梯度洗脫，首次建立了26批不同產(chǎn)地蒼耳子藥材的UPLC指紋圖譜，結(jié)果共確定了19個共有峰，并歸屬了其中的9個色譜峰，其中21批樣品相似度大于0.9；實驗還采用了聚類分析和主成分分析法對指紋圖譜的結(jié)果進行了分析，26批藥材可大致聚成6類，確定了6個主成分的分值，累計變量貢獻值達到81.140%，實驗建立的方法可用于蒼耳子藥材質(zhì)量評價。

3.5 其他方法

除了上述較為常用的檢測方法，GC-MS、LC-MS等聯(lián)合檢測方法在蒼耳子的質(zhì)量控制中也有研究報道。阮氏等[23，24]，以DB-5熔融毛細管氣相色譜柱，質(zhì)譜電離方式EI,掃描質(zhì)量范圍50-800amu, SCAN模式的條件下，建立了蒼耳子中油脂成分的GC-MS分析法，以正二十烷為內(nèi)標,對微波輔助提取的蒼耳子中的油脂成分進行了GC-MS法分析。實驗鑒定出了13種油脂成分,并對不同批次以及不同產(chǎn)地的蒼耳子樣品進行了對比研究，建立的方法可用于蒼耳子油脂類成分的鑒定和質(zhì)量控制。楊氏等[25]根據(jù)化合物的紫外光譜、液相色譜保留時間及質(zhì)譜數(shù)據(jù)等綜合信息鑒別蒼耳子藥材中的酚酸類成分，實驗根據(jù) ESI負離子檢測獲得的準分子離子峰所提供的化合物相對分子質(zhì)量及選擇離子二級掃描質(zhì)譜碎片信息，結(jié)合紫外光譜、液相色譜保留時間以及參考對照品，對蒼耳子 UPLC分離出的一系列酚酸化合物進行了分析和鑒定，確認了蒼耳子藥材提取物中 9個酚酸的化學歸屬，該方法與指標成分含量測定相結(jié)合，對于蒼耳子藥材及其相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢測和控制提供了新的手段。

4 結(jié)語

蒼耳子所含成分種類眾多，包括脂肪油酯、倍半萜內(nèi)酯、酚酸及其衍生物、水溶性二萜苷、噻嗪雙酮以及大黃酚類化合物等[25]；其藥理作用亦較為廣泛，具有降血糖鎮(zhèn)痛、消炎、抗菌、抗病毒、抗氧化和抗癌等多種活性[26-28]；且我國的蒼耳子藥材資源豐富，具有較好的開發(fā)利用前景。但是，蒼耳子生品有毒，需炮制后入藥，使其臨床使用受到一定限制，這與其缺乏科學的炮制工藝規(guī)范和質(zhì)量標準有關(guān)。目前，雖然對蒼耳子化學成分和藥理方面取得了一定進展，但是其炮制機理和整體質(zhì)量控制方法研究尚不夠深入，有待進一步提高。筆者認為應(yīng)借助現(xiàn)代技術(shù)方法，從蒼耳子炮制前后的整體質(zhì)量變化與整體藥效、毒性代謝等方面對蒼耳子的炮制機理進行研究，闡明解其炮制前后藥效、毒性變化的內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ),制定其科學的質(zhì)量控制標準，為其合理應(yīng)用和開發(fā)提供依據(jù)。

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AdvanceonProcessingTechnologyandQualityControlMethodsofXanthiiFructus

HANGYan-quan,HONGYan,SUNYan-hua,LIGuang-dong,WANGYong-zhong,GAOJia-rong,XIALun-zhu

The related research literature of processing technology and quality control methods were reviewed in this article. To summarize the references of Xanthii Fructus which include both net-election technology, fry technology, processing mechanism and quality control methods．The information summarized here will provide reference for the further research of Xanthii Fructus．

Xanthii Fructus; Processing Technology; Quality Control Methods

國家自然科學基金項目(項目編號：81102811)；安徽省自然科學基金項目(項目編號：10040606Q40)；國家中醫(yī)藥重點學科臨床中藥學建設(shè)項目(國中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]32號)。

**作者簡介：韓燕全，男(1977-)，副主任中藥師，研究方向為中藥炮制與質(zhì)量控制，E-mail:hyquan2003@163.com。

***通訊作者：夏倫祝，男(1956-)，教授、主任藥師，主要從事中藥質(zhì)量控制和制劑研究 。

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2013-06-26)