丙型肝炎3種檢測(cè)方法的比較及臨床應(yīng)用價(jià)值

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(泰安市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 泰安 271000)

丙型肝炎病毒(HCV)是導(dǎo)致人類慢性肝炎、肝硬化及肝癌的重要原因之一，該病毒主要經(jīng)血液-體液傳播。HCV感染呈全球性分布，我國(guó)整體人群流行率為3%，其慢性化率高達(dá)85%，其中20%的病人易發(fā)展為肝硬化[1]。目前，HCV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷主要應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、膠體金免疫層析法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，前兩者檢測(cè)HCV-Ab，后者檢測(cè)HCV-RNA。本研究收集328例標(biāo)本，均用上述3種方法進(jìn)行HCV檢測(cè)。本文對(duì)3種檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行比較和分析，旨在探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 材料

2010年8月—2011年4月，本院行HCV-RNA定量檢測(cè)的住院和門診病人328例，男127例，女201例，年齡0～86歲。臨床確診為丙型肝炎105例，非丙型肝炎223例。

1.2 方法

將血清-70 ℃保存，HCV-RNA檢測(cè)采用ABI 7300實(shí)時(shí)熒光定量分析儀，試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。反應(yīng)結(jié)束后電腦自動(dòng)計(jì)算定量結(jié)果，拷貝數(shù)≥103為陽(yáng)性。HCV-Ab檢測(cè)分別采用ELISA法和膠體金法，全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自鄭州安圖生物工程有限公司，ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自珠海麗珠試劑股份有限公司，膠體金法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，操作嚴(yán)格按其說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

確診為丙型肝炎的105例標(biāo)本中，RT-PCR法檢測(cè)陽(yáng)性77例(73.3%)，ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性81例(77.1%)，膠體金法檢測(cè)陽(yáng)性82例(78.1%)，3種方法聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性92例(87.6%)。3種方法檢測(cè)陽(yáng)性率兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率與RT-PCR法、ELISA法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.82、3.97，P<0.05)。而在非丙型肝炎的223例標(biāo)本中，RT-PCR法檢測(cè)陽(yáng)性1例(0.4%)，ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性43例(19.3%)，膠體金法檢測(cè)陽(yáng)性48例(21.5%)。

3 討 論

HCV的感染呈世界性分布，全世界至少有2億HCV感染者。我國(guó)丙型肝炎約占輸血后肝炎的60%～80%，丙型肝炎的感染率僅次于乙型肝炎。丙型肝炎自然轉(zhuǎn)陰率低，治療效果差，病程遷延，且與肝硬化、肝癌顯著相關(guān)[2]。自1989年首次應(yīng)用ELISA法檢測(cè)血清中HCV-Ab以來(lái)，ELISA法已針對(duì)檢測(cè)的靈敏度和特異度發(fā)展到第三代試劑盒，其包被抗原為含有HCV的核心蛋白NS3、NS4及NS5抗原，在免疫功能正常者中有較高的檢出特異度，并大大縮短了“血清學(xué)窗口期”，成為了臨床上首選的HCV篩查試驗(yàn)[3]。但HCV-Ab的檢測(cè)也存在著許多不足之處[4]。本研究中223例已確認(rèn)非丙型肝炎病人，ELISA法檢測(cè)假陽(yáng)性率達(dá)到19.3%。造成假陽(yáng)性的原因可能有：①對(duì)于母親患丙型肝炎的新生兒，體內(nèi)由母體傳輸?shù)目笻CV 抗體能夠存在大約12個(gè)月，因而還需要通過(guò)PCR檢測(cè)新生兒體內(nèi)HCV-RNA的含量；②類風(fēng)濕因子(RF)的干擾，RF可大量存在于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及患有自身免疫性疾病病人的體內(nèi)，RF多為IgG，它有與變性IgG產(chǎn)生非特異性結(jié)合的特點(diǎn)，因此在抗HCV測(cè)定中，如血清標(biāo)本中存在RF，則其可與固相IgG和酶標(biāo)IgG結(jié)合，而出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)；③高免疫球蛋白血癥，血清中高濃度的非特異性IgG會(huì)非特異性吸附于固相表面，從而與后加的酶標(biāo)抗人IgG結(jié)合造成假陽(yáng)性；④標(biāo)本中超氧化物歧化酶(SOD)的干擾，用于包被固相的重組HCV抗原片段C-100如為酵母菌產(chǎn)生的SOD融合蛋白，則標(biāo)本中的SOD升高可能會(huì)造成抗HCV假陽(yáng)性結(jié)果[5]。

膠體金試劑盒與國(guó)產(chǎn)、進(jìn)口ELISA試劑盒相比較均有較高的敏感性、特異性,符合率均在95%以上,達(dá)到了國(guó)家要求(本研究中ELISA法陽(yáng)性率77.1%，膠體金法陽(yáng)性率78.1%，符合率也較高)，因而在臨床檢驗(yàn)中通常作為陽(yáng)性標(biāo)本的校核試驗(yàn)，以排除試驗(yàn)中由人為原因造成的假陽(yáng)性。此外, 該法抗干擾能力強(qiáng),可能與檢測(cè)時(shí)需稀釋10倍有關(guān)。但該法的敏感性不如ELISA法，而且只能單個(gè)測(cè)試,批量使用時(shí)不及ELISA法方便,成本也高?？偟膩?lái)說(shuō),膠體金法簡(jiǎn)便、快速、單份測(cè)定,可立等結(jié)果,除試劑外無(wú)需任何儀器設(shè)備,因此特別適用于急診檢測(cè)和基層衛(wèi)生院檢測(cè),值得在臨床推廣和應(yīng)用。

HCV-RNA一般可在HCV感染后2～5周的血清中檢出，而且特異性高。雖然ELISA法檢測(cè)丙型肝炎存在多種假陽(yáng)性、假陰性的可能，但并不能用RT-PCR法完全取代ELISA法，有報(bào)道顯示僅有55%的抗HCV陽(yáng)性者能夠檢出HCV-RNA[6]。其可能的原因有：HCV有可能發(fā)生自發(fā)性丟失；HCV基因多樣性或HCV基因變性等降低了RT-PCR方法的敏感性；因操作復(fù)雜、儀器昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)人員素質(zhì)要求較高，由于操作不當(dāng)造成污染或RNA酶的降解都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；而且在血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)以后，血清中的病毒載量可能降至極低水平，使HCV-RNA的結(jié)果呈陰性[7]。本研究中105例丙型肝炎病人的HCV-RNA陽(yáng)性率為73.3%，不排除有上述原因，在實(shí)際操作中可導(dǎo)致HCV漏檢。

綜上所述，3種檢測(cè)HCV的方法各有利弊，聯(lián)合檢測(cè)有利于提高HCV的陽(yáng)性檢出率，并且能夠降低ELISA法假陽(yáng)性率高帶來(lái)的影響。對(duì)臨床疑似HCV感染的病人可先應(yīng)用ELISA法初篩HCV-Ab，并應(yīng)用膠體金法進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，初篩陽(yáng)性則用RT-PCR法進(jìn)行HCV-RNA定量檢測(cè)以確認(rèn)，并對(duì)確認(rèn)HCV陽(yáng)性的病人進(jìn)行抗病毒療效監(jiān)測(cè)，協(xié)助臨床對(duì)HCV感染者早發(fā)現(xiàn)、早治療。

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