構棘根木心化學成分研究

劉志平，周 敏，劉 盛，甘春芳，韋萬興*

1廣西大學化學化工學院，南寧 530004;2廣西師范學院化學與生命科學學院，南寧 530001

構棘Cudrania cochinchinensis Corner為?？畦蠈僦参?，又稱山荔枝、千層皮、奴柘，其根部與同屬植物柘樹根長期作為傳統(tǒng)中藥“穿破石”使用。構棘主要分布在我國西南、華南以及河北以南等地，具有止咳化痰、祛風利濕、散瘀止痛之功效，長期作為傳統(tǒng)壯藥藥材用于治療肺結核、黃疸型肝炎、肝脾腫大、胃、十二指腸潰瘍、風濕性腰腿痛等?。?］。民間多采用水煎穿破石治療治晚期消化道癌癥，能明顯改善病人的生活質量，延長生存期［2］。日本學者Fukai T和復旦大學侯愛君聯(lián)合課題組［3-5］報道了構棘根中含異戊烯取代二苯酮、異戊烯取代呫噸酮、黃酮等成分并進行了抗菌活性測試;中國協(xié)和醫(yī)科大學張培成課題組［6，7］報道了構棘根中含有非常少見的黃酮醇與鈣、鎂絡合的黃酮鹽及其他黃酮醇、呫噸酮、黃酮苷等成分;臺灣學者 CHANG C-S［8］也從構棘中分離出異黃酮等成分。

廣西具有豐富的構棘資源，而開發(fā)利用率較低。鑒于目前仍未有構棘根木心和構棘果成分的相關文獻報道，本課題于廣西隆安采集了構棘果和根原料，旨在探究各部位的成分異同及發(fā)現(xiàn)具有生理活性的新物質。本實驗報道從木心部位分離表征的10個化合物結構，分別為4-(乙氧基甲基)苯酚 (1)、(13α，14β，17α，20R)-7，24-二烯-3-乙酸酯羊毛甾烷(2)、(13α，14β，17α，20R)-7，24-二烯-3-羥基羊毛甾烷(3)、谷甾醇(4)、山萘酚(5)、香橙素(6)、桑色素(7)、槲皮素(8)、山萘酚-7-O-葡萄糖苷(9)，槲皮素-7-O-葡萄糖苷(10)。其中化合物1為首次從?？瓢l(fā)現(xiàn)，化合物2～4首次從該植物中分離得到。

1 儀器和藥品

紅外光譜測定采用美國Nicolet FT-360傅立葉紅外光譜儀(KBr壓片);BRUKER-300-AVANCE III核磁共振儀(TMS作內標);Thermo-DSQ質譜儀;X4顯微熔點測定儀，溫度計未經校正。柱層析硅膠(300～400目)和薄層層析硅膠系青島化工廠產品;常用溶劑均為分析純。構棘采集自廣西隆安縣，由廣西中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室梁子寧副教授鑒定為Cudrania cochinchinensis corner。構棘根木心標本［20101001］存放于廣西大學化工學院120實驗室。

2 提取和分離

將采集自隆安的新鮮藥材構棘(穿破石)根皮手工剝離，木心粉碎得3 kg，95%乙醇浸泡提取并減壓濃縮得粗浸膏。將浸膏分散到1000 mL水中，依次用石油醚、石油醚:乙酸乙酯(v∶v/1∶1)、乙酸乙酯、正丁醇萃取得四相浸膏。石油醚萃取物在濃縮過程中產生懸浮絮狀物，冷卻過濾、硅膠柱層析純化1(60 mg);石油醚部位浸膏10g，以石油醚∶乙酸乙酯(v∶v/100∶0 ～80∶20)梯度洗脫純化得化合物2(326 mg)、3(260 mg)和4(185 mg)。石油醚∶乙酸乙酯(v∶v/1∶1)萃取的浸膏22 g硅膠柱層析，石油醚∶丙酮(v∶v/90∶10 ～50∶50)梯度洗脫并多次層析，石油醚∶丙酮(v∶v/80∶20)洗脫部分經層析純化得化合物 5(123 mg)、6(166 mg);石油醚∶丙酮(v∶v/70∶30)洗脫部分經層析純化得化合物7(47 mg)、8(165 mg)。乙酸乙酯萃取物濃縮到適量，靜置一晚，瓶底析出棕色固體，抽濾，甲醇多次重結晶得化合物9(233 mg);化合物9的重結晶濾液進行凝膠Sephadex LH-20層析(甲醇為流動相)分離得化合物10(26 mg)。

3 結構鑒定與波譜數據

化合物1 無色蠟狀物，碘粉顯粉紅色。mp:75～77 ℃，ESI-MS［M+1］+:153.2;IR(KBr)νmax:3403(O-H)，1613，1597，1519 cm-1為苯環(huán)吸收峰。1H NMR(CDCl3)δ:δ7.20(2H，d，J=8.7 Hz)，6.74(d，2H，J=8.7 Hz)，說明苯環(huán)對位取代;4.47(s，2H)為氧及苯環(huán)共同作用的亞甲基;3.59(q，2H，J=6.9Hz)和 1.27(t，3H，J=6.9Hz)為乙氧基信號;從HMBC信號看，與苯環(huán)相連亞甲基與乙氧基的亞甲基有遠程相關，證明了分子中存在芐基乙基醚片段，綜合以上信息推理化合物1結構為4-(乙氧基甲基)苯酚(分子式 C9H12O2)。IR(KBr)νmax:3403(O-H)，3031(=C-H)，2970，2920，2868，1613，1597，1519，1450，1380，1225，1172，1070 cm-1;1H NMR(CDCl3)δ:7.20(d，2H，J=8.7 Hz，H-6)，6.74(d，2H，J=8.7 Hz，H-5)，4.47(2H，s，Ph-CH2-O)，3.59(q，2H，J=6.9 Hz，-OCH2)和 1.27(t，3H，J=6.9 Hz，-CH3);13C NMR(CDCl3)δ:155.8(C-1)，129.9(C-4)，129.4(C-3，5)，115.4(C-2，6)，72.6(O-CPh)，65.6(O-CH2)，15.1(-CH3)。

化合物2 白色針狀晶體。1H NMR(CDCl3)δ:5.26(1H，t，J=6.9 Hz，7-H)，5.11(1H，t，J=6.9 Hz，24-H)，5.30(1H，m，H-3)，2.06(3H，s，CH3C=O)，1.69(3H，s，26-CH3)，1.61(3H，s，CH3-27)，0.98(3H，s，CH3-29)，0.94(3H，s，CH3-30)，0.87(3H，s，CH3-28)，0.86(3H，s，CH3-21)，0.81(3H，s，CH3-19)，0.77(3H，s，CH3-18);13C NMR(CDCl3)δ:170.9(C=O)，145.9(C-8)，130.9(C-25)，125.1(C-24)，117.6(C-7)，81.1(C-3)，53.2(C-17)，51.3(C-14)，50.7(C-5)，48.8(C-9)，43.5(C-13)，37.8(C-4)，36.8(C-1)，35.8(C-20)，35.1(C-22)，34.8(C-10)，33.9(C-12)，33.7(C-15)，28.5(C-16)，27.6(C-28)，27.3(C-30)，25.8(C-26)，25.4(C-23)，24.2(C-2)，23.8(C-6)，22.1(C-18)，21.3(CH3C=O)，18.6(C-21)，18.1(C-11)，17.7(C-27)，15.9(C-29)，13.1(C-19)。與文獻［9］對照，其數據基本吻合，故確定化合物 2為(13α，14β17α，20R)-7，24-二烯-3-乙酰酯羊毛甾烷。

化合物3 白色蠟狀固體。1H NMR(CDCl3)δ:5.27(1H，t，J=6.9 Hz，H-7)，5.10(1H，t，J=6.6 Hz，H-24)，3.26(1H，dd，J=4.5，10.8 Hz，H-3)，1.70(3H，s，CH3-26)，1.62(3H，s，CH3-27)，0.99(3H，s，CH3-29)，0.99(3H，s，CH3-30)，0.89(3H，s，CH3-28)，0.88(3H，s，CH3-21)，0.82(3H，s，CH3-19)，0.76(3H，s，CH3-18);13C NMR(CDCl3)δ:145.9(C-8)，131.0(C-25)，125.1(C-24)，117.8(C-7)，79.3(C-3)，53.2(C-17)，51.3(C-14)，50.6(C-5)，48.9(C-9)，43.5(C-13)，39.0(C-4)，37.2(C-1)，35.8(C-20)，35.2(C-22)，34.9(C-10)，34.0(C-12)，33.8(C-15)，28.5(C-16-C)，27.7(28-C)，27.6(C-23)，27.3(C-30)，25.8(C-26)，25.4(C-2)，23.8(C-6)，22.1(C-18)，18.6(C-21)，18.1(C-11)，17.7(C-27)，14.7(C-29)，13.1(C-19)。與文獻［9］對照，其數據基本吻合，故確定化合物3為(13α，14β17α，20R)-7，24-二烯羊毛甾烷-3-醇。

化合物4 白色晶體，mp136～138℃，與谷甾醇標準品熔點和Rf一致，混合熔點未下降。

化合物5 黃色粉末。1H NMR(C2D6CO)ppm:12.19(1H，s，5-OH)，9.72(1H，s，7-OH)，9.01(1H，s，4'-OH)，8.17(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，8.10(1H，s，3-OH)，7.03(2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，6.55(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.28(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)。13C NMR(C2D6CO)ppm:146.5(C-2)，135.8(C-3)，176.1(C-4)，103.5(C-4a)，157.1(C-5)，98.5(C-6)，164.1(C-7)，93.8(C-8)，161.6(C-8a)，122.5(C-1')，129.6(C-2'，6')，115.5(C-3'，5')，159.3(C-4')。波譜數據與文獻［9］中山萘酚對照一致，確定化合物5為3，5，7，4'-四羥基黃酮醇。

化合物6 白色顆粒粉末。1H NMR(C2D6CO)δ:11.72(1H，s，5-OH)，9.82(1H，s，4'-OH)，8.78(1H，s，7-OH)，7.43(2H，d，J=8.7 Hz，H-2'，6')，6.90(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，5')，6.01(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，5.96(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.09(1H，d，J=11.7 Hz，H-2)，4.79(1H，s，3-OH)。13C NMR(C2D6CO)δ:197.4(C-4)，167.0(C-7)，164.1(C-5)，163.3(C-8a)，158.0(C-4')，129.4(C-2'，6'-C)，128.2(C-1')，115.0(C-3'，5')，100.7(C-4a)，96.2(C-6)，95.2(C-8)，83.5(C-2)，72.2(C-3)。波譜數據與文獻［10］中香橙素對照一致，確定化合物6 為 3，5，7，4'-四羥基二氫黃酮醇。

化合物7 黃色粉末。1H NMR(C2D6CO)ppm:12.23(1H，s，5-OH)，10.17、9.63、9.01 為酚羥基氫，8.12(1H，s，3-OH)，7.38(1H，d，J=8.7 Hz，6'-H)，6.68(1H，dd，J=8.7，2.4 Hz，5'-H)，6.55(1H，d，J=2.4 Hz，3'-H)，6.36(1H，d，J=2.1Hz，H-8);6.22(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)。13C NMR(C2D6CO)ppm:178.2(C-4)，163.3(C-7)，160.5(C-8a)，159.7(C-5)，156.8(C-4')，156.7(C-2')，148.5(C-2)，140.6(C-3)，129.3(C-1')，112.1(C-6')，106.9(C-5')，104.7(C-3')，103.3(C-4a)，97.9(C-6)，93.5(C-8)。波譜數據與文獻［11］中桑色素對照一致，確定化合物 7 為 3，5，7，2'，4'-四羥基黃酮醇。

化合物8 黃色粉末。1H NMR(C2D6CO)ppm:12.19(1H，s，5-OH)，10.00、8.76、8.46、8.09 各1 個酚羥基氫，7.82(1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，7.71(1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6');7.00(1H，d，J=1.8 Hz，H-5');6.53(1H，d，J=1.8 Hz，H-8);6.27(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)。13C NMR(C2D6CO)ppm:175.7(C-4)，164.2(C-7)，161.4(C-8a)，156.9(C-5)，147.5(C-4')，146.1(C-2)，145.0(C-3')，135.9(C-3)，122.8(C-1')，120.5(C-6')，115.3(C-5')，114.8(C-2')，103.2(C-4a)，98.3(C-6)，93.6(C-8)。波譜數據與文獻［9］中槲皮素對照一致，確定化合物8為3，5，7，3'，4'-四羥基-二氫黃酮醇。

化合物9 黃色粉末。1H NMR(DMSO)ppm:12.50(1H，s，5-OH)，10.17(1H，s，3-OH)，9.56(1H，s，4'-OH)，8.08(2H，d，J=8.7 Hz，2'，6'-H)，6.95(2H，d，J=8.7 Hz，3'，5'-H)，6.81(1H，d，J=2.1 Hz，8-H)，6.43(1H，d，J=2.1Hz，6-H)，5.42(1H，d，J=4.2 Hz)，5.16(1H，d，J=4.2 Hz)，5.08(2H，m)，4.64(1H，m，1''-H)，3.18-3.75(糖質子)。13C NMR(CD3OD)ppm:148.0(2-C)，136.5(3-C)，176.6(4-C)，105.2(4a-C)，156.2(5-C)，99.2(6-C)，163.1(7-C)，94.8(8-C)，160.8(8a-C)，122.0(1'-C)，130.1(2'，6'-C)，115.9(3'，5'-C)，159.8(4'-C)，100.3(1''-C)，73.6(2''-C)，76.9(3''-C)，70.0(4''-C)，77.6(5''-C)，61.1(6''-C)。波譜數據與文獻［12］中山奈酚-7-O-葡萄糖苷對照一致。

化合物10 黃綠色粉末。1H NMR(DMSO)ppm:12.5(1H，s，5-OH)，9.54(2H，br)，7.73(1H，d，J=2.1 Hz，H-2')，7.56(2H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，6.91(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.77(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.42(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.40(1H，s，br，3-OH)，5.09(1H，d，1''-H)，3.18 ～ 3.49(6H，m，糖質子)。13C NMR(DMSO)ppm:176.5(C-4)，163.1(C-7)，160.8(C-8a)，156.2(C-5)，148.4(C-2)，148.0(C-4')，145.5(C-3')，136.6(C-3)，122.3(C-1')，120.5(C-6')，116.0(C-5')，115.8(C-2')，105.1(C-4a)，100.3(C-1'')，99.2(C-6)，94.7(C-8)，77.6(C-5'')，76.9(C-3'')，73.6(C-2'')，70.0(C-4'')，61.1(C-6'')，158.8(C-2)，157.1(C-5)，155.6(C-2')，129.9(C-6')，128.1(C-2'')，115.3(C-3'')，109.7(C-5')，108.0(C-3)，107.6(4a-C)，105.2(C-1')，105.0(C-6)，103.1(C-3')，95.0(C-8)，77.9(C-1'')，28.0(C-4'')，28.0(C-5'')。波譜數據與文獻［12］中槲皮素-7-O-葡萄糖苷對照一致。

4 結果與討論

從分離的部分化合物看，構棘根木心的主要成分為黃酮醇及其苷類化合物，也有三萜和甾體類成分。從目前報道的文獻看，構棘根皮中含有更為豐富的異戊烯取代的呫噸酮、異戊烯取代黃酮等成分，而異戊烯基取代的黃酮類成分常具有良好的抗炎、抗病毒、抗腫瘤活性，故構棘作為傳統(tǒng)中藥“穿破石”使用時，根皮比根木心可能具有更好的生理活性。

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