RP-HPLC法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星片的含量

洪麗萍 蔡亞蘭 黃加秀 石晶萍 朱佳麗 段鵬

RP-HPLC法測(cè)定鹽酸左氧氟沙星片的含量

洪麗萍 蔡亞蘭 黃加秀 石晶萍 朱佳麗 段鵬

目的 建立鹽酸左氧氟沙星片中鹽酸左氧氟沙星含量測(cè)定的RP-HPLC法。方法 色譜柱Agilent XDB-C18柱；流動(dòng)相為醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈(45：55), 流速1.0 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)295 nm。結(jié)果 鹽酸左氧氟沙星在5.00~250.00 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好, r=1.000。平均回收率為99.91%, RSD為0.3%(n=6)。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便, 準(zhǔn)確, 其他組分不干擾測(cè)定,可以用于鹽酸左氧氟沙星片中鹽酸左氧氟沙星的定量分析。

RP-HPLC；鹽酸左氧氟沙星片；含量測(cè)定

鹽酸左氧氟沙星片是我公司生產(chǎn)的奎諾酮類抗生素, 該產(chǎn)品為氧氟沙星的左旋體, 其抗菌活性約為氧氟沙星的兩倍,它的主要作用機(jī)制為抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶(細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ)的活性, 阻礙細(xì)菌DNA復(fù)制, 臨床上主要用于敏感細(xì)菌引起的輕、中度感染。作者參考產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］和中國(guó)藥典方法對(duì)測(cè)定產(chǎn)品中鹽酸左氧氟沙星的含量方法進(jìn)行研究分析和方法學(xué)驗(yàn)證, 研究結(jié)果表明HPLC法簡(jiǎn)便, 準(zhǔn)確, 可以用于控制本制劑產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

儀器：瑞士梅特勒公司的XS205 電子天平, 昆山公司的KQ-500B型超聲波器, 美國(guó)安捷倫公司的高效液相色譜儀Agilent1200 Series等儀器。

試藥：鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品(批號(hào)為：130537)購于美國(guó)西格瑪公司, 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的鹽酸左氧氟沙星片(批號(hào)分別為：12050111, 12060111, 12070111)為,乙腈純度級(jí)別是色譜純, 其它用到的化試級(jí)別均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法的色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 選用安捷倫公司的XDB C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)為色譜柱；以醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈(45：55)；流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為295 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min。

對(duì)上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)分析后發(fā)現(xiàn)：鹽酸左氧氟沙星色譜主峰與試驗(yàn)樣品中的其他組分色譜峰達(dá)到了有效分離,試驗(yàn)后方法的理論板數(shù)以鹽酸左氧氟沙星峰計(jì)>2000；陰性對(duì)照樣品溶液獲得的色譜圖中在鹽酸左氧氟沙星相對(duì)應(yīng)的位置上無色譜峰出現(xiàn), 表明樣品中其他成分不干擾鹽酸左氧氟沙星的測(cè)定, 上述色譜條件可行。

2.2 配制對(duì)照品溶液 取批號(hào)為：130537的鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品適量, 加流動(dòng)相溶解制成每1 ml含5 mg的鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品貯備液。

2.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 分別精密吸取上述對(duì)照品貯備液適量,用流動(dòng)相稀釋制成濃度分別為：5 μg/ml、10 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、150 μg/ml、 250 μg/ml的溶液, 按上述色譜條件分別進(jìn)樣20 μl, 以鹽酸左氧氟沙星濃度為橫坐標(biāo)(X),其峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y), 得回歸方程為： Y= 51.37X-3.076 相關(guān)系數(shù)r=1.000.

結(jié)果表明鹽酸左氧氟沙星的濃度和其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系的濃度范圍在5.00~250.00 μg/ml之間。

2.4 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.05012 mg/ml的鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品溶液20 μl, 按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法操作, 重復(fù)進(jìn)樣6次, 結(jié)果鹽酸左氧氟沙星峰面積均值為6332.84082, RSD值為0.1%, RSD值小于2.0%, 表明該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取新制備的濃度為0.05039 mg/ml的樣品溶液, 在(25±2)℃的環(huán)境條件下考察, 按上述色譜條件每隔1 h進(jìn)樣20 μl, 記錄每次測(cè)定的峰面積, 共測(cè)定12次, 鹽酸左氧氟沙星峰面積均值為5325.542315, RSD值為0.1%, RSD值<2.0%, 試驗(yàn)結(jié)果表明樣品溶液在(25±2)℃的環(huán)境條件可放置12 h。

2.6 方法重復(fù)性 任取批號(hào)為12010111的產(chǎn)品, 按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法制備6份供試液, 試驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸左氧氟沙星片含量均值為99.90%, RSD為0.22%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法。取已知鹽酸左氧氟沙星含量的樣品(12050111, 12060111, 12070111)適量, 分別精密加入鹽酸左氧氟沙星對(duì)照品溶液(0.05 mg/ml)10 ml, 按照“2.8”項(xiàng)下方法制備6份供試液, 分別進(jìn)樣20 μl, 按上述色譜條件測(cè)定, 平均回收率為99.91%, RSD為0.3%。

2.8 樣品含量測(cè)定 取本品20片, 精密稱定, 研細(xì), 精密稱定細(xì)粉適量(約相當(dāng)于鹽酸左氧氟沙星5 mg), 置100 ml量瓶中, 加流動(dòng)相50 ml, 超聲處理(功率500 W, 頻率40 kHz) 30 min, 放冷, 用流動(dòng)相稀釋至刻度, 搖勻, 濾過, 即得, 精密量取續(xù)濾液20 μl。按上述色譜條件測(cè)定, 以外標(biāo)法計(jì)算樣品中鹽酸左氧氟沙星的含量。

2.9 陰性對(duì)照樣品溶液的制備 陰性對(duì)照樣品溶液即缺鹽酸左氧氟沙星的空白溶液, 其制備按處方比例準(zhǔn)確稱取除鹽酸左氧氟沙星以外的其它物料, 模擬本品的制備工藝和供試品溶液的制備方法, 制成缺鹽酸左氧氟沙星的空白溶液。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 分別選取不同配比的醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈為流動(dòng)相, 不同廠家不同規(guī)格的色譜柱進(jìn)行分析, 試驗(yàn)結(jié)果表明最佳色譜條件是選擇流動(dòng)相為醋酸鹽緩沖夜(pH值為3.0)-乙腈(45:55), 選取安捷倫的XDB C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)色譜柱, 設(shè)置參數(shù)柱溫為30℃,流速為1.0 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)為295 nm。

［1］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行).YBH28972005.

225321 泰州, 揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司質(zhì)量管理部質(zhì)量檢測(cè)中心

洪麗萍 E-mail：3845310@qq.com