PCNA在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義*

李向陽(yáng) 錢(qián)如林 劉鳳娟 張會(huì)民 崔東 王珂

肺癌是起自肺支氣管與肺泡上皮細(xì)胞中的臨床常見(jiàn)疾病，屬于惡性腫瘤，對(duì)人類(lèi)健康與生命有嚴(yán)重威脅，且已成為全球范圍內(nèi)惡性腫瘤中第一致死疾病[1]。肺癌發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，其發(fā)病及發(fā)展過(guò)程中有許多基因參與其中[2]。非小細(xì)胞肺癌是肺癌常見(jiàn)類(lèi)型，在所有肺癌中占比高達(dá)80%以上[3]。增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）屬于DNA多聚酶輔助蛋白，已有臨床研究證實(shí)，PCNA可對(duì)細(xì)胞增值活性予以直接反映，是DNA復(fù)制中必不可少的附屬蛋白，可對(duì)DNA增值發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[4]，其含量變化和細(xì)胞增值間具有一定聯(lián)系。為對(duì)PCNA與非小細(xì)胞癌發(fā)病及發(fā)展間的關(guān)系進(jìn)行深入探討，筆者選取本院手術(shù)切除非小細(xì)胞肺癌組織蠟塊76例，同時(shí)選取正常肺組織24例，利用免疫組化SP法對(duì)兩組組織中PCNA表達(dá)情況進(jìn)行分析，現(xiàn)將相關(guān)情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2008年6月-2010年7月手術(shù)切除非小細(xì)胞肺癌組織蠟塊76例作為觀(guān)察組，所有標(biāo)本均為手術(shù)過(guò)程中切取，且已經(jīng)病理確診。其中男42例，女34例，患者年齡為35～81歲，平均為（56.7±4.6）歲；其中腺癌29例，鱗癌43例，腺鱗癌4例。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）于1997年制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，其中Ⅰ期18例，Ⅱ期33例， Ⅲ期25例。所有患者在手術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療。手術(shù)中同時(shí)在距離腫瘤至少5 cm處取健康肺組織24例作為對(duì)照組。

1.2 方法 采用免疫組化SP法對(duì)兩組組織中PCNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。SP試劑盒由北京中山生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，鼠抗人PCNA單克隆抗體由邁新公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)展開(kāi)操作，具體操作步驟為：對(duì)切片行脫蠟水化，利用3%H2O2在室溫下進(jìn)行5～10 min孵育，置于高壓鍋中行抗原修復(fù)；將一抗滴入其中，于4 ℃環(huán)境下靜置過(guò)夜，第2天加入二抗，在37 ℃下進(jìn)行20 min孵育；用DAB進(jìn)行顯色處理，以蘇木素作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比染色結(jié)果，利用樹(shù)脂進(jìn)行封片。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 通過(guò)對(duì)PCNA蛋白染色結(jié)果分析對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定。PCNA陽(yáng)性：染色部分位于細(xì)胞核上，為褐色或棕色染色，且染色方式為彌漫型或顆粒型（其中顆粒型較為常見(jiàn)）；陰性：切片中未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 14.0對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用字2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組間PCNA表達(dá)情況對(duì)比 所有PCNA表達(dá)均于細(xì)胞核中均勻分布，陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核中有棕黃色顆粒物出現(xiàn)。對(duì)照組PCNA陽(yáng)性率為8.33%（2/24），觀(guān)察組PCNA陽(yáng)性率為72.37%（55/76），觀(guān)察組PCNA陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

2.2 不同分期中PCNA表達(dá)情況 在76例非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本中，Ⅰ～Ⅱ期共51例，經(jīng)檢測(cè)PCNA陽(yáng)性36例，陽(yáng)性率為70.59%；Ⅲ 25例，經(jīng)檢測(cè)PCNA陽(yáng)性19例，陽(yáng)性率為76.00%。Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ患者PCNA陽(yáng)性率間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 PCNA陽(yáng)性與陰性患者1年及3年生存率對(duì)比 對(duì)觀(guān)察組76例患者展開(kāi)為期3年隨訪(fǎng)，對(duì)1年生存率及3年生存率進(jìn)行記錄。其中 55例PCNA陽(yáng)性患者1年生存率為52.73%（29/55），3年生存率為16.36%（9/55）；21例PCNA陰性患者1年生存率為80.95%（17/21），3年生存率為38.10%（8/21）。對(duì)比可知，PCNA陽(yáng)性患者1年及3年生存率均顯著低于PCNA陰性患者（P<0.05）。

3 討論

PCNA也叫做周期素，屬于酸性核蛋白，其分子量為36 KD。PCNA是對(duì)細(xì)胞增值活性予以直接反映的重要標(biāo)志物，可在細(xì)胞增殖過(guò)程中，對(duì)G1期向S期過(guò)渡階段發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，可對(duì)DNA前導(dǎo)鏈與后隨鏈合成予以協(xié)調(diào)，和細(xì)胞核增殖關(guān)系密切，可作為對(duì)細(xì)胞增殖狀態(tài)予以衡量的重要客觀(guān)指標(biāo)[5-6]。通常情況下，當(dāng)腫瘤細(xì)胞分化程度較低時(shí)，其增殖能力相對(duì)較強(qiáng)，此時(shí)PCNA表達(dá)也相對(duì)較強(qiáng)。因此，PCNA表達(dá)可對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制活躍程度予以直觀(guān)反映，從而對(duì)腫瘤惡性程度予以顯示。

肺癌組織中細(xì)胞增殖活性較為旺盛，因此其PCNA含量與正常細(xì)胞相比明顯增高。在本組研究中，對(duì)照組PCNA陽(yáng)性率為8.33%，觀(guān)察組PCNA陽(yáng)性率為72.37%，觀(guān)察組PCNA陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組（P<0.05），由此可知在肺癌組織中有顯著增殖上調(diào)現(xiàn)象。同時(shí)，本次研究發(fā)現(xiàn)，雖然Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ期患者PCNA陽(yáng)性率間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但隨著臨床分期推移，非小細(xì)胞肺癌組織中淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移范圍會(huì)不斷擴(kuò)大，PCNA陽(yáng)性表明腫瘤增殖具有較高活躍性。在76例非小細(xì)胞肺癌組織中，PCNA陽(yáng)性者1年及3年生存率均顯著低于PCNA陰性患者（P<0.05）。由此可見(jiàn)，PCNA陽(yáng)性表達(dá)說(shuō)明患者預(yù)后相對(duì)較差。

因?yàn)榉切〖?xì)胞肺癌組織中PCNA陽(yáng)性表達(dá)提示腫瘤細(xì)胞有旺盛增殖能力，這說(shuō)明PCNA陽(yáng)性表達(dá)水平和是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與肺癌分化程度間有密切聯(lián)系[7-9]。因此，PCNA表達(dá)可在肺癌患者接受個(gè)體化治療中發(fā)揮重要指導(dǎo)作用，同時(shí)有利于腫瘤預(yù)后判斷工作。在非小細(xì)胞肺癌患者病理分期為Ⅰ～Ⅲ期、可行手術(shù)切除治療時(shí)，應(yīng)展開(kāi)分子靶向藥物、手術(shù)治療與化療的綜合治療過(guò)程。在術(shù)前應(yīng)利用經(jīng)皮肺穿刺及氣管鏡活檢等方式對(duì)病理予以明確，同時(shí)利用免疫組化SP法對(duì)患者PCNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。若檢測(cè)結(jié)果顯示PCNA為陽(yáng)性表達(dá)，則提示患者腫瘤惡性程度相對(duì)較高且預(yù)后較差。因此在患者無(wú)絕對(duì)禁忌證時(shí)，手術(shù)治療對(duì)其腫瘤分期降低或遠(yuǎn)期生存率提高有重要意義。

總之，PCNA高度表達(dá)是對(duì)小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后造成影響的重要因素，其異常表達(dá)和肺癌發(fā)病、進(jìn)展與轉(zhuǎn)移間有密切關(guān)系，可作為對(duì)肺癌惡性程度與預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確判斷的重要指標(biāo)。

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