子癇前期患者胎盤、血漿uPA含量變化及意義

周仲元 王曉娟 許雅娟

子癇前期患者胎盤、血漿uPA含量變化及意義

周仲元 王曉娟 許雅娟

目的探討胎盤及血漿uPA 的含量與子癇前期發(fā)病的關系。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法測定67例子癇前期患者(輕度29例，重度38例)和30例正常晚孕婦女(對照組)胎盤及血漿uPA 含量。結果①對照組胎盤uPA含量為(32.62±2.85)ng/g，子癇前期組為(12.42±4.63)ng/g，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)；重度組明顯低于輕度組，差異有極顯著性(P<0.001)。②對照組血漿uPA含量為(645.47±41.32)pg/ml，子癇前期組為(461.61±37.68)pg/ml，兩組比較差異有顯著性(P<0.01)；輕、重度組之間比較差異無顯著性(P>0.05)。結論子癇前期患者胎盤及血漿uPA含量異常下降與其發(fā)病及嚴重程度有關。

子癇前期；uPA；胎盤；血漿

滋養(yǎng)細胞浸潤能力下降在子癇前期發(fā)病中的重要作用已得到公認。尿激酶型纖溶酶原激活因子(urokinase type plasminogen activator，uPA)在細胞的浸潤、遷移活動中發(fā)揮重要作用[1]。但在子癇前期發(fā)病機制中的作用尚不清楚。本研究通過檢測正常和子癇前期患者血漿和胎盤組織中uPA的含量，探討其與子癇前期發(fā)病的關系。

1 資料與方法

1.1研究對象 隨機選取鄭州大學第三附屬醫(yī)院2010年2月至2011年10月產科住院行剖宮產術終止妊娠的孕婦97例，其中子癇前期患者67例(輕度29例，重度38例)，平均年齡(29.0±4.0)歲，平均孕齡(251.6±14.3) d；選同期住院行選擇性剖宮產術的正常孕婦30例作為對照，平均年齡(27.4±2.3)歲，平均孕齡(275.8±7.0) d。兩組孕婦年齡、孕齡間無顯著性差異。子癇前期的診斷標準以全國統(tǒng)編教材《婦產科學》第6版為準。

1.2方法

1.2.1血液標本收集孕婦入院未經任何治療即空腹抽取肘靜脈血2 ml，置入經10%枸鹽酸鈉抗凝的中，1 h內，4℃，離心(5000rpm，20 min)，血漿進行分裝并保存于-80℃冰箱中待測。

1.2.2胎盤組織取材及制備組織提取液胎盤娩出后立即取胎盤母體面正中2 cm×2 cm×2 cm組織塊，生理鹽水漂洗干凈，干燥，置于密閉塑料袋中保存于-80℃冰箱中待用。

用于檢測uPA的組織提取液制備方法:取冰凍胎盤組織約700 mg，機械性粉碎至粉末，加入3 mlTBS溶液(0.02 m Tris-HCl，0.125 m NaCL，pH8.5)及0.1 ml 10% TritonX-100懸浮，置于4℃冰箱內孵育12～18 h。離心(13000rpm，20 min，4℃)，上清液待測。

1.2.3檢測方法 血漿及胎盤組織提取液中uPA的含量均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定。人uPA ELISA試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。實驗操作步驟嚴格按說明書進行。用Multiskan MS 352型酶標儀(Ferland)進行樣本吸光度的測定。

1.3統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學軟件包SPSS 13.0進行處理。實驗結果用表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計用t檢驗，單因素方差分析和直線相關分析。

2 結果

2.1各組孕婦血漿uPA濃度的變化 子癇前期組uPA含量(461.61±37.68)pg/ml，明顯低于對照組(645.47±41.32)pg/ml，兩組間有顯著性差異(t=2.376，P<0.01。與對照組相比，輕、重度子癇前期組uPA含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(t輕=3.216，P<0.01；t重=3.701，P<0.01。輕、重度子癇前期組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.281，P>0.05)。

2.2各組孕婦胎盤組織中uPA含量變化 子癇前期組uPA含量(12.42±4.63)ng/g,明顯低于對照組(32.62±2.85)ng/g，兩組間差異有極顯著性(t=8.615，P<0.001)。與對照組相比，輕、重度子癇前期組uPA含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(t輕=6.223，P<0.001；t重=8.093，P<0.001)。重度子癇前期組uPA含量明顯低于輕度組，差異有統(tǒng)計學意義(t=7.165，P<0.001)。

3 討論

3.1正常孕婦和子癇前期患者的uPA含量的變化特點 uPA是一種特異性的絲氨酸蛋白水解酶，活化的uPA除了直接降解細胞外基質外，還可激活纖溶酶原形成活性纖溶酶，后者可催化一系列的蛋白質水解，其中包括各種基底膜成分和細胞外基質(ECM)。另外，活化的纖溶酶尚能激活膠原酶、生長因子以及MMPs的成熟，并參與血管生成。以上都是滋養(yǎng)細胞浸潤所必需的。Shimada等[2]發(fā)現(xiàn)子宮血管中uPA的含量高于外周血，而胎盤娩出后其濃度下降，說明滋養(yǎng)細胞是uPA的主要來源。劉以訓等[3]對uPA在人妊娠晚期胎盤中的定位及分布研究結果也顯示uPA集中在絨毛滋養(yǎng)層和絨毛外滋養(yǎng)細胞中。Koh等[4]對正常妊娠的研究發(fā)現(xiàn)，血漿中uPA濃度在妊娠晚期增高，可能與胎盤的成熟有關。

3.2子癇前期患者的uPA測定的意義 近年許多研究表明，滋養(yǎng)細胞功能異常在子癇前期發(fā)病中起重要作用。絨毛外滋養(yǎng)細胞(EVT)通過蛋白水解酶而獲得侵襲能力，可侵入底蛻膜及蛻膜-肌層交界處，并可逆行侵入蛻膜段及蛻膜-肌段螺旋動脈管壁內，導致胎盤床部位的血管生理性改變。若具有侵蝕性的EVT對子宮肌層和子宮螺旋動脈的浸潤不能達到足夠的深度，母體血管不能發(fā)生正常的生理性變化，不能轉變成低阻力血管，則胎盤缺氧，灌注量不足導致子癇前期的發(fā)生[6]。本研究顯示，子癇前期患者胎盤及血漿中uPA含量均顯著低于正常妊娠婦女，表明子癇前期時滋養(yǎng)細胞浸潤能力下降，造成胎盤床血管重塑障礙，導致子癇前期發(fā)生。重度子癇前期患者胎盤中uPA含量顯著低于輕度者，表明重度患者滋養(yǎng)細胞浸潤能力更差。由此推測，滋養(yǎng)細胞分泌uPA及其活性的降低與子癇前期發(fā)病密切相關。而子癇前期胎盤缺氧通過反饋作用削弱滋養(yǎng)細胞的浸潤能力,進一步促進子癇前期的發(fā)生[7]。

本研究顯示,子癇前期患者胎盤及血漿uPA水平較正常妊娠者明顯下降，ECM的降解減少，滋養(yǎng)細胞的浸潤能力顯著下降。重度子癇前期患者uPA水平下降更為突出，表明uPA的水平與疾病的嚴重程度相關。uPA在滋養(yǎng)細胞浸潤過程中發(fā)揮重要作用，若有效調控uPA的表達可能成為防止和治療子癇前期的新途徑。

[1] Chakraborty C, Gleeson LM, McKinnon T, et al. Regulation of human trophoblast migration and invasiveness. Can J Physiol Pharmacol,2002，80(2):116-124.

[2] Shimada H, Takashima E, SOMA M, et al. Source of increased plasminogen activators during pregnancy and puerperium. Thromb Res 1989，15:91-8.

[3] 劉以訓，胡召遠，馮強，鄒如金，C.D.Ockleford. tPA,uPA,PAI-1和PAI-2在人和恒河猴胎盤中的原位雜交和熒光免疫定位. Dev.& Reprod.Biol，2000,9(1):1-9.

[4] Koh CL， Viegas OA, Yuen R， Chua SE. Plasminogen activators and inhibitors in normal late pregnancy, postpartum and in the postnatal period. Int J Gynaecol Obstet 1992,38(1):9-18.

[5] Li u J, Chakraborty C, Graham CH, Barbin YP, Dixon SJ, Lala PK. Noncatalytic domain of uPA stimulates human extravillous trophoblast migration by using phospholipase C, phosphatidylinositol 3-kinase and mitogen-activated protein kinase. Exp Cell Res, 2003 May 15；286(1):138-51.

[6] Pierre-Yves R. Interest in preeclampsia for researchers in reproduction. J Reprod Immunol，2002，53(1-2):279-287.

[7] Liu KH, Zhou Y, Janatpour M, et al. Human cytotrophoblast differentiation/invasion is abnormal in preeclampsia. Am J Pathol,1997,151(6):1809-1818.

450052 鄭州大學第三附屬醫(yī)院產科