三七及其制劑采用高效液相色譜法測(cè)定皂苷類方法學(xué)概述

蘇家輝

三七及其制劑采用高效液相色譜法測(cè)定皂苷類方法學(xué)概述

蘇家輝

三七是常用的中藥之一，由于三七及其制劑中的化學(xué)成分復(fù)雜性，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定皂苷類的分析研究越來(lái)越多。本文結(jié)合近年實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)研究，對(duì)該技術(shù)的特點(diǎn)、存在的問(wèn)題進(jìn)行簡(jiǎn)單的分析，并展望中藥采用HPLC法的方法學(xué)研究的發(fā)展方向。相信該法會(huì)對(duì)三七的分析研究提供越來(lái)越重要的技術(shù)支持。

三七；HPLC法；皂苷類；方法學(xué)

三七又名田七，李時(shí)珍稱其為“金不換”，是常用的中藥之一，為五加科植物的干燥根[1]，拉丁學(xué)名：PanaxNotoginseng（Burk.）F.H.Chen。具有止血、活血、定痛的功效，臨床常用于跌打損傷、胸痹絞痛、癥瘕積聚、閉經(jīng)、痛經(jīng)、瘡癰腫痛等。《本草綱目拾遺》中記載：“人參補(bǔ)氣第一，三七補(bǔ)血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥中之最珍貴者”?！霸颇习姿帯焙汀捌旭ァ倍际且匀邽橹髦瞥傻模瑸轳Y名中外的中成藥。

三七的主要藥用成分包括皂苷、黃酮、氨基酸、多糖、脂肪酸等多種生物活性物質(zhì)[2-3]。三七中的皂苷類被認(rèn)為是其主要的生理活性成分之一。有研究表明，三七中皂苷類的含量，尤其是人參皂苷Rg1和Rb1的含量高于人參和西洋參[4]。目前常見(jiàn)的測(cè)定方法有HPLC、閉塞法、薄層掃描法等?，F(xiàn)對(duì)HPLC測(cè)定三七皂苷類含量的方法學(xué)研究，總結(jié)如下。

1 HPLC分析方法研究

色譜柱：常見(jiàn)的三七及其成藥分析HPLC色譜柱的常見(jiàn)填充劑有十八基硅烷鍵合硅膠（C18），其具有壽命長(zhǎng)、效果穩(wěn)定、價(jià)格適宜的特點(diǎn)，為最常用的HPLC色譜柱[5]。譚春梅[5]等以Shimadzu C18（75mm×2.0mm，2.2μm）為色譜柱檢測(cè)三七膠囊中的五種皂苷的含量，且方法簡(jiǎn)單、快速。徐鵬[6]等采用VenusilXBP C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱以HPLC-ELSD法測(cè)定血塞通注射液中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd，結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

流動(dòng)相：分離三七中皂苷類物質(zhì)，由于其成分多，極性分布較大。因此，應(yīng)采用梯度洗脫。常見(jiàn)的流動(dòng)相種類有乙腈-水[9-10]。按照三七類注射液現(xiàn)行的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)選擇乙腈-水，因其簡(jiǎn)單方便，被廣泛應(yīng)用。除水以外，常見(jiàn)的水相還有醋酸銨-氨水溶液[7]、醋酸銨溶液[8]、水等。

檢測(cè)方法：目前常見(jiàn)的檢測(cè)方法包括紫外檢測(cè)和蒸發(fā)光散射檢測(cè)。蒸發(fā)光散射檢測(cè)由于靈敏度高、溶劑對(duì)其影響小，為近年通用的質(zhì)量檢測(cè)方法[9-10]。又因?yàn)槿咴碥諆H僅尾端吸收紫外線，導(dǎo)致相應(yīng)靈敏度不高，還存在極限漂移等情況，因此，部分研究選擇了蒸發(fā)光散射檢測(cè)，但是該檢測(cè)方法線性范圍窄，其測(cè)定重現(xiàn)性不如紫外檢測(cè)方法。所以，目前最常用的方法仍為紫外檢測(cè)方法，該方法具有檢測(cè)簡(jiǎn)便、成熟、穩(wěn)定、線性范圍廣等特點(diǎn)。

2 HPLC法測(cè)定三七皂苷類物質(zhì)存在的問(wèn)題及解決方法

2.1 成本過(guò)高為提高三七總皂苷的可控程度，需在研究中增加對(duì)照品，但三七皂苷類物質(zhì)的對(duì)照品價(jià)格較為昂貴，使分析成本幅度大大提高，不適合做為日常生產(chǎn)的檢驗(yàn)。為解決對(duì)照品的問(wèn)題，可選擇相對(duì)因子校正法[11]、對(duì)照提取物法[12]等。

相對(duì)因子校正法是將結(jié)構(gòu)相似、相應(yīng)穩(wěn)定的同類化合物選擇其中分離度好、性質(zhì)穩(wěn)定的成分作為對(duì)照品。對(duì)照物提取法是將不同實(shí)驗(yàn)室中的對(duì)照品和標(biāo)定提取物的各個(gè)組分的含量。測(cè)定后可將標(biāo)定好的對(duì)照提取物為對(duì)照，按照標(biāo)定的含量值折算各個(gè)組分的量。

2.2 結(jié)果不夠客觀由于三七皂苷的HPLC圖譜隨著色譜柱和儀器的不同，其圖譜各指紋峰保留時(shí)間不能完全重現(xiàn)。而且其變異無(wú)一定的規(guī)律，需要進(jìn)行各個(gè)峰的手動(dòng)校正。因此，其試驗(yàn)結(jié)果不夠客觀[13]。針對(duì)上述問(wèn)題，有研究將紋峰的保留時(shí)間非線性漂移結(jié)果予以保留，不進(jìn)行手動(dòng)校正，以保證結(jié)果的客觀性。

3 展望

三七及其制劑的皂苷類成分的HPLC檢測(cè)是目前研究的熱點(diǎn)之一，但是在方法學(xué)方面的研究仍存在著一些問(wèn)題。建議今后的相關(guān)研究中能重視HPLC方法學(xué)上的考慮，選擇C18色譜柱和相對(duì)質(zhì)量穩(wěn)定的HPLC儀器，對(duì)梯度和柱紋進(jìn)行網(wǎng)格搜索；結(jié)合成本和客觀角度出發(fā)選擇更為合適的對(duì)照法進(jìn)行測(cè)定。

HPLC具有較好的分離性能、較高的分析效率、較廣的適用范圍、選擇性好、靈敏度高。而且，該方法能夠通過(guò)使用整體材料填充、改變固定的相粒徑、升高系統(tǒng)溫度，可大大縮短分析時(shí)間[14]。相信隨著儀器和色譜柱等其它技術(shù)的不斷升級(jí)與完善，HPLC法在中藥鑒定和中藥成分研究中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用，為中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化中提供越來(lái)越重要的技術(shù)支撐[15]。

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R927.2

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1673-5846(2013)06-0031-03

佛山市中醫(yī)院，廣東佛山 528000