論藥品檢驗中薄膜過濾法的應(yīng)用

徐 丹

論藥品檢驗中薄膜過濾法的應(yīng)用

徐 丹

在《中國藥典》中薄膜過濾法是對細(xì)菌微生物量測試的方法。近年來，薄膜過濾法已成為應(yīng)用日益廣泛的藥物測試方法，其具有操作簡單、快速、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的特點。通過無菌檢查法可以快速對細(xì)菌、微生物進(jìn)行收集，并檢測其數(shù)量，通過這些方法可刪除藥品抗菌作用的成分；可作為制藥微生物回收和醫(yī)藥制劑中微生物驗證的一種實驗驗證方法。此方法也可適用于生物制品和藥品包裝材料的無菌測試。

薄膜過濾法；藥品檢驗；應(yīng)用

近年來，薄膜過濾法作為藥物檢測技術(shù)的一種方法已受到越來越多的觀注和應(yīng)用，此方法不僅在液體樣品、固體制劑檢測中適用，而且對于一些特殊用途潤滑脂的測試也可達(dá)到很好的效果[1]。薄膜過濾法也被應(yīng)用于進(jìn)口藥品細(xì)菌數(shù)量的測定，經(jīng)過薄膜過濾器后的菌液沖洗直接貼于瓊脂培養(yǎng)基的表面，然后進(jìn)行培養(yǎng)并且對菌落進(jìn)行計數(shù)。

1 制藥的無菌檢查

1.1 抗菌藥物無菌試驗的應(yīng)用抗菌藥物對某些微生物的生長和繁殖具有抑制作用，所以應(yīng)用常規(guī)方法檢查只能得到假陰性結(jié)果，但這并不意味著藥物中微生物和病原微生物不存在，因此采取薄膜過濾法除去可溶性藥物中的抗微生物的物質(zhì)，而細(xì)菌和其它微生物則被滯留在過濾器上，然后對其中所包含的微生物進(jìn)行培養(yǎng)使其生長和繁殖，從而能夠定性或定量檢測微生物。

1.2 非抗菌藥物的無菌檢查對于一些非抗菌作用的藥品制劑進(jìn)行測試時采用直接接種法，檢查結(jié)果并不令人滿意，如果在培養(yǎng)基中混入需氧和厭氧細(xì)菌培養(yǎng)基的試管中就會出現(xiàn)混濁現(xiàn)象，結(jié)果會難以觀察和測定，這就需要進(jìn)行接種和涂片染色觀察，不但延長了培養(yǎng)時間而且還增加了污染的可能性。通過使用薄膜過濾法，兩種培養(yǎng)基的試管都不會出現(xiàn)渾濁，不僅縮短了檢驗周期，而且結(jié)果更加容易判斷。實驗結(jié)果表明，直接接種的方法使結(jié)果容易出現(xiàn)假陰性，薄膜過濾法不僅可以消除培養(yǎng)基的渾濁沉淀現(xiàn)象，而且也可消除培養(yǎng)過程中造成的堿性環(huán)境，為污染細(xì)菌的生長提供了有利條件，并縮短了訓(xùn)練時間，提高了陽性檢出率，消除失誤產(chǎn)生的機率[2]。因此建議在推薦的新藥品種不易給出判斷結(jié)果時，應(yīng)使用薄膜過濾法進(jìn)行測試。

2 微生物的元菌檢查

2.1 微生物限度抗生素眼藥水張新妹等[3]運用開放式的過濾器將貼膜法與過濾法進(jìn)行結(jié)合應(yīng)用于消除藥物的抗菌活性中。結(jié)果顯示，菌落的回收率＞80%，45組抗生素眼藥水的微生物限度達(dá)到了法規(guī)的要求。貼膜法被證明是可行的菌落計數(shù)法，薄膜過濾法可以用來進(jìn)行控制菌的檢查，《中國藥典》對抗生素眼藥水的微生物限度篩查確定了相應(yīng)的檢測方法。

2.2 油膏微生物限度檢查蘇德模等[4]在眼膏、軟膏微生物限度檢查法的研究中做了8個品種15個批次樣本的調(diào)查實驗，首先將測試的產(chǎn)品混合肉豆蔻酸異丙酯的稀釋劑與0.9%的無菌氯化鈉溶液混合，將提取液用薄膜過濾法進(jìn)行過濾，以檢查是否存在微生物，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好，并據(jù)此提出了一種新的微生物限度檢查的方法。

2.3 專有的微生物限度檢查可以采用薄膜過濾法和離心法或超聲波清洗等方法來消除中藥中某些具有抑制作用的細(xì)菌，這些方法具有操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、可靠性高和可重復(fù)性較好。

2.4 化學(xué)藥物的微生物限度測試常規(guī)方法無法檢測污染細(xì)菌的藥物如復(fù)方磺胺甲惡唑片、單硝酸異山梨酯、阿糖腺苷、硝呋太爾等采用這種方法進(jìn)行測試，結(jié)果可有效去除藥品中的殺菌成分，從而使污染的微生物得到增長，提高了檢出率，可以更好對細(xì)菌、真菌和細(xì)菌的數(shù)量進(jìn)行控制和檢查。

3 微生物薄膜過濾法在藥物驗證實驗的應(yīng)用

有研究等將薄膜過濾中和法應(yīng)用于中和抗菌藥物抗菌作用的檢測。此法依賴于微生物在多孔膜上的物理性保留，如膜的孔徑尺寸、抗菌膜的吸附作用以及在膜上的微生物回收培養(yǎng)的條件。抗菌藥物在過濾器上的殘留可以對微生物的生長起到抑制作用[5]。還有學(xué)者運用薄膜過濾法對抗菌藥物進(jìn)行活菌的檢出率、回收率、增殖值的實驗。結(jié)果顯示，薄膜過濾法的效果明顯高于《中國藥典》中收載的平板菌落計數(shù)法和衛(wèi)生部于1986年頒布的《藥品衛(wèi)生檢驗方法》中所收載的洗脫法、貼膜法的平均回收率＞70%，平板菌落計數(shù)方法和洗脫法僅約為3%和＜10%，貼膜法的生長率不超過1/5。證明貼膜法可用于含有抗菌成分的藥品微生物限度的測試。

4 結(jié)論

綜上所述，薄膜過濾法是用于消除藥物中抗菌作用的一種常用手段。薄膜過濾法以盡量減少外界的影響同時減少運營商的主觀因素的影響，增加了樣本的取樣量，因此，該方法更加客觀、公正、科學(xué)，全面的應(yīng)對樣品的污染狀況。只能用于實驗樣品是水溶性的過濾時，在不影響樣品中微生物生存的狀態(tài)時，可以使用這種檢驗方法。而且，該法的應(yīng)用范圍非常廣泛，幾乎可以運用于各種劑型的藥物測試。歐洲、美國、英國、日本藥典中都對此做了詳細(xì)的記載。近年來，在我國的藥檢工作中也對藥物測試進(jìn)行了大量的工作，同時也進(jìn)行了大量的試驗研究，有了更深刻的理解和更廣泛地使用，這對于我國藥檢技術(shù)的提高、藥物質(zhì)量控制和藥物監(jiān)督和執(zhí)法等，都具有重要意義。

[1] 陳新顏,郭麗真,姚秋萍.薄膜過濾法用于硝酸瞇康唑栓的控制菌檢查[J].海峽藥學(xué),2004,16(4)：75.

[2] 劉方明.聚維酮碘泡騰片控制菌檢查方法的探討[J].中華醫(yī)藥雜志,2005,5(4)：312.

[3] 張新妹,胡昌勤,李艷,等.一般用途的抗生素滴眼劑的微生物限度檢查方法[J].天津醫(yī)學(xué),2003,15(3)：10.

[4] 蘇德模,張新妹,特玉香,等.眼膏軟膏微生物限度檢查法的研究[J].藥物分析雜志,2003(4)：335-338.

[5] 柳忠義,蘇宏瑞,陳偉民.雙唑泰陰道泡騰片微生物限度檢查方法學(xué)驗證[J].中國藥業(yè),2007,16(7)：14.

R927.11

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