石斛口服液制備工藝研究

徐應(yīng)淑，周旭美，鄢韜

（遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義563003）

金釵石斛為蘭科石斛屬多年生附生草本植物[1]，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥，研究表明其有抗衰老、抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用[2]。金釵石斛的藥用成分主要是多糖類物質(zhì)[3]，是石斛中具有免疫增強(qiáng)作用和抗炎作用的活性成分[4]，結(jié)合文獻(xiàn)[5-6]中多糖含量的提取及測(cè)定方法，本課題選用貴州道地藥材赤水金釵石斛為原料以提取液中多糖的含量為指標(biāo)，考察提取料液比、溫度、時(shí)間、次數(shù)等因素，找出最佳制備工藝，為金釵石斛的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供參考。

1 材料

1.1 試藥

金釵石斛：購(gòu)自貴州赤水；D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110833-200503；石油醚：天津市化學(xué)試劑一廠；苯酚：上?；瘜W(xué)試劑廠；無(wú)水乙醇：重慶川東化工有限公司化學(xué)試劑廠；乙醚：天津市大茂化學(xué)試劑廠；濃硫酸：遵義市師范學(xué)院化學(xué)試劑廠；正丁醇：天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；氯仿：成都市化工試劑廠；均為分析純。

1.2 儀器

TU-1900 雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；電子分析天平：塞多利斯科學(xué)儀器有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 葡萄糖對(duì)照品溶液的制備

精密稱取葡萄糖對(duì)照品0.100 0 g，置100 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，精密量取1 mL 置于100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，即得濃度為10 μg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取金釵石斛藥材粉末35.00 g，置圓燒瓶中，加石油醚（60 ℃～90 ℃）500 mL，加熱回流提取l h，過(guò)濾，揮干溶劑，濾渣用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇500 mL 回流提取1 h。趁熱過(guò)濾，揮干溶劑，濾渣加入蒸餾水500 mL 回流提取2 次，每次1 h，趁熱過(guò)濾，減壓濃縮至150 mL，用活性炭脫色，過(guò)濾，加入無(wú)水乙醇使溶液含醇體積分?jǐn)?shù)為 ，靜置，過(guò)濾，得金釵石斛粗多糖。將粗多糖溶液經(jīng)Sevage 法脫蛋白。再次醇沉，沉淀物依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，得多糖為白色粉末，取10 mg 用雙蒸水稀釋至100 mL 成供試品溶液。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

根據(jù)2010 版《中國(guó)藥典》一部附錄VA 分光光度法在波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)對(duì)照品及供試品的吸光度，結(jié)果表明照品及供試品在此波長(zhǎng)處都有最大吸收。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，加蒸餾水使成2.0 mL，各加苯酚試劑1.0 mL，加入硫酸5.0 mL，置沸水浴中加熱15 min，冷卻至室溫。另以蒸餾水作為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，檢測(cè)濃度（C）為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A＝0.006 7C+0.032（r＝0.995 8）。結(jié)果表明，葡萄糖檢測(cè)濃度在1 μg/mL～10 μg/mL 范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取供試品0.2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線2.5 步驟操作，將同一份反應(yīng)液間隔一定時(shí)間測(cè)定吸光度值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：樣品在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD=1.76%。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取供試品0.2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線2.2.5 步驟操作，重復(fù)測(cè)定5 次，測(cè)定吸光度值。結(jié)果表明：精密度良好，RSD=1.84%。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密量取供試品0.2 mL，5 份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線2.5 步驟操作，測(cè)定吸光度值。結(jié)果表明重復(fù)性良好，RSD=1.65%。

3 赤水金釵石斛口服液制備工藝研究

3.1 提取工藝優(yōu)化

根據(jù)單因數(shù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及參考文獻(xiàn)選定影響石斛多糖提取率的4 個(gè)因素：料液比（A）、提取時(shí)間（B）、提取溫度（C）、提取次數(shù)（D），以石斛多糖提取率為指標(biāo)，選用L9（34）正交進(jìn)行試驗(yàn)，優(yōu)選出最佳提取工藝流程。結(jié)果見(jiàn)表1。

通過(guò)以上結(jié)果得出正交試驗(yàn)優(yōu)選出的方案：即赤水金釵石斛在料液比為1 ∶10（g/mL），浴加熱80 ℃，提取3 h，提取3 次，提取液濃縮至10 mL，測(cè)定赤水金釵石斛多糖的含量，得到赤水金釵石斛多糖的平均含量為4.32%，RSD=0.35%（n=3），顯示該方法穩(wěn)定可行。

3.2 口服液的制備工藝考察

取赤水金釵石斛粉末40 g，根據(jù)最佳提取工藝條件，加400 mL 水，控制溫度80 ℃，提取3 次，每次3 h濾過(guò)，合并濾液，濃縮得樣品浸膏，平均分成4 份，分別加水至1 000 mL，混勻，分別煮沸0、10、20、30 min，放冷后冷藏48 h，離心濾過(guò)，灌裝，滅菌。結(jié)果未熱處理的出現(xiàn)渾濁，10 min 熱處理的有少量沉淀，20、30 min 熱處理的澄清。通過(guò)對(duì)滅菌后制劑中多糖含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果變化不大，說(shuō)明多糖受溫度影響不明顯，熱處理冷藏法可以提高制劑的澄明度?？紤]到省時(shí)節(jié)能，降低成本，采用熱處理20 min 配液較為合理。

表1 正交設(shè)計(jì)結(jié)果Table 1 Orthogonal experimental resnlts

4 結(jié)論

綜上，金釵石斛口服液的制備工藝為：以水為溶劑，料液比為1 ∶10（g/mL），浴加熱80 ℃，3 h，提取3次，濃縮得浸膏，加100 mL 蒸餾水，煮沸20 min 后放冷冷藏48 h，離心濾過(guò)，灌裝，滅菌即得。取20 個(gè)處方量的同批次藥材，分別按所選工藝進(jìn)行試驗(yàn)，制得口服液樣品，分別考察多糖含量及澄明度，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，說(shuō)明該口服液制備工藝穩(wěn)定、可行。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:85-86

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[6] 楊艷,徐應(yīng)淑.川黔地區(qū)金釵石斛多糖的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥房2010,27(21)2552-2554