消毒前后孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌污染情況監(jiān)測

方志　張丹俊　沈?qū)W懷

摘要[目的]通過對安徽某大型種雞孵化場在消毒前后孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌污染情況的監(jiān)測，評估該孵化場的消毒程序、消毒劑選擇和使用方法的可行性和實際效果。[方法]采用平板暴露自然沉降法，選用麥康凱培養(yǎng)基為選擇性采樣培養(yǎng)基，SS培養(yǎng)基為沙門氏菌的進(jìn)一步鑒別培養(yǎng)基，對分離菌進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，并對3種不同消毒劑消毒和未消毒時孵化室空氣中的細(xì)菌數(shù)及孵化出雛時的健雛率進(jìn)行比較。[結(jié)果]連續(xù)2 d未消毒，孵化室各功能區(qū)即可檢測到沙門氏菌和大腸桿菌，且數(shù)量隨未消毒時間的延長而增多；分別使用安立消、過氧乙酸、聚維酮碘3種消毒劑任一種連續(xù)消毒2 d后，孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌數(shù)量均降為0，健雛率較未消毒時明顯提高。[結(jié)論]安立消、過氧乙酸、聚維酮碘3種消毒劑在選擇正確的稀釋濃度、消毒方法和消毒程序后，可以有效殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌，建議作為孵化室消毒的首選消毒劑交替選用。

關(guān)鍵詞消毒；孵化室；空氣；沙門氏菌；大腸桿菌；監(jiān)測

中圖分類號S851.2+4文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）36-0075-05

Abstract[Objective]To evaluate the disinfection procedures，choice of disinfectant，feasibility and practical effect of the disinfection method by monitoring the pollution of Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room before and after disinfection in a large chicken hatchery of Anhui Province.[Method]The experiment was carried out by natural sedimentation on exposed flat method，with MacConkey culture media as a selective sampling medium.

SS medium was used to further identify Salmonella，and it was confirmed by gram staining and microscopic examination.The number of bacteria in air and health chicks rate in incubator were compared among three different disinfectants and unsterilization.[Result] Salmonella and E.coli were found in each function region of hatchery room after unsterilization for 2 days.With the extension of unsterilization time，the quantity showed an increasing trend.The number of Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room reduced to zero after any of three kinds of disinfectants （Anlixiao，peracetic acid，povidone iodine） were used after 2 days.The rate of healthy chicks were significantly improved.[Conclusion] Three kinds of disinfectants （Anlixiao，peracetic acid，povidone iodine）could effectively kill Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room with the appropriate diluted concentration，sterilization method and disinfection procedures，so it was suggested that the three disinfectants should be alternately used.

Key wordsDisinfection；Hartchery room；Atmosphere；Salmonella；Escherichia coli；Monitoring

養(yǎng)雞業(yè)在我國畜牧業(yè)生產(chǎn)中占重要份額，我國已成為世界養(yǎng)雞數(shù)量最多的國家之一。隨著養(yǎng)雞業(yè)集約化、規(guī)?；潭鹊牟粩嗵岣撸h(huán)境污染帶來的疫病風(fēng)險也日益加重，嚴(yán)重影響了我國養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。其中，孵化室環(huán)境污染是雛雞染病的重要途徑之一，可導(dǎo)致雛雞在孵化和出雛過程中感染某些病原（如沙門氏菌、大腸桿菌等），導(dǎo)致雛雞早期感染、死亡率增高和生長性能受阻等，因此做好孵化室環(huán)境消毒工作是控制雛雞早期感染、提高成活率和養(yǎng)殖效益的重要一環(huán)。沙門氏菌和大腸桿菌是雛雞的2種重要的致病菌[1]，其中沙門氏菌為革蘭氏陰性短小桿菌，常單獨存在或成對排列，不形成芽孢和莢膜，需氧及兼性厭氧，最適生長溫度為37 ℃，最適pH為6.8～7.8。除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外，其他沙門氏菌都有周身鞭毛。沙門氏菌在人或動物腸道內(nèi)寄生，有的可引發(fā)人畜共患病。該細(xì)菌在雞群內(nèi)以垂直傳播為主要傳播方式，也可通過污染的糞便、飼料、飲水、空氣或其他媒介水平傳播。沙門氏菌對雛雞的危害較大，能夠引起雞的沙門氏菌病，如雞白痢、雞副傷寒等。大腸桿菌為革蘭氏陰性卵圓形或短桿菌，中等大小，以單個或成對形式存在，需氧及兼性厭氧，最適宜生長溫度為37 ℃，最適pH為7.2～7.4，是人和動物腸道內(nèi)正常菌群的成員之一。在雛雞出生后數(shù)小時可經(jīng)口進(jìn)入消化道，大量繁殖定居，終生伴隨，并隨糞便排出，造成水源、土壤、空氣等污染。大腸桿菌如果侵入腸道以外的組織器官，即可引發(fā)雞群發(fā)生大腸桿菌病，臨床上主要表現(xiàn)為眼炎、氣囊炎、腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、輸卵管炎、大腸桿菌肉芽腫和敗血癥等[2]。

筆者通過對安徽省某大型種雞孵化場孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌污染情況進(jìn)行監(jiān)測，評估該孵化場的消毒程序、消毒劑的選擇和使用方法的可行性和實際效果，旨在為做好孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的消毒滅源工作提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料麥康凱培養(yǎng)基（青島高科園海博生物技術(shù)有限公司）；SS培養(yǎng)基（杭州百思生物技術(shù)有限公司）；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；直徑9 cm的一次性培養(yǎng)皿；噴霧消毒器；冰箱（型號為BCD-222，為合肥美菱股份有限公司產(chǎn)品）；恒溫箱（型號為SHP-250，為上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品）；高壓滅菌鍋（型號為XFS-280A+，為浙江新豐醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品）；超凈工作臺（型號為SW-D-2F，為上海博訊實業(yè)有限公司有限公司醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品）；消毒劑（安立消，由瑞普生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；過氧乙酸，由廣州粵豐動物保健有限公司生產(chǎn)；聚維酮碘，由山西新開元動物獸藥有限公司生產(chǎn)）。

1.2試驗方法

1.2.1孵化室現(xiàn)行消毒程序和消毒方法。

該場孵化室可分為5個功能區(qū)：入口處的消毒通道、種蛋貯藏室、孵化大廳、照蛋室和出雛廳。

孵化室入口處分別設(shè)置男、女2個更衣室和消毒通道，工作人員進(jìn)入孵化室必須更換工作服和鞋、帽并經(jīng)過消毒通道噴霧消毒后方可入內(nèi)。

種蛋收集后，先放入種蛋貯藏室。種蛋貯藏室分為消毒室和蛋庫兩部分。首先放入種蛋消毒室，種蛋在此碼盤上架后，在密閉的消毒室內(nèi)用臭氧進(jìn)行消毒，根據(jù)種蛋數(shù)量選擇30～50 min的消毒時間。種蛋用臭氧消毒后推入蛋庫內(nèi)保存，蛋庫內(nèi)濕度保持在70%～80%，溫度12～18 ℃。蛋庫地面每天用蘸有消毒藥水的濕拖把拖刷，空氣用相同消毒劑按照說明書規(guī)定比例稀釋后進(jìn)行噴霧消毒。

孵化大廳每天在清掃或沖刷干凈后，定時用選定的消毒劑進(jìn)行噴霧消毒；照蛋室和出雛廳在照蛋和出雛結(jié)束后，要對地面和墻壁進(jìn)行清掃或沖洗，并打開風(fēng)扇進(jìn)行通風(fēng)和排濁，待地面干燥后，關(guān)閉風(fēng)扇，用選定的消毒劑對室內(nèi)空氣和地面實施噴霧消毒。

孵化箱和出雛箱的消毒：孵化箱和出雛箱的頂部容易沉積灰塵和絨毛，應(yīng)定時用吸塵器吸除灰塵和絨毛。孵化箱內(nèi)部在種蛋推入前、出雛箱內(nèi)部在胚蛋推入后均使用高錳酸鉀和福爾馬林進(jìn)行熏蒸消毒，具體用量為：高錳酸鉀15 g/m3、福爾馬林30 mL/m2， 熏蒸時長15～20 min。

蛋盤和出雛盤均在使用后先用高壓水槍進(jìn)行沖洗清潔，放置陽光下曬干或者在清潔、通風(fēng)的室內(nèi)晾干后，再用選定的消毒劑按照使用說明書進(jìn)行噴霧消毒后備用。

1.2.2監(jiān)測方法

1.2.2.1監(jiān)測項目。孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的數(shù)量。

1.2.2.2采樣方法。采用平板暴露自然沉降法[3]采集樣品。

1.2.2.3監(jiān)測地點。種蛋貯藏室、孵化箱、孵化大廳、照蛋室、出雛廳。

1.2.2.4監(jiān)測位置。每個監(jiān)測地點每次監(jiān)測的位置固定，包括培養(yǎng)皿的放置高度（離地面1 m）和水平面等。

1.2.2.5采樣時長。通過預(yù)試驗來確定采樣時長。選用麥康凱培養(yǎng)基，采用自然沉降法采樣，在連續(xù)3 d未消毒的出雛廳內(nèi)收集樣品，以5 min為起點和間隔時長單位，設(shè)置5、10、15、20、25和30 min 6個采樣梯度時長，每個時長同時用3個培養(yǎng)皿進(jìn)行采樣。采樣結(jié)束后將樣品密封帶回實驗室，放置37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察并記錄細(xì)菌的菌落數(shù)量，以3個培養(yǎng)皿上的同類菌落平均數(shù)為參照，選擇在麥康凱培養(yǎng)皿上生長20個左右菌落的采樣時長作為此次試驗的采樣時長。

1.2.2.6監(jiān)測采樣時間。選用一種消毒劑連續(xù)消毒7 d，對后5 d進(jìn)行連續(xù)采樣監(jiān)測，每天在不同監(jiān)測點使用消毒劑消毒后1和12 h，分別進(jìn)行采樣監(jiān)測。

1.2.2.7細(xì)菌培養(yǎng)。將每次采樣后的培養(yǎng)基妥善封存，及時送回化驗室，置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察并記錄細(xì)菌種類及菌落數(shù)。

1.2.2.8主要孵化參數(shù)記錄。安排專人對不同條件下監(jiān)測期間內(nèi)的健雛率、弱雛率等孵化參數(shù)進(jìn)行記錄。

1.2.2.9消毒劑及其稀釋濃度。選擇過氧乙酸、安立消和聚維酮碘3種常用的消毒劑交替使用，稀釋濃度分別為1∶200、1∶300、1∶500。

1.2.3大腸桿菌和沙門氏菌菌落判定方法。選用麥康凱培養(yǎng)基為選擇性采樣培養(yǎng)基，SS培養(yǎng)基為沙門氏菌的進(jìn)一步鑒別培養(yǎng)基；根據(jù)大腸桿菌和沙門氏菌在以上鑒別培養(yǎng)基上生長的菌落形態(tài)、顏色等，結(jié)合細(xì)菌革蘭氏染色鏡檢結(jié)果進(jìn)行菌落判定。

1.2.3.1大腸桿菌與沙門氏菌在麥康凱培養(yǎng)基上生長的菌落特征[4]。大腸桿菌在麥康凱培養(yǎng)基上生長的菌落特征：菌落鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤。

沙門氏菌在麥康凱培養(yǎng)基上生長的菌落特征：無色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時為暗色，圓形，稍微凸起，邊緣整齊，濕潤光滑。

1.2.3.2大腸桿菌和沙門氏菌在SS培養(yǎng)基上生長菌落的特征[5]。大腸桿菌在SS培養(yǎng)基上生長的菌落特征：菌落生長一般或較差，該菌發(fā)酵乳糖，菌落呈桃紅色或者粉紅色。沙門氏菌在SS培養(yǎng)基上生長的菌落特征：生長良好，該菌不發(fā)酵乳糖，有的能產(chǎn)生硫化氫，菌落呈無色半透明或黑色。

1.2.4孵化室空氣中的細(xì)菌含量計算。按照奧氏公式[6]計算孵化室空氣中的細(xì)菌含量，即空氣中每立方米細(xì)菌數(shù)=50 000N/AT。式中，N為平板上生長的菌落數(shù)，A為所用的平板面積（cm2），T為平板檢測時暴露在空氣中的時間（min）。

2結(jié)果與分析

2.1監(jiān)測采樣預(yù)試驗結(jié)果由表1可知，當(dāng)采樣時長為20 min 時，平均生長菌落數(shù)量為19個，最接近于20個。為便于后續(xù)試驗結(jié)果的分析，故選擇采樣時長20 min作為此次試驗的采樣時長。

2.2未消毒狀況下孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的監(jiān)測結(jié)果

在連續(xù)7 d對孵化室不消毒的情況下，對后5 d實施孵化室空氣中沙門氏菌和大腸桿菌的連續(xù)監(jiān)測，結(jié)果見表2和表3。由表2和表3可知，各監(jiān)測點均可檢測到一定數(shù)量的沙門氏菌和大腸桿菌，以出雛廳數(shù)量最多，蛋庫數(shù)量最少；隨著未消毒時間的延長，細(xì)菌數(shù)量呈逐漸增多趨勢。每個監(jiān)測點和時間點的大腸桿菌污染量均較沙門氏菌污染量多。

2.3使用3種消毒劑消毒后的監(jiān)測結(jié)果在連續(xù)7 d使用某種消毒劑任一種對孵化室消毒后，對后5 d孵化室內(nèi)蛋庫、孵化箱、孵化廳、照蛋室、出雛廳空氣中沙門氏菌和大腸桿菌數(shù)量進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測。監(jiān)測結(jié)果表明，使用上述3種消毒劑按照孵化室現(xiàn)行消毒程序和消毒方法連續(xù)消毒3 d后，不同時間點各監(jiān)測點的沙門氏菌和大腸桿菌數(shù)量均降至零。

2.43種消毒劑消毒后和未消毒狀況下孵化出雛情況統(tǒng)計

由表4可知，使用以上3種消毒劑消毒后與未消毒狀況下，監(jiān)測期內(nèi)不同品種雞的種蛋孵化出雛平均健雛率表現(xiàn)為消毒后比未消毒狀況下好，使用3種消毒劑消毒后的混合品種平均健雛率分別較未消毒狀況下提高2.69、2.71和2.95百分點。

從圖1可以看出，同一品種雞在消毒和未消毒狀態(tài)下，品種817平均健雛率的增幅最大，為2.89%～3.49%；土雞次之，為2.29%～2.74%；新廣麻平均健雛率的增幅最小，為2.11%～2.54%。不同消毒劑消毒后生成的平均健雛率差異較小，消毒效果相近。

3討論

（1）孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌主要來自受污染的種蛋、蛋箱、出雛箱和運輸車輛以及人員等的攜帶，孵化過程中腐敗的破損蛋、亡蛋對環(huán)境的污染以及出雛時攜帶細(xì)菌的絨毛和灰塵等對空氣環(huán)境的污染[7]。該試驗結(jié)果表明，如果連續(xù)2 d以上不消毒，孵化室各個功能區(qū)的空氣中大腸桿菌和沙門氏菌的含量就會呈現(xiàn)不斷增加的趨勢，導(dǎo)致孵化室嚴(yán)重污染，其中以出雛廳和照蛋室污染最為嚴(yán)重，這與出雛時細(xì)菌隨著絨毛和灰塵在空中飛揚，以及后期照蛋時腐敗的亡蛋和死胚破損對環(huán)境造成的污染有關(guān)，因此選用適合的消毒劑和消毒程序可在連續(xù)2 d的消毒后殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌。

（2）安立消、過氧乙酸、聚維酮碘分別為陽離子表面活性劑、強(qiáng)氧化劑、碘制劑類消毒藥，是養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用廣泛、性價比較高的3種消毒劑。該試驗結(jié)果表明，雖然3種消毒劑的殺菌原理不同，但都能較好地殺滅孵化室空氣中的大腸桿菌和沙門氏菌，可以作為孵化室常規(guī)消毒的首選消毒劑。為了避免耐藥性的產(chǎn)生，建議以上3種消毒劑交替使用，每14 d更換一種消毒劑。李寶棟等[8]所報道的安立消和過氧乙酸對蛋雞舍空氣中大腸桿菌的消毒殺滅效果與該試驗結(jié)果相一致。

（3）選擇合適的消毒劑和消毒程序?qū)Ψ趸疫M(jìn)行消毒，能明顯提高孵化出雛時的健雛率。該試驗結(jié)果表明，使用上述3種消毒劑中的任何一種按照正確的使用方法消毒后，均能明顯提高不同品種雞孵化出雛時的健雛率，其中以817平均健雛率的增幅最大，為2.89%～3.49%；土雞次之，為2.29%～2.74%；新廣麻平均健雛率的增幅最小，為2.11%～2.54%。這可能與品種不同或此次監(jiān)測期間孵化批次及數(shù)量不等有關(guān)；對于同一品種雞，不同消毒劑消毒后產(chǎn)生的平均健雛率也略有差異，但變化幅度很小，這種差異是否因不

同消毒劑對孵化和出雛中的種蛋與雛雞產(chǎn)生一定的不良作用有關(guān)則有待進(jìn)一步探討。

4結(jié)論

沙門氏菌和大腸桿菌是對雛雞危害重大的2種細(xì)菌性病原，孵化室一旦被其污染，不僅會造成雛雞出雛率和健雛率下降，導(dǎo)致雛雞早期死亡率升高，生長性能下降，而且會嚴(yán)重影響孵化場的聲譽(yù)并導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)效益下降。因此，做好孵化室的消毒工作是提高孵化出雛效率和經(jīng)濟(jì)效益的重要環(huán)節(jié)。選擇適宜的消毒劑和執(zhí)行嚴(yán)格的消毒程序可以有效殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌，可以顯著提高出雛時的健雛率和早期成活率。安立消、過氧乙酸、聚維酮碘3種消毒劑均具有性價比高、易購買等特點，在采取正確的稀釋濃度、消毒方法和消毒程序后，可以有效殺滅孵化室空氣中的沙門氏菌和大腸桿菌，建議作為孵化室消毒的首選消毒劑交替選用。

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