裘 璐, 梁 妍, 唐貴華, 苑春茂, 郝小燕*, 何紅平*
(1.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,貴州貴陽 550004;2.中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室,云南昆明 650201)
茸毛木藍Indigofera stachyoidesLindl.為豆科木藍屬植物,其根又名血人參、鐵刷子、山紅花、紅苦刺,為貴州省少數(shù)民族用藥。該植物廣泛分布于貴州中西部各苗鄉(xiāng)及云南、廣西等地。據(jù)記載[1],血人參性溫,味微苦澀,有補氣攝血,滋陰補腎之功效,用于崩漏、跌打、風(fēng)濕、肝硬化等。血人參也為化療藥輔助中藥芪膠升白膠囊的組成成分之一。然而,迄今為止,國內(nèi)外學(xué)者僅報道了血人參地上部分及它的揮發(fā)性成分[2]。為更好地控制該藥材的質(zhì)量,合理開發(fā)和利用該資源,完善芪膠升白膠囊的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究,本實驗首次對血人參進行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。現(xiàn)報道從中分離鑒定的7個化合物。
1.1 材料 血人參,采自貴州六枝特區(qū),經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院陳德媛研究員鑒定為豆科木藍屬植物茸毛木藍Indigofera stachyoidesLindl.的根。
1.2 儀器與試劑 1D NMR用BRUKER AM-400和DRX-500型核磁共振儀測定,以TMS為內(nèi)標;質(zhì)譜用 VG Auto Spec-3000型及 Waters Autospec Premier P776型質(zhì)譜儀測定;正相層析硅膠G(60~80目,300~400目)和高效薄層層析板(GF254)均為青島海洋化工廠生產(chǎn);所用反相色譜硅膠C18(40~75 μm)為Fuji Silysia化學(xué)公司產(chǎn)品;凝膠色譜為Sephadex LH-20(GE Healthcare Bio-Xciences AB);用5%H2SO4乙醇溶液作為常規(guī)顯色試劑。
血人參干燥根10.0 kg,經(jīng)粉碎成粗品后,用95%的乙醇回流提取3次(4 h,4 h,3 h),合并提取液,回收乙醇得濃稠浸膏。用適量水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得3部分萃取物。其中,乙酸乙酯萃取物 (290 g)以粗硅膠(60~80目)1∶1拌樣,200~300目硅膠裝柱,三氯甲烷-甲醇 (95∶5→50∶50)梯度洗脫,分為8個組分 (A→H)。其中,組分C經(jīng)反相柱層析(甲醇-水梯度洗脫)、反復(fù)硅膠柱層析 (三氯甲烷-丙酮-甲酸梯度洗脫)、凝膠色譜 Sephadex LH-20(甲醇-水洗脫)和重結(jié)晶純化,分離得到化合物1(200.0 mg)、2(11.6 mg)、3(9.4 mg)、4和 5(13.6 mg)、6和7(82.8 mg)。
化合物1:白色針狀結(jié)晶 (MeOH)。ESI-MSm/z491 [M -H]-。1H-NMR(500 MHz,pyridined5)δ:7.31(1H,d,J=1.3 Hz,H-2),7.19(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),7.01(1H,dd,J=8.1,1.3 Hz,H-6),4.56(1H,m,H-7),2.38(1H,m,H-8),4.22 ~ 4.29(1H,m,H-9a),3.13(1H,dd,J=15.6,4.4 Hz,H-9b),6.85(1H,s,H-2'),6.83(1H,s,H-5'),3.58~3.64(2H,m,H-7'),2.35 ~ 2.51(1H,m,H-8'),4.03 ~ 4.15(2H,m,H-9'),3.70(3H,s,3-OCH3),3.77(3H,s,3'-OCH3),4.62(1H,d,J=7.3 Hz,H-1″),4.05(1H,m,H-2″),4.12(1H,m,H-3″),4.18 ~4.21(1H,m,H-4″),4.58(1H,m,H-5″a),3.33(1H,dd,J=16.0,11.4 Hz,H-5″b)。13C-NMR(125 MHz,pyridine-d5)δ:138.0(C-1),114.4(C-2),148.6(C-3),146.5(C-4),116.6(C-5),122.6(C-6),47.4(C-7),45.5(C-8),68.6(C-9),128.2(C-1'),112.6(C-2'),147.0(C-3'),146.1(C-4'),118.0(C-5'),134.1(C-6'),33.9(C-7'),39.2(C-8'),64.3(C-9'),56.1(3-OCH3),55.9(3'-OCH3),106.1(C-1″),75.2(C-2″),78.6(C-3″),71.2(C-4″),67.3(C-5″)。波譜數(shù)據(jù)與文獻[3]報道的一致,故鑒定為schizandriside。
化合物2:白色針狀結(jié)晶 (MeOH)。ESI-MSm/z551[M -H]-.1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.42(1H,s,H-2),6.42(1H,s,H-6),4.37(1H,d,J=6.6 Hz,H-7),2.02 ~ 2.07(1H,m,H-8),3.83(1H,m,H-9a),3.41(1H,dd,J=9.6,3.7 Hz,H-9b),6.56(1H,s,H-2'),2.71(1H,dd,J=15.5,4.5 Hz,H-7'a),2.63(1H,dd,J=15.5,10.7 Hz,H-7'b),1.66 ~ 1.73(1H,m,H-8'),3.64(1H,dd,J=10.8,4.1 Hz,H-9'a),3.54(1H,dd,J=10.8,6.5 Hz,H-9'b),3.74(3H,s,3-OCH3),3.74(3H,s,5-OCH3),3.84(3H,s,3'-OCH3),3.31(3H,s,5'-OCH3),4.21(1H,d,J=7.6 Hz,H-1″),3.21(1H,m,H-2″),3.27 ~ 3.29(1H,m,H-3″),3.46 ~ 3.47(1H,ddd,J=10.4,9.5,5.6 Hz,H-4″),3.82(1H,m,H-5″a),3.17(1H,m,H-5″b)。13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:139.4(C-1),107.1(C-2),149.0(C-3),134.6(C-4),149.0(C-5),107.1(C-6),43.0(C-7),46.7(C-8),71.1(C-9),130.2(C-1'),107.9(C-2'),148.7(C-3'),139.0(C-4'),147.7(C-5'),126.4(C-6'),33.9(C-7'),40.6(C-8'),66.2(C-9'),56.9(3-OCH3),56.9(5-OCH3),56.7(3'-OCH3),60.1(5'-OCH3),105.5(C-1″),75.0(C-2″),78.0(C-3″),71.3(C-4″),67.0(C-5″)。波譜數(shù)據(jù)與文獻[3-4]報道的一致,故鑒定為lyoniside。
化合物3:淡黃色粉末 (MeOH)。ESI-MSm/z313 [M+Na]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:4.81(1H,brs,H-2),4.17(1H,dd,J=4.6,2.8 Hz,H-3),2.85(1H,dd,J=16.8,4.6 Hz,H-4a),2.75(1H,dd,J=16.8,2.8 Hz,H-4b),5.93(1H,d,J=2.3 Hz,H-6),5.90(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),6.96(1H,d,J=1.6 Hz,H-2'),6.75(1H,d,J=8.2 Hz,H-5'),6.79(1H,dd,J=8.2,1.6 Hz,H-6')。13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:79.9(C-2),67.5(C-3),29.3(C-4),157.7(C-5),96.3(C-6),158.0(C-7),95.8(C-8),157.4(C-9),100.0(C-10),132.3(C-1'),115.3(C-2'),145.8(C-3'),146.0(C-4'),119.4(C-5'),115.8(C-6')。波譜數(shù)據(jù)與文獻[5]報道的一致,故鑒定為表兒茶素[(-)-epicatechin]。
化合物4和5:白色結(jié)晶性粉末 (MeOH)。ESI-MSm/z:405 [M+Na]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:α-端基異構(gòu)體:5.22(1H,d,J=3.6 Hz,H-1),3.52(1H,dd,J=10.9,7.5 Hz,H-2),4.60(1H,dd,J=10.0,3.6 Hz,H-3),3.87(1H,t,J=9.5 Hz,H-4),3.99(1H,ddd,J=9.9,5.2,1.9 Hz,H-5),4.42(1H,dd,J=11.9,2.0 Hz,H-6a),4.26(1H,dd,J=11.9,5.4 Hz,H-6b),3.08(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2),3.02(4H,m,NO2CH2CH2COO-× 2),4.72(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2);β-端基異構(gòu)體:4.72(1H,m,H-1),3.52(1H,dd,J=10.9,7.5 Hz,H-2),4.60(1H,dd,J=10.0,3.6 Hz,H-3),3.87(1H,t,J=9.5 Hz,H-4),3.99(1H,ddd,J=9.9,5.2,1.9 Hz,H-5),4.48(1H,dd,J=11.9,2.0 Hz,H-6a),4.42(1H,dd,J=11.9,2.0 Hz,H-6b),3.08(4H,m,NO2CH2CH2COO-×2),3.02(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2),4.72(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2)。13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:α-端基異構(gòu)體:91.1(C-1),71.9(C-2),75.9(C-3),70.4(C-4),71.8(C-5),65.2(C-6),171.7(NO2CH2CH2COO-3),31.9(NO2CH2CH2COO-3),70.8(NO2CH2CH2COO-3),171.5(NO2CH2CH2COO-6),31.8(NO2CH2CH2COO-2),70.7(NO2CH2CH2COO-3);β-端基異構(gòu)體:96.1(C-1),75.3(C-2),77.1(C-3),71.6(C-4),75.8(C-5),65.2(C-6),171.7(NO2CH2CH2COO-3),31.9(NO2CH2CH2COO-3),70.8(NO2CH2CH2COO-3),171.5(NO2CH2CH2COO-6),31.8(NO2CH2CH2COO-2),70.7(NO2CH2CH2COO-3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻[6]報道的一致,故鑒定為 3,6-二-O-(3-硝基丙?;?-D-吡喃葡萄糖 α-和β-端基異構(gòu)體混合物。
化合物6和7:白色結(jié)晶性粉末 (MeOH)。ESI-MSm/z405 [M+Na]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:α-端基異構(gòu)體:5.09(1H,d,J=3.2 Hz,H-1),3.43(1H,dd,J=9.5,3.3 Hz,H-2),4.68(1H,m,H-3),3.54(1H,m,H-4),4.14(1H,m,H-5),4.14(1H,m,H-6a);4.26(1H,dd,J=11.9,6.0 Hz,H-6b),3.20(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2),3.00(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2),4.68(4H,m,NO2CH2CH2COO- ×2);β-端基異構(gòu)體:4.50(1H,d,J=7.7 Hz,H-1),3.43(1H,dd,J=9.5,3.3 Hz,H-2),4.68(1H,m,H-3),3.54(1H,m,H-4),3.81(1H,m,H-5),4.37(1H,m,H-6a),4.14(1H,m,H-6b),3.20(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2),3.00(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2),4.68(4H,m,NO2CH2CH2COO- × 2)。13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:α-端基異構(gòu)體:93.9(C-1),73.1(C-2),72.6(C-3),73.6(C-4),68.2(C-5),64.5(C-6),171.5(NO2CH2CH2COO-4),31.9(NO2CH2CH2COO-4),70.8(NO2CH2CH2COO-4),171.2(NO2CH2CH2COO-6),31.8(NO2CH2CH2COO-6),70.5(NO2CH2CH2COO-4);β-端基異構(gòu)體:98.4(C-1),76.2(C-2),75.4(C-3),72.4(C-4),72.8(C-5),64.4(C-6),171.5(NO2CH2CH2COO-4),31.9(NO2CH2CH2COO-4),70.8(NO2CH2CH2COO-4),171.2(NO2CH2CH2COO-6),31.8(NO2CH2CH2COO-6),70.5(NO2CH2CH2COO-4)。波譜數(shù)據(jù)與文獻[7]報道的一致,故鑒定為 4,6-二-O-(3-硝基丙酰基)-D-吡喃葡萄糖 α-和β-端基異構(gòu)體混合物。
化合物schizandriside(1)和lyoniside(2)為木脂素單糖苷類化合物,文獻[3]報道其均有較好清除與腫瘤有密切關(guān)系的自由基的作用?;衔?-)-epicatechin(3)為典型的黃烷醇類化合物,文獻[8]報道其是綠茶兒茶素類化合物 (GTC)的有效單體之一,不僅可以通過抑制抗癌藥外流而增強對癌細胞的殺傷作用,還不會增加抗癌藥的毒副作用,可以輔助化療、放療。因此,它們的發(fā)現(xiàn)可以一定程度上說明血人參在化療藥輔助中藥復(fù)方芪膠升白膠囊中可能發(fā)揮的作用,有利于完善芪膠升白膠囊的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。
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