調(diào)節(jié)性T細胞與消化系統(tǒng)疾病關系的研究①

嚴展鵬 蔡雪婷 楊 杰 盧悟廣 胡春萍 曹 鵬

(江蘇省中醫(yī)藥研究院細胞與分子生物學實驗室，南京210028)

1 引言

近年來調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells，Tregs)成為免疫學研究的熱點，大量的科學實驗證明Tregs在機體維持自身免疫耐受方面起著關鍵的作用，這些細胞功能的失調(diào)可以導致嚴重的自身免疫性疾?。?］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細胞表達 CD25(IL-2受體的α鏈)，該類細胞主要來源于胸腺中的CD4+T細胞，能夠在體內(nèi)外廣泛抑制免疫細胞包括CD4+T細胞、CD8+T細胞、自然殺傷性細胞、B細胞、抗原呈遞細胞(Antigen presenting cells，APCs)等的增殖和生物學效應［2］。臨床和基礎研究表明 CD4+CD25+Tregs和自身免疫性疾病、腫瘤發(fā)生和耐受、過敏反應、慢性炎癥反應以及移植物排斥等生理學病變過程有著密切的聯(lián)系［3-6］。

消化道疾病是人類比較常見的疾病，包括炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)、結(jié)腸炎、胃癌、結(jié)腸癌、食道癌、大腸癌和直腸癌等，例如炎癥性腸病是一種病因復雜的腸胃道原發(fā)性炎癥性疾病，IBD和自身免疫系統(tǒng)功能的紊亂有著密切的聯(lián)系，研究表明IBD和CD4+CD25+Tregs之間有著密切的聯(lián)系［7］。調(diào)節(jié)性T細胞有免疫抑制的功能，研究發(fā)現(xiàn)在患有癌癥的病人體內(nèi)有CD4+CD25+Tregs含量的增加，這些發(fā)現(xiàn)對于臨床上利用 CD4+CD25+Tregs的功能來治療某些腫瘤提供了新的方法［8，9］。本文主要以調(diào)節(jié)性T細胞與某些消化道疾病的關系研究進展做一綜述。

2 調(diào)節(jié)性T細胞

2．1 調(diào)節(jié)性T細胞 免疫學家們早在20世紀70年代就知道免疫系統(tǒng)中存在著一類具有免疫抑制功能的T細胞亞群，這群細胞在機體中起著免疫負調(diào)節(jié)作用，在機體免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定方面扮演著非常重要的角色［3］。Sakaguchi等［10］在 1995 年首次報道在正常成年未免疫的小鼠外周血中大約有10%的CD4+T細胞能夠表達CD25分子，通過特異性單抗將來自小鼠淋巴結(jié)和脾臟的CD4+T細胞中的CD25+T細胞刪除掉，然后將這些細胞接種到無胸腺的小鼠中，從組織學和血清學上進行檢測，這些接種的小鼠都自發(fā)性的患上了多種自身免疫性疾病(如甲狀腺炎、胃炎、唾液腺炎、腎上腺炎、卵巢炎、腎小球腎炎和多發(fā)性關節(jié)炎等)，一些小鼠還發(fā)生了移植物抗宿主樣消耗性疾病(Graft versus-host disease，GVHD)，然而在一定的時間內(nèi)將 CD4+CD25+T細胞過繼輸入到小鼠體內(nèi)可以阻止自身免疫性疾病的發(fā)生。這些研究結(jié)果表明，機體中的CD4+CD25+T細胞通過抑制免疫應答來維持對自身和非自身抗原的免疫耐受。

調(diào)節(jié)性T細胞具有多種亞型細胞群，目前研究最多的是CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞，調(diào)節(jié)性T細胞主要分為天然型調(diào)節(jié)性T細胞(natural regulatory T cells，nTregs)和誘導型調(diào)節(jié)性 T細胞(induced regulatory T cells，iTregs)［11］。Tregs 能夠表達多種T細胞受體(T cell receptor，TCR)，TCR信號能夠維持Tregs的表型和控制Tregs的遷移，對于調(diào)節(jié)性T細胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)和功能具有重要作用［12］。調(diào)節(jié)性T細胞能夠特異性的表達轉(zhuǎn)錄因子叉頭蛋白 P3(Forkhead Box P3，F(xiàn)OXP3)，F(xiàn)OXP3 被認為是Tregs的特異性標志，對于維持調(diào)節(jié)性T細胞的免疫抑制功能起著重要的作用［13］。位于 X染色體上FOXP3基因的突變會導致Tregs的生長發(fā)育缺陷，使得機體患上X染色體性聯(lián)合自身免疫失調(diào)綜合癥(Immune dysregulation，polyendocrinopathy，enteropathy，and X-linked inheritance，IPEX)［14］。調(diào)節(jié)性T細胞不僅能夠表達重要的膜表面分子CD25，還可以表達殺傷性T淋巴細胞相關抗原-4(Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-4)和糖皮質(zhì)激素誘導的腫瘤壞死因子家族相關基因(Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family-related gene，GITR)等膜分子，這些細胞表面膜分子對于Tregs的功能和增殖都具有重要的調(diào)節(jié)作用［15］。調(diào)節(jié)性T細胞還可以分泌具有免疫抑制功能的細胞因子，例如IL-10和轉(zhuǎn)移生長因子β(Transforming growth factor β，TGF-β)等［16］。調(diào)節(jié)性 T 細胞存在于淋巴結(jié)、脾臟和外周血中，維持著免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定，能夠在體內(nèi)抑制多種免疫細胞的功能，例如抗原呈遞細胞和效應性 T 細胞(effector T cell，Teff)［16］。鑒于調(diào)節(jié)性T細胞的特性和功能，在臨床上具有很大的應用潛能，研究發(fā)現(xiàn)在體外用白細胞介素2(Interleukin 2，IL-2)和抗CD3 mAb等細胞因子來擴增的人CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞沒有失去免疫抑制功能，因此通過改變?nèi)梭w中的Tregs的數(shù)量和分布有望治療某些自身反應性疾病、炎癥反應、過敏性疾病和腫瘤等［17］。

2．2 調(diào)節(jié)性T細胞的免疫作用機制 調(diào)節(jié)性T細胞在免疫系統(tǒng)中的抑制作用機制目前研究的還不是很清楚，同樣對Tregs免疫機理方面的研究也是免疫學熱點之一?？茖W家們常常用體外細胞增殖和Tregs特異性基因敲除的方法來研究調(diào)節(jié)性T細胞的免疫作用機制。目前研究結(jié)果表明調(diào)節(jié)性T細胞在體內(nèi)的免疫抑制功能依賴于IL-10和TGF-β等細胞因子或者是由免疫抑制性受體CTLA-4介導的細胞接觸［16］。

調(diào)節(jié)性T細胞可以分泌多種炎癥相關的細胞因子，IL-10和TGF-β等細胞因子對于Tregs抑制功能的發(fā)揮有著重要的作用。TGF-β能夠和IL-2協(xié)同阻止細胞凋亡和促進效應性細胞活性，并且TGF-β對細胞毒性T淋巴細胞的增殖起著重要作用。重要的是，TGF-β能夠增加CD4+T細胞中CD25的表達，刺激增加外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量，并且這些增殖的Tregs能夠抑制CD8+T細胞的增殖和細胞毒作用［18］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞能夠抑制抗原刺激的T細胞分泌IL-2，從而抑制了T細胞的增殖［19］。IL-10在免疫抑制中扮演著重要的角色，IL-10能夠抑制效應性淋巴細胞、單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生炎癥細胞因子，也能夠誘導抗原呈遞細胞表達MHCⅡ型分子［20］。IL-10可以下調(diào)APC細胞表面的共刺激分子，于是減少了APC細胞和 T細胞的作用，從而下調(diào)機體的免疫功能［21］。因此TGF-β和 IL-10等細胞因子對于機體急性移植排斥和炎癥反應等疾病的抑制有重要作用［20，22］。

研究表明，調(diào)節(jié)性T細胞和效應性T細胞也可以通過細胞與細胞之間的直接或間接接觸來調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)的功能，這可能也是Tregs發(fā)揮免疫抑制作用的重要途徑［23］。Onishi等［24］在2008 年根據(jù)自己和前人的研究結(jié)果提出了Tregs對其他T細胞的激活和增殖進行抑制的兩步模型:首先白細胞功能相關抗原1(Leukocyte function-associated antigen-1，LFA-1)能夠促使調(diào)節(jié)性T細胞和未成熟樹突狀細胞(Dendritic cells，DCs)的聚集;隨后 LFA-1和CTLA-4能夠下調(diào)DCs上面CD80和CD86的表達，這樣會阻止APC細胞對T細胞的活化，從而導致了特異性的免疫抑制和耐受。淋巴細胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3，LAG-3)是Tregs表達的CD4相關跨膜蛋白，LAG-3能夠與 APC上的MHCⅡ分子結(jié)合從而抑制DCs的激活和免疫刺激能力，這很有可能是Tregs發(fā)揮免疫功能的一種新的分子機制［25］。調(diào)節(jié)性T細胞分泌的纖維蛋白原樣蛋白2(Fibrinogen-like protein 2，F(xiàn)GL2)是一種重要的免疫調(diào)節(jié)分子，F(xiàn)GL2能夠下調(diào)T細胞的活性、抑制DC的成熟和誘導B細胞的凋亡，還有抗FGL2抗體在體外能夠完全抑制調(diào)節(jié)性T細胞的活性［26］。

CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞的免疫抑制分子機制是復雜的，Tregs對機體免疫系統(tǒng)的作用和細胞因子的分泌、細胞間的接觸、細胞相關基因的表達以及相關膜蛋白的表達都有著密切的關系，對Tregs免疫抑制機制方面的研究結(jié)果也是越來越多。新發(fā)現(xiàn)的細胞因子IL-35具有重要的生理免疫功能，可能介導調(diào)節(jié)性T細胞對效應性T細胞的抑制作用［27］。β-半乳糖苷結(jié)合蛋白(Galectin-1)被分泌到Tregs的表面，能夠破壞Teff細胞的細胞周期和抑制前炎癥因子的產(chǎn)生［28］?；罨腃D4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞能夠誘導顆粒酶B(Granzyme B)的上調(diào)，顆粒酶B能夠引起自然殺傷性細胞和T細胞的死亡［29］。神經(jīng)菌毛素1(Neuropilin 1，Nrp1)能夠促進Tregs和DCs的相互作用［30］。相關的研究很多，這將會為闡明調(diào)節(jié)性T細胞的分子作用機制和臨床應用提供有力的支撐。

3 調(diào)節(jié)性T細胞與消化道疾病

近年來的研究表明某些消化道疾病(如IBD、胃癌和慢性腸胃炎等)與免疫系統(tǒng)中 CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞的功能有著密切的聯(lián)系。炎癥性腸病是一種慢性的特發(fā)性腸道疾病，IBD的發(fā)病機制至今也沒有明確的定論，IBD往往是由于遺傳因素和環(huán)境因素等多重因素的結(jié)合而導致的。IBD主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn's disease，CD)。目前研究認為腸胃黏膜免疫紊亂是導致IBD發(fā)生的重要原因之一，調(diào)節(jié)性T細胞在免疫系統(tǒng)中起著負向的免疫調(diào)節(jié)作用，Tregs和多種自身免疫性疾病的發(fā)生關系密切，一些科學家認為調(diào)節(jié)性T細胞能夠有效地阻止或者下調(diào)IBD的發(fā)生，炎癥性疾病主要是由分泌促炎因子的效應性T細胞和具有免疫抑制功能的調(diào)節(jié)性T細胞的相互作用而共同調(diào)節(jié)的［31］。Maul等［7］通過對來自IBD病人外周血中分離的CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞的研究發(fā)現(xiàn)，在IBD病人中CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細胞不僅數(shù)量增多并且沒有喪失對免疫細胞的抑制能力，但是隨著病人病情的發(fā)展FOXP3+Tregs的數(shù)量是變化的。Yu等［32］研究發(fā)現(xiàn)和正常人體相比較，在UC患者結(jié)腸中炎癥和非炎癥區(qū)域的固有層中FOXP3+CD4+T細胞的數(shù)量是增加的，UC患者腸系膜淋巴結(jié)(Mesenteric lymph nodes，MLN)中CD4+CD25+T細胞能夠表達FOXP3并且能夠抑制自體同源的MLN中CD4+CD25－T細胞的增殖，另外通過細胞共培養(yǎng)實驗表明CD4+CD25+T細胞能夠抑制Th1(IFN-γ、IL-2)和Th2(IL-5、IL-13)細胞分泌細胞因子。Kelsen 等［33］研究發(fā)現(xiàn)來自克羅恩病患者和正常人體的FOXP3+CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞均具有調(diào)節(jié)功能，并且都能夠抑制自體同源的CD4+T細胞的增殖和細胞因子的分泌。輔助性 T17細胞(T helper 17 cells，Th17)是一類新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞型，該類細胞在免疫系統(tǒng)中具有重要的調(diào)節(jié)作用，Th17與機體的炎癥反應、自身免疫性疾病和腫瘤等疾病有密切關系［34］。Eastaff-Leung 等［35］研究發(fā)現(xiàn)在 IBD 患者外周血中Tregs和Th17細胞的數(shù)量分別減少和增加，這就說明Th17和Tregs之間平衡的失調(diào)以及相互作用異常對于IBD的發(fā)生具有重要的作用。這些研究結(jié)果表明IBD的發(fā)病原因復雜而多變，IBD和CD4+CD25+Tregs的數(shù)量和功能異常有著密切關聯(lián)，如今已將調(diào)節(jié)性T細胞作為IBD疾病臨床治療的重要靶點之一。

Cheng［36］等發(fā)現(xiàn)在胃炎、消化性潰瘍和胃腺癌患者中FOXP3+調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量是增加的，調(diào)節(jié)性T細胞的數(shù)量和慢性胃炎、萎縮性胃炎和腺癌的組織學等級是呈正相關的。Chen［37］等研究發(fā)現(xiàn)在賁門竇癌小鼠模型中，誘導和激活引流淋巴結(jié)中的CD4+CD25+Tregs能夠抑制腫瘤微環(huán)境的免疫反應。Szczepanik［38］等研究發(fā)現(xiàn)在胃癌患者的外周血中CD4+CD25+Tregs數(shù)量的絕對值是減少的，但是這種現(xiàn)象沒有在結(jié)直腸癌患者身上發(fā)現(xiàn)。然而不少實驗的研究結(jié)果也是相互矛盾的，Yuan等［39］研究發(fā)現(xiàn)在胃癌患者中胃癌細胞能夠通過分泌細胞因子TGF-β1來誘導CD4+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細胞的增殖，這說明胃癌的發(fā)生不僅和調(diào)節(jié)性T細胞功能和數(shù)量的變動有關，并且腫瘤微環(huán)境和免疫細胞之間的相互作用也調(diào)節(jié)著腫瘤的發(fā)生發(fā)展。IL-6能夠調(diào)節(jié)T淋巴細胞的抗凋亡能力和誘導激活Th17細胞，并且能夠控制Tregs和Th17細胞平衡，因此IL-6就可以用來治療和炎癥相關的消化道疾?。?0］。TGF-β誘導的FOXP3+調(diào)節(jié)性T細胞能夠抑制Th1細胞誘導的實驗性結(jié)腸炎［41］。運用抗CD25單克隆抗體和阻斷FOXP3信號通路等可以調(diào)控體內(nèi)的調(diào)節(jié)性T細胞，用于治療相關的腸胃道炎癥疾?。?2］。調(diào)節(jié)性T細胞在臨床研究上面具有很大的應用潛能，現(xiàn)在醫(yī)生可以通過單克隆抗體技術、RNA干擾技術和基因工程技術等來改變調(diào)節(jié)性T細胞的遷移、分化、增殖、功能和信號轉(zhuǎn)導，來治療和Tregs相關的消化道疾病、自身免疫性疾病和腫瘤［43-45］。

4 調(diào)節(jié)性T細胞與其他疾病

調(diào)節(jié)性T細胞在維持機體的免疫系統(tǒng)穩(wěn)定方面發(fā)揮著不可或缺的作用，人類多種疾病的發(fā)生都與調(diào)節(jié)性T細胞有著密切的聯(lián)系［46］。1型糖尿病(type 1 diabetes，T1D)是一種慢性的自身免疫性疾病，自身反應性T細胞不斷地損害胰島中分泌胰島素的β細胞，研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細胞不僅可以抑制效應性T細胞，還可以抑制組織的浸潤來治療或者緩解T1D的病情［47］。Mottonen 等［48］研究發(fā)現(xiàn)在類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)患者關節(jié)滑液中的CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞能夠高水平的表達CTLA-4、GITR、OX40和FOXP3，而外周血中的調(diào)節(jié)性T細胞卻沒有明顯變化，調(diào)節(jié)性T細胞能夠調(diào)節(jié)效應性T細胞和APCs的功能，從而影響RA的發(fā)生。同樣，系統(tǒng)性紅斑狼瘡和多發(fā)性硬化等自身免疫性疾病也同CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞有著重要的關系?，F(xiàn)代醫(yī)學還利用調(diào)節(jié)性T細胞的特性來治療器官移植帶來的排斥反應，調(diào)節(jié)性T細胞能夠抑制移植部位自身免疫反應來減輕對機體移植物的損害［49，50］。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞對于腫瘤的發(fā)生、遷移和擴散等也有著重要作用，腫瘤微環(huán)境中的細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞等免疫性細胞的功能改變或者缺失和Tregs有著密切關聯(lián)［4］。

5 結(jié)論

調(diào)節(jié)性T細胞作為一類重要的CD4+T細胞亞型，在維持機體外周耐受和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)穩(wěn)定方面起著關鍵的作用。消化道疾病是人類常見的復雜疾病，研究表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞與炎癥性腸病、胃癌和直腸癌等眾多消化道疾病的發(fā)生有著密切的聯(lián)系，臨床上面可以將調(diào)節(jié)性T細胞作用靶點，這為多種疾病的免疫治療提供了新的治療策略。調(diào)節(jié)性T細胞是現(xiàn)代醫(yī)學和免疫學的研究熱點，其免疫作用機制的闡明和體外高純度CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的分離將會為臨床應用提供堅實的基礎。

1 Fehervari Z，Sakaguchi S．CD4+Tregs and immune control［J］．J Clin Invest，2004;114(9):1209-1217．

2 Sakaguchi S，Yamaguchi T，Nomura T et al．Regulatory T cells and immune tolerance［J］．Cell，2008;133(5):775-787．

3 Sakaguchi S，Wing K，Miyara M．Regulatory T cells-a brief history and perspective［J］． Eur J Immunol，2007;37(Suppl)1:S116-123．

4 Curiel T J．Tregs and rethinking cancer immunotherapy［J］．J Clin Invest，2007;117(5):1167-1174．

5 Walsh P T，Taylor D K，Turka L A．Tregs and transplantation tolerance［J］．J Clin Invest，2004;114(10):1398-1403．

6 Robinson D S，Larche M，Durham S R．Tregs and allergic disease［J］．J Clin Invest，2004;114(10):1389-1397．

7 Maul J，Loddenkemper C，Mundt P et al．Peripheral and intestinal regulatory CD4+CD25(high)T cells in inflammatory bowel disease［J］．Gastroenterology，2005;128(7):1868-1878．

8 Curiel T J．Regulatory T cells and treatment of cancer［J］．Curr Opin Immunol，2008;20(2):241-246．

9 Yamaguchi T，Sakaguchi S．Regulatory T cells in immune surveillance and treatment of cancer［J］．Semin Cancer Biol，2006;16(2):115-123．

10 Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M et al．Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alphachains(CD25)．Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases［J］．J Immunol，1995;155(3):1151-1164．

11 Sakaguchi S．Naturally arising CD4+regulatory T cells for immunologic self-tolerance and negative control of immune responses［J］．Annu Rev Immunol，2004;22:531-562．

12 Kim J K，Klinger M，Benjamin J et al．Impact of the TCR signal on regulatory T cell homeostasis，function，and trafficking［J］．PLoS One，2009;4(8):e6580．

13 Campbell D J，Ziegler S F．FOXP3 modifies the phenotypic and functional properties of regulatory T cells［J］．Nat Rev Immunol，2007;7(4):305-310．

14 Gambineri E，Torgerson T R，Ochs H D．Immune dysregulation，polyendocrinopathy， enteropathy， and X-linked inheritance(IPEX)，a syndrome of systemic autoimmunity caused by mutations of FOXP3，a critical regulator of T-cell homeostasis［J］．Curr Opin Rheumatol，2003;15(4):430-435．

15 Mahic M，Yaqub S，Bryn T et al．Differentiation of naive CD4+T cells into CD4+CD25+FOXP3+regulatory T cells by continuous antigen stimulation［J］．J Leukoc Biol，2008;83(5):1111-1117．

16 Rudensky A Y，Campbell D J．In vivo sites and cellular mechanisms of T reg cell-mediated suppression［J］．J Exp Med，2006;203(3):489-492．

17 Levings M K，Sangregorio R，Roncarolo M G．Human cd25(+)cd4(+)t regulatory cells suppress naive and memory T cell proliferation and can be expanded in vitro without loss of function［J］．J Exp Med，2001;193(11):1295-1302．

18 Yamagiwa S，Gray J D，Hashimoto S et al．A role for TGF-beta in the generation and expansion of CD4+CD25+regulatory T cells from human peripheral blood［J］． J Immunol，2001;166(12):7282-7289．

19 Takahashi T，Kuniyasu Y，Toda M et al．Immunologic self-tolerance maintained by CD25+CD4+naturally anergic and suppressive T cells:induction of autoimmune disease by breaking their anergic/suppressive state［J］．Int Immunol，1998;10(12):1969-1980．

20 Krogulska A，Borowiec M，Polakowska E et al．FOXP3，IL-10，and TGF-beta genes expression in children with IgE-dependent food allergy［J］．J Clin Immunol，2011;31(2):205-215．

21 Hara M，Kingsley C I，Niimi M et al．IL-10 is required for regulatory T cells to mediate tolerance to alloantigens in vivo［J］．J Immunol，2001;166(6):3789-3796．

22 Gorelik L，F(xiàn)lavell R A．Transforming growth factor-beta in T-cell biology［J］．Nat Rev Immunol，2002;2(1):46-53．

23 Suto A，Nakajima H，Ikeda K et al．CD4(+)CD25(+)T-cell development is regulated by at least 2 distinct mechanisms［J］．Blood，2002;99(2):555-560．

24 Onishi Y，F(xiàn)ehervari Z，Yamaguchi T et al．Foxp3+natural regulatory T cells preferentially form aggregates on dendritic cells in vitro and actively inhibit their maturation［J］．Proc Natl Acad Sci USA，2008;105(29):10113-10118．

25 Liang B，Workman C，Lee J et al．Regulatory T cells inhibit dendritic cells by lymphocyte activation gene-3 engagement of MHC class II［J］．J Immunol，2008;180(9):5916-5926．

26 Shalev I，Liu H，Koscik C et al．Targeted deletion of fgl2 leads to impaired regulatory T cell activity and development of autoimmune glomerulonephritis［J］．J Immunol，2008;180(1):249-260．

27 Collison L W，Workman C J，Kuo T T et al．The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T-cell function［J］．Nature，2007;450(7169):566-569．

28 Garin M I，Chu C C，Golshayan D et al．Galectin-1:a key effector of regulation mediated by CD4+CD25+T cells［J］．Blood，2007;109(5):2058-2065．

29 Gondek D C，Lu L F，Quezada SA et al．Cutting edge:contact-mediated suppression by CD4+CD25+regulatory cells involves a granzyme B-dependent，perforin-independent mechanism［J］．J Immunol，2005;174(4):1783-1786．

30 Sarris M，Andersen K G，Randow F et al．Neuropilin-1 expression on regulatory T cells enhances their interactions with dendritic cells during antigen recognition［J］．Immunity，2008;28(3):402-413．

31 Hardenberg G，Steiner T S，Levings M K．Environmental influences on T regulatory cells in inflammatory bowel disease［J］．Semin Immunol，2011;23(2):130-138．

32 Yu Q T，Saruta M，Avanesyan A et al．Expression and functional characterization of FOXP3+CD4+regulatory T cells in ulcerative colitis［J］．Inflamm Bowel Dis，2007;13(2):191-199．

33 Kelsen J，Agnholt J，Hoffmann H J et al．FoxP3(+)CD4(+)CD25(+)T cells with regulatory properties can be cultured from colonic mucosa of patients with Crohn＇s disease［J］．Clin Exp Immunol，2005;141(3):549-557．

34 Weaver C T，Harrington L E，Mangan P R et al．Th17:an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell ties［J］．Immunity，2006;24(6):677-688．

35 Eastaff-Leung N，Mabarrack N，Barbour A et al．Foxp3+regulatory T cells，Th17 effector cells，and cytokine environment in inflammatory bowel disease［J］．J Clin Immunol，2010;30(1):80-89．

36 Cheng H H，Tseng G Y，Yang H B et al．Increased numbers of Foxp3-positive regulatory T cells in gastritis，peptic ulcer and gastric adenocarcinoma［J］．World J Gastroenterol，2012;18(1):34-43．

37 Chen Y L，F(xiàn)ang J H，Lai M D et al．Depletion of CD4(+)CD25(+)regulatory T cells can promote local immunity to suppress tumor growth in benzo［a］pyrene-induced forestomach carcinoma［J］．World J Gastroenterol，2008;14(38):5797-5809．

38 Szczepanik A M，Siedlar M，Sierzega M et al．T-regulatory lymphocytes in peripheral blood of gastric and colorectal cancer patients［J］．World J Gastroenterol，2011;17(3):343-348．

39 Yuan X L，Chen L，Zhang T T et al．Gastric cancer cells induce human CD4+Foxp3+regulatory T cells through the production of TGF-beta1［J］．World J Gastroenterol，2011;17(15):2019-2027．

40 Neurath M F，F(xiàn)inotto S．IL-6 signaling in autoimmunity，chronic inflammation and inflammation-associated cancer［J］． Cytokine Growth Factor Rev，2011;22(2):83-89．

41 Fantini M C，Becker C，Tubbe I et al．Transforming growth factor beta induced FoxP3+regulatory T cells suppress Th1 mediated experimental colitis［J］．Gut，2006;55(5):671-680．

42 Zou W．Regulatory T cells，tumour immunity and immunotherapy［J］．Nat Rev Immunol，2006;6(4):295-307．

43 Sharif-Paghaleh E，Sunassee K，Tavare R et al．In vivo SPECT reporter gene imaging of regulatory T cells［J］．PLoS One，2011;6(10):e25857．

44 Feng L L，Wang X．Targeting Foxp3+regulatory T cells-related immunosuppression for cancer immunotherapy［J］．Chin Med J(Engl)，2010;123(22):3334-3342．

45 Zhou R，Horai R，Silver P B et al．The living eye“disarms”uncommitted autoreactive T cells by converting them to Foxp3(+)regulatory cells following local antigen recognition［J］．J Immunol，2012;188(4):1742-1750．

46 Sakaguchi S，Miyara M，Costantino C M et al．FOXP3+regulatory T cells in the human immune system［J］．Nat Rev Immunol，2010;10(7):490-500．

47 von Herrath M，Sanda S，Herold K．Type 1 diabetes as a relapsingremitting disease?［J］． Nat Rev Immunol，2007;7(12):988-994．

48 Mottonen M，Heikkinen J，Mustonen L et al．CD4+CD25+T cells with the phenotypic and functional characteristics of regulatory T cells are enriched in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis［J］．Clin Exp Immunol，2005;140(2):360-367．

49 Jiang S，Tsang J，Tam P．Regulatory T cell immunotherapy for transplantation tolerance:step into clinic［J］．Int Immunopharmacol，2010;10(12):1486-1490．

50 Fan H，Cao P，Game D S et al．Regulatory T cell therapy for the induction of clinical organ transplantation tolerance［J］．Semin Immunol，2011;23(6):453-461．