淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的情況概述

李雨函，魏 強(qiáng)

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)中心，北京 100021)

隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和管理的不斷提高，最近幾年LCMV的感染率在各地區(qū)都明顯下降，北美地區(qū)小鼠 LCMV的感染率約為 0.1%，歐洲地區(qū)約為0.2%，日本在最近五年都沒(méi)有檢出 LCMV陽(yáng)性，韓國(guó)和臺(tái)灣的檢出率也非常低。我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)除豚鼠和地鼠外的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并沒(méi)有要求必須檢查L(zhǎng)CMV，但已有文獻(xiàn)報(bào)道從大鼠中檢出LCMV陽(yáng)性。我們將在本文中詳細(xì)介紹各地區(qū)LCMV的感染狀況。

LCMV在自然狀態(tài)下可感染嚙齒類(lèi)動(dòng)物其儲(chǔ)存宿主是小家鼠(Musmusculus)、家鼠(Mus domesticus)和倉(cāng)鼠(Syrian hamster)等嚙齒類(lèi)動(dòng)物，由于此類(lèi)嚙齒類(lèi)動(dòng)物遍布全球，廣泛分布在人類(lèi)的活動(dòng)區(qū)域，并且接觸患病動(dòng)物的排泄物和分泌物是主要的感染途徑，人被感染 LCMV的幾率也較大。此外，雖然還不知道猴、犬、貓是否為傳染源，但這些動(dòng)物均可自然感染LCMV。

1 嚙齒動(dòng)物感染LCMV后的主要癥狀

小鼠感染LCMV后的臨床癥狀受不同毒株、小鼠品系和小鼠感染時(shí)的日齡影響而有所變化，但感染LCMV的臨床癥狀可以分為兩大類(lèi)。一類(lèi)是持續(xù)耐受感染:主要經(jīng)胎盤(pán)感染或出生后一周內(nèi)感染引起。終生毒血癥并持續(xù)擴(kuò)散病毒。此途徑感染的小鼠出生前3周內(nèi)發(fā)生暫時(shí)性發(fā)育不良，感染鼠表現(xiàn)正常但生長(zhǎng)緩慢。感染后7～10個(gè)月發(fā)生免疫復(fù)合物腎小球腎炎并伴隨消瘦，被毛凌亂，弓背，腹水和死亡等癥狀［1，2］。第二類(lèi)是急性感染:此類(lèi)臨床反應(yīng)主要發(fā)生在出生一周之后被感染的小鼠，表現(xiàn)為病毒血癥。要么在數(shù)天內(nèi)死亡，要么在清除病毒后恢復(fù)。由于很少有關(guān)于LCMV在小鼠群內(nèi)自然感染和爆發(fā)的報(bào)道，此類(lèi)臨床癥狀數(shù)據(jù)主要來(lái)自實(shí)驗(yàn)室經(jīng)腦內(nèi)、皮下、腹腔或靜脈注射等非自然感染途徑獲得。但是，根據(jù)小鼠品系不同，成年鼠感染LCMV后的臨床癥狀有的表現(xiàn)為不發(fā)病，有的發(fā)病甚至死亡，然而無(wú)癥狀感染最為普遍［1，2］。

倉(cāng)鼠感染后通常為亞臨床癥狀。但研究曾報(bào)道倉(cāng)鼠感染后由于病毒血癥，常導(dǎo)致腎小球腎炎和產(chǎn)仔減少。其它先天感染LCMV的動(dòng)物也表現(xiàn)發(fā)育不全［2］。

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染LCMV的主要途徑:

傳統(tǒng)意義上講，動(dòng)物飼養(yǎng)室被LCMV污染的可能途徑有以下幾點(diǎn):第一，由野鼠污染引起［3］。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料充足，環(huán)境適宜，很容易吸引野鼠，進(jìn)而將 LCMV帶入。Dykewicz［3］的研究中指出，飼養(yǎng)在底層的小鼠比飼養(yǎng)在上層的小鼠血清檢測(cè)LCMV陽(yáng)性率更高，原因可能是野鼠的糞便和分泌物污染了動(dòng)物房的地板或低矮設(shè)施。第二，經(jīng)實(shí)驗(yàn)感染，如腫瘤移植手術(shù)［4］。這樣的污染原因是由細(xì)胞株或是實(shí)驗(yàn)器具被LCMV污染。第三，不同單位間大量的交流動(dòng)物或進(jìn)出動(dòng)物房人員太多而引起。第四，運(yùn)輸過(guò)程中感染。但隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施和運(yùn)輸方式的有效管理和提高，LCMV經(jīng)傳統(tǒng)途徑感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的幾率非常小，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染LCMV的途徑變得隱蔽。被污染的籠具、墊料、飼料和進(jìn)出人員很有可能是LCMV感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的主要原因。平時(shí)除了對(duì)動(dòng)物房的嚴(yán)格管理和常規(guī)檢測(cè)外，還要做好設(shè)施和其他物品的消毒工作，感染過(guò)LCMV的動(dòng)物房?jī)?nèi)用40%的福爾馬林噴灑在房間內(nèi)，噴灑量達(dá)到 35.7 mL/m3，空置 7 ～10 d 后再使用［2］。

3 LCMV感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后造成的影響:

LCMV感染小鼠導(dǎo)致荷爾蒙和細(xì)胞免疫水平降低，對(duì)同種異體移植腫瘤或皮膚等的排斥反應(yīng)延遲，并對(duì)鼠痘病毒、附紅細(xì)胞體病、細(xì)菌毒素和X射線(xiàn)的敏感度增加。LCMV可以自然感染胰島依賴(lài)型糖尿病大鼠幼崽，而且有可能因自生免疫被抑制而導(dǎo)致發(fā)病［2，5，6］。

4 人感染LCMV的途徑和臨床癥狀:

人感染LCMV的主要途徑是接觸帶毒動(dòng)物排泄物和分泌物;經(jīng)胎盤(pán)垂直感染;器官移植感染。其他途徑如蟲(chóng)媒和飛沫傳染還沒(méi)有被證實(shí)［1］。

有報(bào)道垂直感染LCMV導(dǎo)致嬰兒畸形或出生后死亡的案例［7，8］，雖然一直有母嬰垂直傳播 LCMV的報(bào)道，但通過(guò)此途徑傳播的更詳細(xì)的臨床癥狀和流行率直至現(xiàn)在還不完全清楚［8］。

成年人感染后，三分之一的患者沒(méi)有臨床癥狀。典型臨床癥狀出現(xiàn)在感染病毒后8～13 d，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、肌肉痛、嘔吐等類(lèi)似流感樣癥狀，偶有單側(cè)睪丸痛、妄言等癥狀。嚴(yán)重者表現(xiàn)為腦膜炎、聽(tīng)力下降。由于LCMV是自限性疾病，致死率很低，在感染1～3周后能恢復(fù)，患者通常預(yù)后良好［1，9］。

5 亞洲幾個(gè)地區(qū)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)CMV感染情況:

亞洲地區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)CMV的感染率一直在下降，近幾年都保持在較低水平。韓國(guó)在1999～2007年做了3次較大的調(diào)查，顯示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)CMV的感染率下降，屏障設(shè)施中飼養(yǎng)的小鼠沒(méi)有 LCMV陽(yáng)性。Won等［10］1999年 ～2003年間調(diào)查的大量樣本中，屏障設(shè)施飼養(yǎng)的小鼠沒(méi)有檢出 LCMV陽(yáng)性，但普通設(shè)施飼養(yǎng)的小鼠LCMV陽(yáng)性率高達(dá)15%。Seok等在2000～2003年和Na等在2006～2007年的調(diào)查顯示在普通設(shè)施和屏障設(shè)施飼養(yǎng)的小鼠都沒(méi)有檢測(cè)到 LCMV 陽(yáng)性［11，12］。Won和 Na等人的樣品數(shù)量和樣品來(lái)源的廣泛程度都比Seok等人的樣品更多、來(lái)源更廣［10，11］，可以為了解 LCMV 在韓國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的流行狀況提供參考。

臺(tái)灣和日本在最近幾年的調(diào)查也說(shuō)明LCMV在大小數(shù)中的感染率非常低。臺(tái)灣2004～2007年期間對(duì)臺(tái)灣10%的大、小鼠種群進(jìn)行檢測(cè)統(tǒng)計(jì)，僅在2007年提交的1123個(gè)小鼠樣本中檢出一只LCMV抗體陽(yáng)性，大鼠沒(méi)有檢出陽(yáng)性［13］。日本ICLAS monitoring center的檢測(cè)數(shù)據(jù)也顯示日本從2006～2011年間沒(méi)有檢測(cè)到 LCMV陽(yáng)性的種群［14］。

我國(guó)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中LCMV的流行率的報(bào)道有限，2009年佟巍等對(duì)2006～2008年間收集的大鼠血清用IFA方法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性樣本［15］。

6 歐洲部分地區(qū)和北美地區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)CMV感染情況

歐洲不同地區(qū)LCMV的感染情況不同，但根據(jù)近幾年的報(bào)道，LCMV的感染率并沒(méi)有超過(guò)0.3%。法國(guó)在1988～1997年間從84個(gè)單位收集的樣本檢測(cè)結(jié)果顯示在采集的小鼠血清樣本中有LCMV陽(yáng)性，種群陽(yáng)性率從1988～1990年間的7.1%逐漸減少至1995年的2.6%，但在接下來(lái)的兩年中，種群陽(yáng)性率又上升至4%［16］，但個(gè)體陽(yáng)性率在十年間一直維持在0.2% ～0.3%，這與 1981年 ～1984年法國(guó)的調(diào)查數(shù)據(jù)相似［16］。

荷蘭的一項(xiàng)調(diào)查對(duì)2000～2003年間從荷蘭、比利時(shí)、法國(guó)和其他一些歐洲國(guó)家來(lái)自大學(xué)、研究所、繁育公司等一百多個(gè)單位收集到的小鼠、豚鼠血清用ELISA方法檢測(cè)，結(jié)果與1981～1984年間做的調(diào)查以及1991～1994年間荷蘭做的調(diào)查相同，都沒(méi)有發(fā)現(xiàn) LCMV 感染的動(dòng)物［17］。

2009年 Charles River的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，截止2009年，北美地區(qū)五年中收集的和歐洲地區(qū)3年中收集的一共241453份小鼠血清樣品中，北美地區(qū)的LCMV陽(yáng)性率為 0.1%，歐洲地區(qū)的陽(yáng)性率為0.2%。在37709份大鼠血清樣品中，北美洲和歐洲的樣品均未檢出陽(yáng)性［18］。在法國(guó)，荷蘭的調(diào)查中所有的大鼠血清也都沒(méi)有檢出陽(yáng)性［16－18］。

除了大鼠、小鼠和豚鼠有 LCMV感染率的記錄，美國(guó)一家癌癥研究所1989年發(fā)生的LCMV感染事件就從該研究所飼養(yǎng)的裸鼠中檢測(cè)到LCMV陽(yáng)性，并且有實(shí)驗(yàn)人員在對(duì)裸鼠進(jìn)行腫瘤植手術(shù)時(shí)被感染［4］。

7 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施和管理的提高可能是保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物L(fēng)CMV感染率在這些年間持續(xù)降低的主要因素。雖然LCMV在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的陽(yáng)性率一直維持在較低水平，但鑒于LCMV的檢測(cè)方法主要是血清學(xué)檢測(cè)，可能存在漏檢，并且 LCMV的宿主范圍較廣、長(zhǎng)期存在于周?chē)h(huán)境中，我們依然有必要做好防范工作，保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染LCMV的幾率降至最低。除此之外，因?yàn)長(zhǎng)CMV可以感染多種動(dòng)物，建議除地鼠和豚鼠外的其他動(dòng)物也進(jìn)行LCMV檢測(cè)。

我國(guó)沒(méi)有要求對(duì)接觸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的工作人員進(jìn)行LCMV的檢測(cè)，但為保證人員安全，建議加強(qiáng)工作人員對(duì)LCMV的認(rèn)識(shí)和防護(hù)意識(shí)，減少感染幾率，尤其對(duì)LCMV可能高發(fā)的地區(qū)，建議定期進(jìn)行檢測(cè)、排除感染。

另一方面，現(xiàn)在對(duì)LCMV主要的檢測(cè)方法是血清學(xué)方法［19］，然而，在人類(lèi)器官移植感染 LCMV的案例中發(fā)現(xiàn)RT－PCR方法和免疫組化方法比血清學(xué)檢測(cè)更可靠［20－22］。建議在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物引種、交流的過(guò)程中使用RT－PCR方法和免疫組化方法檢測(cè)，以提高LCMV檢出率。

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