探討實時熒光PCR法檢測乙肝病毒DNA在臨床中的應(yīng)用

王金梅

（吉林省四平市傳染病醫(yī)院 檢驗科 ，吉林 四平 136000）

探討實時熒光PCR法檢測乙肝病毒DNA在臨床中的應(yīng)用

王金梅

（吉林省四平市傳染病醫(yī)院 檢驗科 ，吉林 四平 136000）

目的 分析并探討實時熒光PCR法檢測乙肝病毒DNA在臨床中的應(yīng)用。方法 首先要對患者采用血清學(xué)標志物這種方法檢測，進一步確定他是乙型肝炎的患者。再次就是選擇500例患者進行檢測，這樣有利于保證實驗的準確性。結(jié)果 實時熒光PCR方法檢測的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)與采用血清學(xué)標志物方法檢測的乙肝病毒數(shù)據(jù)大致一致，但是采用熒光PCR方法檢測的病毒DNA數(shù)據(jù)更準確，更詳細。大三陽、小三陽患者血清中PCR的結(jié)果拷貝數(shù)均較高，而HbsAb（+）或HbsAg（-）的標本PCR有個別陽性結(jié)果[2]。結(jié)論 實時熒光PCR法可以準確檢測出乙肝病毒和其詳細數(shù)據(jù)，這說明實時熒光PCR法檢測乙肝病毒DNA具有良好的臨床意義，值得臨床使用。

乙肝病毒；血清學(xué)；拷貝數(shù)目

以前要想檢測患者是否是乙性肝炎病毒攜帶者，大部分都是采用血清學(xué)標志法，要采集患者的血液進行檢驗，如果操作適當不當，還容易造成工作人員也感染乙肝病毒。所以各個國家的醫(yī)學(xué)專家積極尋找其他可以檢測乙型肝炎病毒DNA的方法，最終發(fā)現(xiàn)熒光PCR方法可以得到準確的乙型肝炎病毒DNA的數(shù)據(jù)，此文章就是在探討和分析實時熒光PCR法檢測乙肝病毒DNA在臨床中的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

首先選擇可能攜帶乙型肝炎的患者，這些患者最好是年齡跨度較大，在15～70歲的年齡段中都有患者存在，這樣更有利于實驗的準確性，防止出現(xiàn)偏差。然后采用血清學(xué)標志法進一步確定他們是乙肝患者，這樣可以使實驗結(jié)果的偏差較小。最重要的是要記錄好乙型肝炎患者中乙肝病毒DNA的數(shù)據(jù)，并且要注意保存仔細。然后將這500位乙肝病毒攜帶者和患者，再用熒光PCR的方法對其進行檢測，然后仔細記錄這些數(shù)據(jù)。最后把用血清學(xué)標志法檢驗的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)與用熒光PCR方法檢驗的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)做比較，然后把比較的數(shù)據(jù)進行分析，并用論文的形式呈現(xiàn)出來。

1.2 方法

將用血清學(xué)標志法檢驗的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)作為對照組，然后把用熒光PCR的方法檢驗的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)作為觀察組。然后把觀察組與對照組的數(shù)據(jù)做比較，發(fā)現(xiàn)觀察組即用熒光PCR的方法檢驗乙肝病毒DNA的數(shù)據(jù)與對照組里的數(shù)據(jù)差別不大，而且從觀察組數(shù)據(jù)里發(fā)現(xiàn)，用熒光PCR方法檢驗的數(shù)據(jù)中PCR拷貝數(shù)較高的是大三陽者和小三陽者，而HbsAg（-）和HbsAb（+）的PCR中有陽性的因素，拷貝數(shù)較低。

1.3 療效標準

顯效：觀察組即用熒光PCR方法檢測乙肝病毒的數(shù)據(jù)與對照組即用最普通的檢驗方法血清學(xué)標志法檢驗的乙肝病毒數(shù)據(jù)作比較，發(fā)現(xiàn)差別不大，而且用熒光PCR方法檢測的乙肝病毒數(shù)據(jù)更加準確，PCR拷貝數(shù)較高的是大三陽者和小三陽者。效果不明顯：觀察組即用熒光PCR方法檢測乙肝病毒的數(shù)據(jù)與對照組即用最普通的檢驗方法血清學(xué)標志法檢驗的乙肝病毒數(shù)據(jù)做比較，發(fā)現(xiàn)差別效果較小，而且熒光PCR方法在準確度上還有其他數(shù)據(jù)中也沒有突出的表現(xiàn)。無效：觀察組即用熒光PCR方法檢測乙肝病毒的數(shù)據(jù)與對照組即用最普通的檢驗方法血清學(xué)標志法檢驗的乙肝病毒數(shù)據(jù)做比較，發(fā)現(xiàn)觀察組的數(shù)據(jù)與對照組的數(shù)據(jù)差別較大，且對照組的數(shù)據(jù)不及觀察組的數(shù)據(jù)準確。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用spss10.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所得數(shù)據(jù)進行t檢驗，對于用熒光PCR方法檢測的乙肝病毒的DNA數(shù)據(jù)與用血清學(xué)標志法檢測出的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，如果差異較大，即P＜0.05.則有統(tǒng)計學(xué)意義。如果兩者的數(shù)據(jù)差異較小，即P＞0.05，則沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

通過實驗，發(fā)現(xiàn)實時熒光PCR方法檢驗乙肝病毒的DNA數(shù)據(jù)很準確，有良好的臨床意義。且療效標準是顯效，即用熒光PCR 方法檢測的乙肝病毒DNA數(shù)據(jù)與用普通方法血清學(xué)標志法提供的乙型肝炎病毒DNA數(shù)據(jù)相似，且在用熒光PCR方法檢測的數(shù)據(jù)更加準確。比如數(shù)據(jù)顯示，HbsAg（+）、HbcAb（+）即大三陽中的陽性率達到了97%，HbsAg（+）、HbeAb（+）、HbcAb（+）即小三陽的陽性率則是70%，而HbsAg（-）、HbsAb（-）、HbeAg（-）、HbeAb（-）、HbcAb（-）的陽性率則是2.2%。這充分證明了實時熒光PCR方法檢驗肝病毒的DNA具有良好的臨床效果，值得臨床應(yīng)用。

3 討 論

乙肝是乙型病毒性肝炎的簡稱[1]，它屬于內(nèi)科中的消化內(nèi)科，發(fā)病的部位主要是人們的肝臟，是人們至今都非常擔心的一種病癥[2]。因為乙肝是一種具有嚴重傳染性的疾病，他的傳染途徑主要有血液傳播，所以要杜絕接觸到乙肝患者的血液；母嬰傳播，所以國家規(guī)定乙肝患者不能進行生育，以防下一代也成為乙肝患者；性傳播、皮膚黏膜破損傳播都是乙肝傳染的主要途徑。乙肝根據(jù)病程的長短也分為急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎，從字面意思來了解，急性乙型肝炎比慢性乙型肝炎更可怕，甚至會危及到人的性命。乙型病毒性肝炎根據(jù)病情的輕重也可以分成乙肝攜帶者、重型肝炎患者、活動性乙型肝炎患者、肝炎肝硬化患者等。

這個實驗充分證明了實時熒光PCR方法檢測乙肝病毒DNA在臨床中有重要的意義，相比運用血清學(xué)標志法來說[3]，測出的數(shù)據(jù)更加準確，內(nèi)容更加全面，從而為研究乙型病毒型肝炎的其他方面做了充分的準備。所以，實時熒光PCR方法可以進行臨床應(yīng)用。

[1] 黃惠宜.250例慢性乙型肝炎患者的HBVDNA、HBsAg、HBeAg與HBVpreS1-Ag臨床關(guān)系的探討[A].第十三次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C].2004.

[2] 郭亞光,樓大勇.乙肝前S1抗原與HBV-DNA、HBe Ag(HBeAb)相關(guān)性的研究[J].安徽醫(yī)藥,2007,11(5):444.

[3] 丁遠杰.實時熒光PCR檢測轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的研究[D].長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2004.

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1671-8194（2013）25-0173-01