脫氫紫堇堿的研究概況*

李 杏 蔣旭宏 黃小民△

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，浙江 杭州 310006；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州 310006）

脫氫紫堇堿（DHC）又名去氫延胡索甲素，是從罌粟科紫堇屬植物延胡索塊莖中提取的一種季胺類生物堿。延胡索味苦、辛，性溫，歸心、肝、脾經(jīng)，主要功效為活血、行氣、止痛，臨床多用于氣血瘀滯痛證。延胡索中被鑒定的生物堿已達(dá)20多種，DHC為其活性成分之一，臨床證實(shí)對(duì)胃潰瘍、冠心病、急性心肌梗死［1-2］均有較好療效，但在其他方面研究甚少，現(xiàn)就其近年實(shí)驗(yàn)及臨床研究介紹如下。

1 藥理作用

1.1 心血管系統(tǒng)保護(hù)作用

1.1.1 抗缺氧及缺氧復(fù)氧后損傷 李澎等采用體外培養(yǎng)SD乳鼠心肌細(xì)胞，復(fù)制心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低質(zhì)量濃度DHC抗缺氧作用明顯，質(zhì)量濃度超過(guò)6.3 mg/L則降低心肌細(xì)胞活力，12.5～50 mg/L時(shí)作用顯著。在缺氧復(fù)氧模型中，DHC質(zhì)量濃度依賴性地抑制缺氧復(fù)氧后心肌細(xì)胞內(nèi)LDH的漏出，在5、2.5、1.25 mg/L質(zhì)量濃度時(shí)作用顯著，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DHC是一種高效低毒單體，可安全應(yīng)用于臨床［3］。孟紅旭研究結(jié)果顯示DHC能濃度依賴性抑制L型鈣通道的開(kāi)放，濃度為 100 μmol/L 時(shí)抑制率為（28.6±8.5）%［4］。心肌細(xì)胞鈣通道有T、L兩型，而L型通道是主要調(diào)控心肌細(xì)胞Ca2+內(nèi)流的調(diào)控因子［5］，該實(shí)驗(yàn)提示DHC可能是通過(guò)抑制L型鈣通道的開(kāi)放，減少鈣超載，達(dá)到減少心肌缺氧復(fù)氧損傷的作用。

1.1.2 保護(hù)心肌 近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Ca2+與心肌細(xì)胞低氧損傷密切相關(guān)，應(yīng)用鈣通道阻滯劑可顯著減輕心肌細(xì)胞的損傷，說(shuō)明心肌細(xì)胞

內(nèi)鈣超載在心肌細(xì)胞低氧損傷中起著重要的作用。趙昕運(yùn)用離體豚鼠心肌Langendorff法灌注，熒光指示劑Fure-2技術(shù)監(jiān)測(cè)心肌細(xì)胞Ca2+濃度，證實(shí)DHC不僅降低正常狀態(tài)下心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，并且顯著減緩缺氧400～500 s時(shí)心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+的增加［6］。實(shí)驗(yàn)中與經(jīng)典的鈣通道阻斷劑維拉帕米相比較，DHC效果略差，但安全性好作用緩和持久。趙昕等進(jìn)一步從分子水平研究DHC保護(hù)心肌細(xì)胞的分子機(jī)制，實(shí)驗(yàn)觀察到DHC降低正常狀態(tài)及缺氧時(shí)ryanodine受體的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)，增加正常狀態(tài)及缺氧時(shí)集鈣蛋白（CASQ）的轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)［7］。RYR2是位于心肌肌漿網(wǎng)上的一種鈣釋放通道，是引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放從而引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增高的主要機(jī)制。CASQ則是一種對(duì)Ca2+高容量、低親和力的貯存蛋白，貯存能力強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DHC通過(guò)上述分子機(jī)制，從減少心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放及增加胞漿內(nèi)游離Ca2+的再攝取兩方面，降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，從而保護(hù)心肌細(xì)胞，提高抗缺血缺氧能力。

1.1.3 擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈 現(xiàn)代藥理研究表明DHC可顯著擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量，從而改善心肌缺血缺氧狀態(tài)。中藥制劑可達(dá)靈片主要藥理成分是DHC和延胡索乙素，臨床常用于治療冠心病、心絞痛及急性心肌梗死。王五保等應(yīng)用可達(dá)靈片治療不穩(wěn)定型心絞痛患者42例，臨床發(fā)現(xiàn)DHC具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流量，減少心肌耗氧量的作用，是從機(jī)制上消除心絞痛的病因，副作用少，安全性高［8］。

1.1.4 抑制血小板聚集作用 基礎(chǔ)研究表明cAMP是一種血小板聚集抑制劑，郭繼東等分別采用0.45、0.9 g/L的DHC體外給藥，觀察對(duì)家兔血小板cAMP的影響，發(fā)現(xiàn)低劑量組無(wú)效，而高劑量組顯著增加血小板cAMP的濃度，認(rèn)為這可能是DHC抑制血小板聚集的機(jī)制之一［9］。丁順等進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)DHC不僅增加體外兔血小板cAMP含量，還可降低兔血小板cGMP含量，效應(yīng)具有劑量依賴性［10］。基礎(chǔ)研究表明cGMP增加血小板聚集，和cAMP一起是調(diào)節(jié)機(jī)體多種功能的共同體。故作者認(rèn)為DHC可能是通過(guò)提高血小板內(nèi)cAMP的含量、降低cGMP含量抑制血小板聚集。

1.2 抗炎作用 炎癥反應(yīng)中活化的巨噬細(xì)胞能誘導(dǎo)IL-1、IL-6等促炎癥因子的產(chǎn)生，Ishiguro K等研究發(fā)現(xiàn)DHC能有效地減少由脂多糖誘導(dǎo)產(chǎn)生的原始巨噬細(xì)胞及巨噬細(xì)胞趨化因子RAW264.7細(xì)胞，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞ATP酶的消耗，并且抑制線粒體細(xì)胞膜電位的抬高及IL-1、IL-6的產(chǎn)生。但對(duì)非脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞及膜電位無(wú)影響。作者認(rèn)為DHC可能是通過(guò)抑制線粒體膜電位的抬高這一特殊機(jī)制來(lái)抑制脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞及促炎癥因子的產(chǎn)生［11］。Kubo M等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)DHC能抑制醋酸所致小鼠血管通透性增加，減輕大鼠急性足腫脹，提示DHC對(duì)急慢性炎癥均有較好的治療作用［12］。

1.3 抗過(guò)敏作用 Matsuda H建立Ⅰ-Ⅳ型超敏反應(yīng)大鼠模型，以0.5 mmol/kg DHC口服給藥可以48 h抑制皮膚被動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)，對(duì)抗原誘導(dǎo)的組胺釋放有明顯抑制作用，顯著抑制Ⅰ型超敏反應(yīng)；在Ⅳ型超敏反應(yīng)模型中，DHC有效抑制硝基氯苯接觸性皮炎的初始階段和效應(yīng)階段。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DHC對(duì)Ⅱ型超敏反應(yīng)無(wú)作用，較弱抑制Ⅲ型超敏反應(yīng)［13］。

1.4 抗腫瘤作用 研究人員發(fā)現(xiàn)自然植物提供了最有價(jià)值的復(fù)合物作為抗腫瘤的特異活性物，其機(jī)制可能是通過(guò)通路或者結(jié)構(gòu)修飾來(lái)進(jìn)行腫瘤治療［14］。Cui X等運(yùn)用電噴霧電離質(zhì)譜技術(shù)，發(fā)現(xiàn)DHC能與原癌基因c-myb的啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)區(qū)的G四鏈體（G-quadruplex）高度結(jié)合增加G-quadruplex結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，競(jìng)爭(zhēng)性超過(guò)（4-N-甲基吡啶基）卟啉。G-quadruplex結(jié)構(gòu)能阻止端粒延長(zhǎng)替代機(jī)制，從而達(dá)到抗癌作用［15］。Zengtao Xu研究發(fā)現(xiàn)DHC具有抗腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的凋亡。實(shí)驗(yàn)中DHC呈劑量依賴性的抑制MCF-7細(xì)胞增殖，提示DHC有一定的細(xì)胞毒性，使用200 μmol/L的DHC處理MCF-7細(xì)胞24 h，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞活力下降40%，確定DHC具有中等細(xì)胞毒性，進(jìn)一步應(yīng)用增強(qiáng)細(xì)胞核染色技術(shù)證明該凋亡是由DHC導(dǎo)致的。實(shí)驗(yàn)深入研究發(fā)現(xiàn)DHC減少Bcl-2蛋白的表達(dá)而增加Bax蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)Caspase-7、Caspase-8的活化而不影響Caspase-9，并且誘導(dǎo)DNA修復(fù)酶PARP的裂解，表明DHC可能通過(guò)上述機(jī)制抑制MCF-7細(xì)胞增殖［16］。

1.5 其他作用 近年有研究發(fā)現(xiàn)DHC是一種有效的乙酰膽堿酯酶抑制劑，其半數(shù)抑制濃度為 0.62 μmol/L［17］。Satou研究表明DHC能有效抑制犬弓首線蟲(chóng)第2期幼蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)，是一潛在的待開(kāi)發(fā)驅(qū)蟲(chóng)藥［18］。付彥君等實(shí)驗(yàn)研究DHC非競(jìng)爭(zhēng)性地抑制去甲腎上腺素、KCl及CaCl2誘導(dǎo)的大鼠離體胸主動(dòng)脈平滑肌收縮，且DHC的松弛作用與血管內(nèi)皮無(wú)關(guān)，其作用與經(jīng)典鈣拮抗劑維拉帕米相似［19］。臨床中黃麗萍應(yīng)用可達(dá)靈片聯(lián)合硝苯地平治療肢端動(dòng)脈痙攣病，臨床觀察發(fā)現(xiàn)其主要成分DHC選擇性擴(kuò)張血管，改善循環(huán)，緩解血管痙攣，對(duì)指端血管痙攣病有良好的治療效果，且無(wú)不良反應(yīng)、毒副作用，安全有效［20］。胡云峰在觀察可達(dá)靈片治療緊張型頭痛的臨床療效時(shí)亦發(fā)現(xiàn)，以DHC為代表的延胡索季胺堿選擇性地?cái)U(kuò)張腦血管，改善腦血液循環(huán)，緩解腦血管痙攣［21］。

2 藥代動(dòng)力學(xué)

林力等［22］采用 LC-MS／MS 法測(cè)定大鼠口服延胡索提取物后脫氫紫堇堿的藥代動(dòng)力學(xué)，實(shí)驗(yàn)按延胡索總生物堿125、250、500 mg/kg灌胃給藥，DHC由于中、低劑量組所能定量的數(shù)據(jù)點(diǎn)太少而無(wú)法繪制C-T曲線，因此只得到高劑量組的藥動(dòng)學(xué)曲線，藥代參數(shù)顯示在體內(nèi)達(dá)峰較快，體內(nèi)表觀分布容積較大，但AUC值和Cmax值較低［22］。國(guó)外學(xué)者應(yīng)用14C同位素標(biāo)記法對(duì)DHC的體內(nèi)吸收代謝進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)中分別以小鼠、大鼠50 mg/kg口服或者6.8 mg/kg靜脈注射，檢測(cè)小鼠中血液質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL，大鼠中為0.06 μg/mL，放射自顯影顯示DHC主要分布消化道、肝臟和腎臟，大部分藥物通過(guò)糞便排泄，很少通過(guò)尿液和膽汁排泄，提示其具有顯著的肝臟首過(guò)消除。Zhiying Dong等研究醋炙和酒炙延胡索中延胡索乙素、DHC及原阿片堿在大鼠組織中的分布情況，結(jié)果表明在延胡索中DHC的Cmax及AUC0-24值與炮炙方法無(wú)關(guān)，在酒炙、醋炙及未炮炙中均無(wú)顯著差異，實(shí)驗(yàn)測(cè)定DHC在肝臟中峰值濃度最高，其次為心、肺、脾、腎和大腦，其中腦干及大腦中Cmax大于其他腦組織。醋炙及酒炙顯著推遲DHC在心臟、腎臟、大腦、腦干及紋狀體中的達(dá)峰時(shí)間，醋炙延胡索顯著延長(zhǎng)DHC在肝臟和腦干的平均駐留時(shí)間，縮短腎臟、肺、大腦及間腦中的時(shí)間；與醋炙相比較，酒炙則顯著延長(zhǎng)DHC在腦干中的平均駐留時(shí)間，縮短在腎臟和紋狀體中的時(shí)間［23］。

3 毒副作用

DHC灌胃、腹腔靜注給藥，小白鼠LD50分別為（21.1±1.4）、（8.8±0.4）mg/kg； 大鼠予 DHC 5、10、15 mg/kg 腹腔注射連續(xù)20d；予DHC15、30、50mg/kg灌胃給藥連續(xù)30d；血常規(guī)、肝腎功能和重要臟器未見(jiàn)異常改變［24］。中藥延胡索及其生物堿不同劑型臨床應(yīng)用中，一般劑量也未發(fā)現(xiàn)顯著毒副反應(yīng)，延胡索粉末較大劑量（10～15 g）服用時(shí)，部分患者有嗜睡、頭暈、腹脹癥狀，長(zhǎng)期服用個(gè)別患者出現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高，部分有藥物熱發(fā)生。

4 結(jié) 語(yǔ)

延胡索具有活血利氣之功，臨床應(yīng)用廣泛，脫氫紫堇堿為其主要生物堿之一，近代臨床多用于心腦血管疾病的治療。藥理研究表明，DHC有明顯的抗心肌缺氧缺血作用，減少心肌細(xì)胞鈣超載，有效擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，抑制血小板聚集，改善循環(huán)、降低耗氧量，對(duì)心腦血管系統(tǒng)具有很好的保護(hù)作用，隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)其還有抗過(guò)敏、抗炎及抗腫瘤、驅(qū)蟲(chóng)等作用，為DHC更好地全面開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。現(xiàn)代藥代動(dòng)力學(xué)表明雖然DHC在體內(nèi)Cmax值較低，但心臟的Cmax值高于其他組織，首過(guò)消除是在肝臟中。中醫(yī)傳統(tǒng)理論認(rèn)為酒炙后可增強(qiáng)其行血祛瘀之力，并借酒之辛散通達(dá)全身。但實(shí)驗(yàn)表明無(wú)論酒炙還是醋炙延胡索中DHC在組織中的Tmax值均比未炮炙高，而Cmax無(wú)明顯差異。提示DHC在臨床應(yīng)用時(shí)藥物的炮制是無(wú)益的，不必拘泥于傳統(tǒng)中藥的炮制理論，應(yīng)運(yùn)用現(xiàn)代藥學(xué)知識(shí)及技術(shù)設(shè)備，深入研究藥理及作用機(jī)制、劑型選擇、生產(chǎn)工藝和給藥方法，開(kāi)發(fā)安全有效的新產(chǎn)品，推動(dòng)DHC的臨床應(yīng)用。

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