蜂膠的提取技術(shù)及藥理作用研究進(jìn)展

劉楠楠 于 丹 王延卓

（1吉林省養(yǎng)蜂科學(xué)研究所，吉林 132108；2長(zhǎng)春市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，長(zhǎng)春 130061；3烏蘭察布職業(yè)學(xué)院生物技術(shù)系，烏蘭察布 012000）

蜂膠（propolis）又名蜂巢蠟?zāi)z，是蜜蜂從各種植物（楊樹、樺樹、柳樹、櫟樹、馬栗及針葉樹等）的嫩芽中采集的樹脂,混有蜜蜂上腭腺分泌的和蜂蠟形成的一種固體膠狀物。蜜蜂用它來(lái)加固巢脾，填補(bǔ)蜂巢縫隙與孔洞，粘連巢框，涂擦巢房壁，密封已被蜇死而不能清除出巢外的敵害，防止其腐爛，并摻和在蜂蠟中作封蓋子脾及封蓋成熟蜜脾用[1]。蜂膠為不透明、不規(guī)則的固體,其外觀顏色有較大差異，從黃綠到深棕及黑褐色不等，一般以色深為質(zhì)佳，主要取決于樹脂的來(lái)源、采集時(shí)間及保存年份。其特點(diǎn)是在低溫時(shí)變硬變脆，隨溫度的升高逐漸變軟，且具有粘性。常溫時(shí)散發(fā)出植物的芳香氣味，燃燒時(shí)由于樹脂和揮發(fā)性成分的存在而發(fā)出蜂膠的特殊香氣。

蜂膠是一味動(dòng)、植物雙性的蜂產(chǎn)品，芳香、味甘、性平,已載于《本草綱目》（第九卷），具有抗菌、抗病毒、抗原生物、消炎、抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤以及免疫增強(qiáng)等多種生物學(xué)活性功能。作為一種新興的保健品，蜂膠已是國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)，尤其是黃酮類化合物被認(rèn)為是產(chǎn)生蜂膠藥效的活性成分，目前已從世界各地蜂膠樣品分離的黃酮化合物就達(dá)44種之多，其品種和含量之豐富非植物藥所能比擬。蜂膠也是自然界中總酚含量最多的天然產(chǎn)物之一，也是蜂膠的主要成分，發(fā)揮著重要的生理功效[2]，其含量高出蔬菜、水果、藥材的幾萬(wàn)倍至幾百萬(wàn)倍。因此，蜂膠被譽(yù)為“紫色黃金”、“藥材隊(duì)伍的新兵”、“珍貴的動(dòng)物性醫(yī)療保健藥材”、“黃酮化合物的寶庫(kù)”等，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品及化妝品加工等多種領(lǐng)域中都備受青睞。本文就近年來(lái)對(duì)蜂膠的有效成分、提取技術(shù)及藥理作用等研究概況作一簡(jiǎn)要綜述。

1 蜂膠的有效成分

蜂膠的成分相當(dāng)復(fù)雜，對(duì)蜂膠化學(xué)成分的研究本世紀(jì)初始于德國(guó)，Kustenmacher在1910年從蜂膠中鑒定出肉桂醇和肉桂酸，Dietrich于次年從蜂膠中鑒定出香草醛[3]。但之后由于受技術(shù)等條件的限制，在相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)，對(duì)蜂膠成分的研究處于停滯狀態(tài)，無(wú)法深入開(kāi)展。隨著各種色譜技術(shù)的發(fā)展和質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)，為蜂膠的化學(xué)成分研究提供了有力工具，在各國(guó)學(xué)者的共同努力下，目前為止，已從蜂膠中分離鑒定出數(shù)百種天然成分。其中，類黃酮化合物71種，芳香酸與芳香酸酯類化合物59種，酚類、醇類和其他化合物24種，醛與酮類化合物17種，氨基酸25種，脂肪酸與脂肪酸酯50種，萜類化合物19種，甾類化合物6種，碳水化合物9種，烴類化合物25種[4]，醛與酮類化合物17個(gè)，醇、酚類和其他化合物24個(gè)[3]。

蜂膠具有廣泛的生物學(xué)活性，有研究表明，蜂膠原塊中含有50%的樹脂、膠狀物質(zhì)，30%左右蜂蠟，10%左右揮發(fā)油，5%花粉，5%其他成分（包括有機(jī)酸、脂肪酸、氨基酸、礦物元素、維生素、植物殺菌素和酶等）。這些物質(zhì)的含量及相互之間比例與采集地植物的特異性及當(dāng)?shù)氐牡乩憝h(huán)境密切相關(guān)，依蜂膠的采集地、采集時(shí)間不同而異，具有指紋特征。產(chǎn)自歐洲、北美洲、南美洲、亞洲和非洲的蜂膠，其化學(xué)成分都不相同，但在北溫帶地區(qū)蜂膠的化學(xué)成分相差不大[5]。

2 蜂膠的提取技術(shù)

由于蜂膠的化學(xué)成分十分復(fù)雜，受收取條件和環(huán)境的影響，粗膠含有蜂蠟等較多雜質(zhì)，所以必須進(jìn)行提純，目前蜂膠主要通過(guò)乙醇進(jìn)行提取，甲醇、乙醚、丙酮、正己烷、氯仿、水等也可作為提取溶劑使用。濃度70%和80%的乙醇是最常用的提取溶劑，它可以很容易使蜂膠脫蠟并且可以保護(hù)一些多酚類物質(zhì)，溶解于酒精的這部分物質(zhì)被稱為“蜂膠香脂類”。水醇溶液的提取可以使蜂蠟更快的游離出來(lái)，同時(shí)提取液中還富含大量的多酚類物質(zhì)，用60%的乙醇提取出的最多黃酮類物質(zhì)是異櫻花素、槲皮素和莰非醇，70%的乙醇可以提取出最多的喬松素和櫻花素，用純水可以提取出一些易溶于水的多酚類物質(zhì)。

2.1 索氏提取法

索氏提取法是利用索氏提取器加有機(jī)溶劑的方法進(jìn)行提取。此法較簡(jiǎn)單，并且溫度不高，某些揮發(fā)和失活的有效黃酮類不易失去，但是一般耗時(shí)數(shù)小時(shí)或十幾小時(shí)，提取效率低。

2.2 水蒸氣蒸餾提取

水蒸氣蒸餾提取法是揮發(fā)油成分提取的經(jīng)典方法，根據(jù)蜂膠產(chǎn)地的不同及蒸餾時(shí)間等工藝參數(shù)的不同，蜂膠揮發(fā)性成分的得率也不同。它具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作容易且成本低廉等特點(diǎn)。

2.3 超聲波提取法

超聲波能有效破碎細(xì)胞壁或者包埋結(jié)構(gòu)的外層，改變物質(zhì)擴(kuò)散，釋放內(nèi)容物，從而提高提取率。通過(guò)超聲波的發(fā)射、振動(dòng)使蜂膠的有效成分溶解在溶劑中，從而達(dá)到分離提純的目的。此法一般耗時(shí)十幾分鐘至一小時(shí)，具有省時(shí)、節(jié)能、提取率高等特點(diǎn)，推廣應(yīng)用價(jià)值非常高。目前，超聲波技術(shù)已在中藥有效成分和功能因子提取中被廣泛應(yīng)用，呈現(xiàn)出良好的發(fā)展?jié)摿6]。但現(xiàn)階段研究還僅限于單頻超聲技術(shù)，復(fù)頻或雙頻超聲提取的研究還處于初始階段。

2.4 超臨界CO2流體萃取法

超臨界流體萃取是近幾十年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，是指在臨界溫度和臨界壓力以上，以流體形式存在的物質(zhì)，這種流體同時(shí)具有液體的高密度和氣體的低粘度雙重特性。利用超臨界流體的這種特殊性能，在超臨界狀態(tài)下，采用CO2作溶劑，乙醇作夾帶劑進(jìn)行萃取，強(qiáng)極性的鉛等重金屬、農(nóng)殘被排除在外。此法具有提取純度高，工藝流程簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、效率高等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)技術(shù)工藝的要求較高，設(shè)備投資大，能耗大。

2.5 超臨界萃取復(fù)合微波輔助萃取法

微波萃取實(shí)際上是微波對(duì)萃取溶劑和物料的加熱過(guò)程。微波能直接穿透溶劑和物料內(nèi)部，加速分子運(yùn)動(dòng)，使物料充分并快速溶解于溶劑從而達(dá)到萃取目的。超臨界萃取復(fù)合微波輔助萃取法是把兩者結(jié)合起來(lái)，發(fā)揮各自優(yōu)勢(shì)，通過(guò)不同萃取技術(shù)分階段的把蜂膠中的活性物質(zhì)多糖、萜烯類、黃酮類物質(zhì)、多環(huán)脂類逐漸提取出來(lái)，使得萃取更徹底，萃取效率更高，萃取產(chǎn)物多，可以制作不同的保健產(chǎn)品或天然藥物，從而實(shí)現(xiàn)有效成分的充分利用。其缺點(diǎn)是，由于它是兩種工藝的結(jié)合，工藝流程相對(duì)復(fù)雜，設(shè)備昂貴，能耗極大[7]。

2.6 其他方法

日本采用硼高分子電解質(zhì)法提取蜂膠。將硼的電解物的稀釋精制水溶液與含有蜂膠的纖維素充分混溶，高分子電解物的稀釋精制水溶液可不分解蜂膠，然后加入乙醇和以海藻為原料的纖維素，從而可提取出含有效成分的親水性凝膠體，經(jīng)提煉后結(jié)晶具有很強(qiáng)的除菌力，用這種方法得到的提取物具有很好的活性[7]。

3 蜂膠的藥理作用

蜂膠的藥理作用很多，主要是對(duì)人體免疫功能的影響。由于蜂膠中含有大量的類黃酮、芳香酸及酯、有機(jī)酸、萜烯類、醇類、酶類等物質(zhì)，具有抗細(xì)菌、抗氧化、消炎、抗病毒、護(hù)肝、抗腫瘤等多種藥理學(xué)活性，臨床研究證明，這些物質(zhì)還可抑制胸腺嘧啶、尿嘧啶和亮氨酸的結(jié)合，影響DNA合成，從而抑制癌細(xì)胞的新陳代謝。

3.1 抗菌作用

蜂膠的抗菌作用是各種有機(jī)成分間相互協(xié)調(diào)和巧妙組合的結(jié)果。古希臘藥典中記載，3000年前古埃及制作木乃伊?xí)r就用蜂膠做防腐劑，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，蜂膠是一種天然的光譜抗菌素。蜂膠中含有的酮類和酚物質(zhì)能夠損傷細(xì)胞的質(zhì)膜和細(xì)胞壁，抑制特異性酶系統(tǒng)，阻礙細(xì)胞正常代謝；醛類能與蛋白質(zhì)中的氨基酸結(jié)合而變性，從而破壞菌體的細(xì)胞質(zhì)。實(shí)驗(yàn)研究表明，蜂膠提取液的濃度越高，其抑菌率越高[8],尤其對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和耐酸細(xì)菌作用敏感，對(duì)金黃色葡萄球菌、綠色鏈球菌、溶血性鏈球菌、變形桿菌等作用強(qiáng)于青霉素和四環(huán)素[9]。Ghisalberti等在1979年至1984年先后報(bào)道蜂膠在試管內(nèi)對(duì)多種細(xì)菌抗菌作用研究，實(shí)驗(yàn)表明，蜂膠對(duì)霉菌有直接抑制作用，且能抑制它們對(duì)細(xì)胞的粘附。

此外，蜂膠在皮膚科的應(yīng)用較廣，可用于毛囊炎、神經(jīng)性皮炎、癤、濕疹、銀屑病等皮膚病，還可用于帶狀皰疹、扁平疣等病毒性疾病。蜂膠油膏或滴劑能治療中耳炎、鼻炎、咽炎、扁桃體炎及口腔糜爛和十二指腸潰瘍等。

3.2 抗病毒作用

蜂膠對(duì)許多病毒具有抗毒性，對(duì)A型流感病毒、骨髓灰質(zhì)炎病毒、單純皰疹病毒、腺病毒、日本凝血病毒、假狂犬病毒、皰疹性口腔病毒及乙肝病毒有明顯的抑制作用。蜂膠對(duì)一些植物病毒也有抑制作用，Bojnansky[11]實(shí)驗(yàn)證明，其對(duì)黃瓜葉病病毒、煙草斑點(diǎn)病病毒及馬鈴薯的S病毒、Y病毒和M病毒等都有作用。

3.3 抗原蟲作用[9]

蜂膠具有抗原蟲作用，尤其對(duì)鞭毛綱、孢子綱和纖維綱原蟲作用顯著，用以治療陰道毛滴蟲、宮頸內(nèi)膜炎、陰道炎及婦科手術(shù)后陰道創(chuàng)傷面的愈合。

3.4 抗氧化作用

3.4.1 食品保鮮用抗氧化劑

國(guó)內(nèi)外研究表明，蜂膠有抑制油脂氧化的作用，蜂膠作為天然的抗氧化劑，早已成功地應(yīng)用在肉類、水產(chǎn)品和果蔬的保鮮，而且抗氧化效率并不低于常用的合成抗氧化劑。蜂膠已經(jīng)成為被人們看好的一種天然抗氧化劑，它在0.01～0.05%的濃度下即有很強(qiáng)的抗氧化能力[11]。乞永艷等通過(guò)對(duì)豬油、核桃仁和色拉醬等易腐敗變質(zhì)的食品抗氧化實(shí)驗(yàn)，充分證明蜂膠對(duì)這些底物有很好的抗氧化作用。同時(shí)，蜂膠還能預(yù)防和治療多種疾病,若將其作為抗氧化劑添加到食品中，不但能起到抗氧化作用，而且還具有一定的食療保健作用。

3.4.2 天然的免疫強(qiáng)化劑

蜂膠中的蘆丁、槲皮素、高良姜素、咖啡酸、兒茶素等黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化作用，可刺激免疫機(jī)能和丙種球蛋白活性，增加抗體生成量，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，從而能增強(qiáng)機(jī)體的非特異性和特異性免疫功能。胡福良等[12]測(cè)定和比較了蜂膠水提液和醇提液對(duì)實(shí)驗(yàn)性高血脂SD大鼠血液和肝臟脂質(zhì)的影響，表明蜂膠能夠改善脂質(zhì)代謝，并具有一定的抗氧化作用。于曉紅等[13]采用氫化考的松免疫功能低下小鼠模型（HC小鼠模型），觀察蜂膠乙醇提取液（EEP）對(duì)HC小鼠免疫功能的影響。結(jié)果表明，EEP能夠改善免疫功能低下小鼠的體液免疫功能，增強(qiáng)抗體形成細(xì)胞的功能活性，提高溶血素的含量，并可使之恢復(fù)正常水平。

3.5 降血脂作用

蜜蜂醫(yī)療專家房柱發(fā)現(xiàn)蜂膠有降血脂效應(yīng)[10]。在研究中發(fā)現(xiàn)，蜂膠對(duì)心血管系統(tǒng)亦有明顯的改善作用，能夠軟化血管、降低血管脆性及異常的通透性，改善微循環(huán)，防止血管硬化，還可以增強(qiáng)心肌收縮力和血管韌性，降低血脂血糖，清除血管內(nèi)壁堆積物，有“心血管清道夫”之稱[,7]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，蜂膠對(duì)高血壓能使心臟收縮力增強(qiáng)，可調(diào)整血壓，并可有效抑制血小板聚集。臨床驗(yàn)證，蜂膠對(duì)高血壓、高膽固醇、動(dòng)脈粥樣硬化有預(yù)防作用，有防止血管內(nèi)膠原纖維和肝內(nèi)膽固醇堆積的作用。因此，服用蜂膠對(duì)高血壓、心臟病、腦血栓、動(dòng)脈硬化等心腦血管疾病有著特殊的醫(yī)療保健作用。

3.6 抗腫瘤作用

臨床與實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，蜂膠中的黃酮類、萜烯類物質(zhì)，尤其是多種倍萜類、二萜類、三萜類等是抗白血病、抗腫瘤的重要化合物，因此蜂膠具有顯著的抗腫瘤[14]作用。任峻峨等用2.5%、3.75%兩種濃度蜂膠丙二醇溶液對(duì)S180肉瘤細(xì)胞、EC艾氏癌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，結(jié)果表明，蜂膠對(duì)S180、EC細(xì)胞生長(zhǎng)均有明顯抑制作用。

4 展望

近年來(lái)，蜂膠產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛，已在食品、藥品、保健品、飲料及化妝品行業(yè)得到廣泛關(guān)注與應(yīng)用?？v觀近幾年各種技術(shù)在蜂膠提取加工中的應(yīng)用進(jìn)展，超臨界流體萃取工藝前景較好，有著新型綠色分離技術(shù)的美譽(yù)，提取物安全、無(wú)殘留、無(wú)污染，符合目前人們回歸原生態(tài)的需求，代表了未來(lái)蜂膠產(chǎn)業(yè)技術(shù)發(fā)展方向。

蜂膠成分復(fù)雜且生物學(xué)活性廣泛，除具有上述藥理作用外，還具有鎮(zhèn)痛及促進(jìn)組織再生、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、降血糖、抗過(guò)敏、治療胃腸疾病、防止肝硬化等作用。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)蜂膠藥理學(xué)作用的研究已經(jīng)表現(xiàn)出令人興奮的效果，值得我們?nèi)ド钊胩剿?。隨著對(duì)蜂膠有效成分提取純化、加工工藝、質(zhì)量控制、給藥途徑、體內(nèi)藥物作用和代謝途徑以及在農(nóng)業(yè)應(yīng)用等許多方面的研究與開(kāi)發(fā)，它必將帶給我們更大更多的驚喜。

[1]于英君，李淑華，郭麗新，等.蜂膠的生物活性與臨床應(yīng)用[J].中醫(yī)藥信息，2002，19（01）,27-28.

[2]徐響，張紅城，董捷.蜂膠功效成分研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2008（09）：286-287.

[3]郭伽，周立東.蜂膠的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中國(guó)養(yǎng)蜂，2000，51（2）：17-18.

[4]李彥杰，楊勇，闞健全.蜂膠化學(xué)成分及其生物活性[J].糧食與油脂，2003，（12）：43-44.

[5]魏書信，朱廣成.蜂膠在果蔬保鮮業(yè)中應(yīng)用研究及前景[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2005（09）：72-73.

[6]劉曉琳，繆曉青.蜂膠提取技術(shù)與應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)蜂業(yè)，2010,61（10）：34-36.

[7]馬衛(wèi)華.蜂膠提取技術(shù)及其主要應(yīng)用[J].養(yǎng)蜂科技，2004（06）：25-26.

[8]張偉，崔同，檀建新，等.蜂膠對(duì)食品致病菌抑菌作用研究[J].食品科學(xué)，1998，19（3）：114-115.

[9]王愛(ài)平，賈存英.蜂膠的藥用價(jià)值[J].時(shí)針國(guó)醫(yī)國(guó)藥，1998,9（5）：464.

[10]房柱.蜂膠的抗病毒作用[J].中國(guó)養(yǎng)蜂，1998,49（4）：15.

[11]郭芳彬.蜂膠的抗氧化作用[J].養(yǎng)蜂科技，2004，（1）：26-27.

[12]胡福良，李英華，等.不同方法提取的蜂膠中總黃酮含量的測(cè)定機(jī)體抗腫瘤與抗炎作用研究 [J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2005,5（3）：11-15.

[13]于曉紅，李淑華，李樹偉，等.蜂膠對(duì)小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥信息，2001,18（4）：53-54.

[14]欒金水，王南舟，田路.蜂膠的藥理作用研究 [J].中藥材，2000，23（6）：17-18.